Manual2009 110801180507 Phpapp02

Manual de práctica de Microbiología
en formato Digital
Maestra Altagracia Jiménez Díaz

en formato Digital
 Índice:
 Algunos equipos utilizados en microbiología
 Morfología y disposición de las células bacterianas
 Distribución de microorganismos en el ambiente
 Medios de cultivo
Métodos de siembra
 Las coloraciones
 Acción de las bacterias sobre los hidratos de carbono
Acción de las bacterias sobre las proteínas
 Hemólisis
 Pigmentos
 Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
 Estudio bacteriológico del agua y otros líquidos de consumo
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Digital
 Objetivo:
 Apropiar al
estudiante que se
inicia en el campo
de la
microbiología del
conocimiento, en
técnicas
bacteriológicas.
29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 3

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Equipos del Laboratorio de
Microbiología
 Asas y agujas bacteriológicas

 Placas de Petri.
 Porta objetos.
 Incubadora.
 Autoclave.
 Microscopio
 Mechero
 Nevera
 Tubo de ensayo
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Frasco de la Vela
 Se utiliza para Crear

la atmósfera para
microorganismos
microaerofilicos.
 Se obtiene un
ambiente de baja
tensión de oxigeno y
de 10 12 % de Co2
 La vela no debe colocarse
sobre los medios de cultivo
sino al lado, dentro de el
frasco.
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Placa de Petri.
 Las placas de Petri
son: recipientes de
vidrio, plástico u otros
materiales
constituidos por dos
piezas; una tapa y
una base, la base
descansa sobre la
tapa y se utilizan para
colocar los medios de
cultivo sólidos y se
logra el desarrollo de
cultivos en amplia
superficie y facilitar el
conteo de las colonias.
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Jarra de Gas Pak
 Se utiliza para
Crear la atmósfera
para
microorganismos
anaerobios.
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Porta Objetos
 Se utiliza para
preparar los frotis
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Asas y agujas
 Se utilizan para
pescar transportar
y sembrar el
material
bacteriológico
 Se esterilizan en el
mechero al rojo
vivo antes y
después de las
siembras
bacteriológicas.
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Tubos de ensayo
 El tapón de los
tubos se sostiene
con el dedo
meñique.
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Microscopio
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Autoclave
 Autoclave: utiliza vapor
de agua a 121 ºC durante
15'o 20'. Esta
temperatura se logra si se
obtiene una presión de
una atmósfera relativa
(dos atmósferas absolutas
o sea 15 libras de presión
por pulgadas al
cuadrado), ya que el
aumento de la presión
provoca aumentos
proporcionales en el punto
de ebullición del agua.
 Es el mecanismo de
destrucción microbiana
más efectivo, y bien
utilizado asegura
esterilización.(Destruye
la forma de vida
vegetativa y esporulada)
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AUTOCLAVE
 Se utiliza para
esterilizar y
funciona a 121°c
 15 libras de
presion por
pulgadas
cuadradas en un
tiempo de 15 a 20
minutos.
Incubadora
 Se utiliza para
proporcionar la
temperatura
optima a las
bacterias.
Contador de colonias.
 Se utiliza para el
conteo de
colonias.
Mechero de bunsen
 Utensilio metálico que
permite calentar
sustancias. Presentan
una base, un tubo, una
chimenea, un collarín y
un vástago. Con ayuda
del collarín se regula la
entrada de aire. Para
lograr calentamiento
adecuados hay que
regular la flama del
mechero a modo tal que
ésta se observe bien
oxigenada (flama azul).
Nevera
 Se utiliza para
conservar a una
temperatura
adecuada los
medios de cultivos
y cepas
bacterianas.
Nevera: laboratorio de microbiología
Microscopia
Morfología de las bacterias
 MORFOLOGIA Y DISPOSICIÓN DE LAS

CELULAS BACTERIANAS
 Se da una gran variedad de tamaños y
forma entre las bacterias.
 La mayoría de ellas oscilan entre 0,2 y
2,0 µm de diámetro y presentan una de
las tres morfologías básicas siguientes:
 La esférica o de coco (que significa
«baya»), la de bastoncillo o bacilo y la
espiral.
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Cocos
 Los cocos suelen ser esféricos, pero pueden ser
ovalados, alargados o con un lado aplanado.
Cuando los cocos se dividen para reproducirse
pueden permanecer unidos uno a otro. Los cocos
que permanecen en parejas tras dividirse se
llaman Diplococos.
 Aquellos que se dividen en dos planos y

forman grupos de cuatro se conocen
como Tétradas .
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Cocos
 Los que se dividen por tres planos regulares y
quedan divididos en grupos cúbicos de ocho se
llaman Sarcinas
 Aquellos que se dividen siguiendo planos al

azar y forman células en paquetes irregulares
son los: Estafilococos
 y si se presentan en cadenas se denominan

Estreptococos.
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Disposición de los cocos
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Bacilos
 Disposición de los bacilos:

 Los Diplobacilos aparecen en parejas tras la
división
 Los Estreptobacilos se presentan en cadenas.
Existen aún otros que son ovalados y se parecen
tanto a los cocos que se llaman Cocobacilos
 Bacilos en letras chinas
 Bacilos en palizada
 Sin embargo, la mayoría de los bacilos se
presentan de forma aislada.
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Disposición de los bacilos
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Bacterias espirales
 Las bacterias espirales pueden tener una
o más vueltas; nunca aparecen rectas.
Los bacilos curvados en forma de coma se
denominan vibrios .
 Otros, llamados Espirilos, poseen una
morfología helicoidal característica, que
recuerda un sacacorchos, con un cuerpo
celular bastante rígido .
 Hay aún otro grupo de bacterias espirales
llamadas Espiroquetas.
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Bacterias en Espiral
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Hongos levaduriforme
Levaduras
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Hongo filamentoso
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Hongo filamentoso
Colonia
 Colonia agrupación de microorganismos
de una misma especie.
 Características macroscópica de las
colonias:
 Olor: del cultivo puede ser agradable o
desagradable; fetal o frutal, amoniacal,
nauseabundo …
 Tamaño: Grande mediano, pequeño,
pequeñísima.
 Aspecto: Opaco, brilloso, transparente,
rugoso, algodonoso, aterciopelado.
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Estudio Macroscópico de las colonias
 Color: Amarillo, rojizo, blanco, cremas …
 Forma: Redonda, alargada, irregular …
 Bordes. Dentados festoneado filiforme, liso …
 Altura: Plana, elevada, cóncava, convexa …
 Tipo de cultivo: Puro, mixto y contaminado
 Puro: Esta formado por un solo tipo de
microorganismo (Para estudiar las propiedades de
un organismo dado es necesario manejarlo en un
cultivo puro)
 Mixto: Es la presencia de dos o mas especies de
microorganismo en el cultivo
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Cultivo contaminado
 Contaminado: es cuando aparece un
germen extraño fuera de la línea de
siembra.
 Cantidad de crecimiento del cultivo:
Abundante, abundantisimo, escaso, y
muy escaso
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Esquema de colonias con su:
forma,margen y elevación
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Colonias
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Consistencia de la Colonia:
para determinar la consistencia debes usar una
asa estéril, y tocarla cuidadosamente.
 Las colonias pueden ser:

 duras, viscosas, mucosas, secas, muy
secas, cremosas, etc.
 En general, al mayor parte de las
bacterias forman colonias de consistencia
más o menos cremosa, aunque existen
muchas excepciones
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Cultivo mixto
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Medios de cultivo
 Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de

nutrientes que en concentraciones adecuadas y con
condiciones físicas óptimas permiten un buen
crecimiento de los microorganismos. Contienen una
base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre
 Formula básica de los medios de cultivos: agua
cloruro de sodio, peptona. Extractos de carne o de
levadura.
 El agar no se utiliza como nutriente solo para
darle solidez a los medios de cultivos
 Para el crecimiento de las bacterias hay que
proporcionarles: los medios de cultivos apropiados la
temperatura optima y la atmósfera requerida
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Clasificación
 Medios de cultivos vivos o animado y medios de
cultivos muertos o inanimado
 De acuerdo a su consistencia o estado físico.
 Liquido: ejemplo caldo simple
 Semi-solidó: Agar semi sólido
 Sólido: Agar base
 El Liquido, Semi-solidó, Sólido depende de la
cantidad del agar que contengan los medios
 El agar no participa como nutriente (solo le
proporciona solides a los medios de cultivos.
 De acuerdo a su uso o finalidad: simple,
enriquecidos, selectivos, diferenciales y
especiales.
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Medios de cultivos
 Medio enriquecido: medio al que se le

añaden nutrientes extra y se utiliza para
microorganismos que tienen exigencias
nutricionales.
 Agar sangre, Agar chocolate, agar
cerebro-corazón, etc.
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Medios de cultivos
 Medio selectivo: medio que sólo

permite el crecimiento de un grupo
de microorganismos e inhibe el de
otros. Permite seleccionar y aislar
microorganismos a partir de
poblaciones mixtas
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Medio diferencial
 Medio diferencial: medio que permite revelar
características fisiológicas de los
microorganismos.
 Mac conkey: Cuando el microorganismo utiliza el

azúcar lactosa se observan colonias rosadas.
cuando las bacterias no utiliza la lactosa se
observan colonias claras o transparentes.
 EAM: en este medio la E coli se observa con brillo
verde metálico.
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Medios de cultivos
 Medio sintético: son los medios que
contienen una composición química definida
cuali y cuantitativamente.
 Se utilizan para el estudio de
requerimientos nutricionales y para obtener
resultados reproducibles.
 Medio simple: son los medios que
presentan la mínima cantidad de nutrientes
capaz de permitir el desarrollo de los
microorganismos no exigentes, contienen la
formula básica de los medios de cultivo.
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Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante:
 Caldo Lactosado Bilis Verde
Brillante: se utiliza en el tubo
de Durham.
 Si las bacterias fermentan la
lactosa aparece gas en el tubo
invertido (gas +)
 Esta reacción es producida por
el grupo coliforme. O
colibacilos.
 Si no es fermentada la lactosa
presenta
 (gas -).
 Este medio de cultivo es
selectivo para bacterias gram.
negativas.
 El verde brillante y la bilis
inhiben el crecimiento de
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bacterias Gram. positivas. 44

Agar sangre: contiene sangre de carnero
desfibrinada al 5 %
Es un medio enriquecido.
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Medio de Mac Conkey:
 Contiene el azúcar
lactosa y un indicador
que es el rojo neutro,
este medio es
selectivo para
microorganismos
Gram. negativos.
 Si la lactosa es
fermentada las
colonias se
observaran de color
rosado
 Si no las colonias se
observaran
transparentes.
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Eosina Azul de metileno
 Es un medio
selectivo y
diferencial
 Es selectivo para
bacterias Gram.
Negativas
 La E. coli crece
con brillo verde
metálico
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Manitol salado:
 Es un medio utilizado
para los Estafilococos.
 El indicador de PH es
rojo fenol.
 Si el microorganismo
fermenta el manitol se
tornará el medio
amarillo.
 Si no lo fermenta, se
tornará color rojo
cereza.
 Es fermentado por el
S. aureus.
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Métodos de Siembra
Sembrar una bacteria es el acto de
colocarla en un medio de cultivo
apropiado para promover su
crecimiento y desarrollo
Para desarrollar una bacteria invitro
hay que proporcionarle :
1-Nutrientes con los medios de cultivos
que requieran.
2-La atmósfera apropiada
3- La temperatura optima, entre otros.
El resultado de la siembra es el cultivo
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Métodos de Siembra
Medio: Líquidos o
caldos
Instrumento: Asa
Método: Dilución
Finalidad: poner la
bacteria en
suspensión
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Métodos de Siembra
Medio: Semisólido
Instrumento: Aguja
Método: Punción o
Picadura
Finalidad: observar
la Movilidad.
 Si crece en la línea de
siembra es inmóvil.
 Si crece fuera de la
línea de siembra es
móvil
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en tubo
Inclinado.
Instrumento: Asa o
aguja
Método: Estría en
superficie
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Métodos de Siembra
Medio de cultivo:
TSI
Método: Punción y
estrías en superficie.
Instrumento:
Aguja
Finalidad:
Observar los reacciones
(cambios) que ocurren en
la superficie y la
Profundidad.
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Interpretación: Lectura de TSI
 Amarillo (A): ácido

(fermentó el azúcar)
 *Rojo (K): alcalino (no
fermentó el azúcar)
 *Negro: presencia de H2S
(H2S+)
 *Burbujas o vacíos, con
levantamiento del medio:
 presencia de H2 + CO2
 H2 + CO2+
 Precipitado negro = H2S
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en
placa
de Petri
Método: Estrías por
Agotamiento.
Instrumento: Asa
Finalidad: Aislar
colonias
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en placa
de Petri
Método:
Embadurnamiento
Instrumento: Hisopo
Finalidad: Obtener
colonias confluentes.
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Pasos previos a toda coloración
 Hacer un frotis dejar secar y fijar.
 Frotis: Dispersar el material
bacteriológico en un porta objetos
 Secar: Dejar expuesto al aire
 Fijar: pasar tres veces por el calor
del la llama del mechero ( para
evitar que se desprenda durante los
lavados).
 También se puede utilizar licor de
Hoffman.
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Frotis:
Dispersar el material bacteriológico en un porta
objetos
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Preparación de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y

seco, se coloca una gota del material
bacteriológico que se va a teñir (si es
líquido) y se extiende o dispersa sobre
el porta objetos.
 Si es de un medio de cultivo sólido, se
coloca una gota de diluyente y el
material bacteriológico se homogeniza
y se dispersa en el porta objeto.
 Si es directo de la muestra se hace
rodar el hisopo con que se tomó la
muestra en el porta objeto.
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Preparación de un frotis
 El material se frota
directamente sobre el
portaobjetos, donde
puede visualizarse con
facilidad ( de los
cultivos en los medios
líquidos)
 El material colocado
en el portaobjetos se
deja secar al aire.
 Y se fija al calor del
mechero.
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Las coloraciones
 Los colorantes son sustancias capaces de ceder o
transmitir su color a otras.
 Los colorantes pueden ser según su estructura
química :
 1-Ácidos, básicos y neutros
 Colorantes ácidos son los que la propiedad colorante
radica en el ion con carga negativa, por lo que se
llaman aniónicos
 En los básicos ,por el contrario , el Ion coloreado es
el positivo , siendo llamado cationico.
 Los colorantes neutros son una sales complejas de
un colorante ácido y un básico
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Los colorantes
 De acuerdo con la estructura molecular, existen
en cada colorante dos grupos químicamente
activos: el grupo auxocromico, que le da a la
molécula su habilidad para reaccionar con el
sustrato correspondiente, y el grupo cromóforo
 ( ion coloreado) que es el lugar donde se verifica

la absorción o no de las distintas longitudes de
ondas luminosa en la producción del color.
 El proceso de coloración de las bacterias es un

intercambio iónico entre estas y el colorante
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 Las células bacteriana se pueden observar con el
microscopio óptico.
 La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea, y el medio
más simple de aumentar el contraste, es la
utilización de colorantes.
 Estos pueden emplearse para distinguir entre
tipos diferentes de células o para revelar la
presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos esporas, cápsulas,
paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.
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 Las células generalmente son tratadas
para coagular el protoplasma antes de
teñirlas, proceso llamado fijación.
 Para bacterias, la fijación por el calor es lo
más corriente, aunque también puede
fijarse con sustancias químicas como
formaldehído, ácidos y alcoholes.
 Después de la fijación, si se añade el
colorante, no se producen ulteriores
cambios estructurales en el protoplasma.
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 La fijación se realiza habitualmente en
células que han sido fijadas sobre un
portaobjetos, tratando después éste con
el agente fijador, y siguiendo
inmediatamente el proceso de tinción.
 La fijación produce habitualmente el
encogimiento de las células; la tinción,
por el contrario, hace que las células
aparezcan mas grande que como son
realmente, de manera que las medidas de
las células que han sido fijadas o teñidas
no pueden realizarse con mucha
precisión.
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Los colorantes
 La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos
que tienen alguna afinidad específica por los materiales
celulares.
 Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se
combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como los
ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
 Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de

metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros
colorantes son moléculas cargadas negativamente
(aniones) y se combinan con los constituyentes
celulares cargados positivamente, tales como muchas
proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina
ácida y el rojo Congo
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Los colorantes
 Algunos colorantes teñirán mejor sólo
después de que la célula haya sido
tratada con otra sustancia química, que
no es un colorante por sí mismo.
 Esta sustancia se denomina mordiente;
un mordiente habitual es el ácido tánico,
el lugol.
 El mordiente se combina con un
constituyente celular y lo altera de tal
modo que ahora sí podrá reaccionar con
el colorante.
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La tinción negativa
 Es el reverso del procedimiento de tinción usual: la
cápsula se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el
medio que las rodea.
 Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La

sustancia utilizada para la tinción negativa es un
material opaco que no tiene afinidad por los
constituyentes celulares y que simplemente rodea las
células, tal como la tinta china (que es una suspensión
de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un
colorante negro insoluble en agua).
 La tinción negativa es un modo satisfactorio de

aumentar el contraste de las células en la microscopia
óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la
presencia de cápsulas alrededor de las células
bacterianas.
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Coloración de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un médico
danés con estudios en bacteriología y farmacología.
 La coloración de Gram. tiene interés

taxonómico ya que divide las
bacterias en dos grandes grupos,
bacterias Gram positivas que se
tiñen de morado y bacterias
gram negativas que se tiñen de
rojo
 La coloración de Gram es positiva
compuesta y diferencial.
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Coloración de Gram
 La técnica revela diferencias constitutivas de la

pared celular entre bacterias Gram positivas y
Gram negativas.
 La pared celular de las bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano, la cuál
impide que escape el complejo cristal violeta-
lugol.
 Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las
Gram negativas es delgada y se encuentra unida
a una membrana externa lipídica, susceptible a la
decoloración con el alcohol-acetona, el que actúa
como un solvente orgánico.
 Los lípidos se disgregan con el alcohol acetona y
el decolorante penetra a la célula bacteriana
decolorándola.
29/12/2018 70
Pared celular de las bacterias Gram
positivas:
 El peptidoglicano se
dispone en varias capas lo
que le otorga grosor a la
pared.
 Atraviesan el
peptidoglicano
polisacáridos ácidos,
denominados ácidos
teicoicos.
 Los ácidos teicoicos son
de dos clases: poliglicerol
fosfato y poliribitol
fosfato.
 Las funciones primarias
de estos polímeros son la
estabilización del
peptidoglicano y la
captura de Mg++.
29/12/2018 71
Pared celular en bacterias Gram negativas
 Su pared celular es más delgada, pero más

compleja que la de los Gram positivas.
 El peptidoglicano se dispone en una sola capa,
pero por fuera de ella se encuentra una segunda
membrana denominada membrana externa.
 La membrana externa es una membrana
asimétrica, porque si bien la monocapa interna
está formada por fosfolípidos, la monocapa
exterior está formada por un tipo especial de
lípido, denominado lipopolisacárido (LPS).
29/12/2018 72
 El LPS es una molécula que contiene tres

regiones diferentes: el lípido A, el core y el
antígeno O.
 El LPS constituye una endotoxina, que se libera
cuando la bacteria se divide o muere.
 Es un potente estimulador de los macrófagos, lo
que causa la activa liberación de citoquinas,
responsables de las manifestaciones clínicas de
las infecciones por bacterias Gram negativas y
que varían desde una fiebre hasta el shock
séptico.
 En esta membrana externa se encuentran las
porinas.
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 Entre la membrana externa y la
membrana celular se crea un
compartimiento virtual, llamado espacio
periplásmico.
 El espacio periplásmico es una matriz
que incluye al peptidoglicano, enzimas,
proteínas captadoras de nutrientes y
sustancias de secreción.
 La membrana externa contiene
numerosas proteínas, siendo las porinas
las más abundantes.
 Se denominan así, porque forman poros
que comunican el exterior con el espacio
periplásmico.
29/12/2018 74
29/12/2018 75
 La membrana externa de las

bacterias Gram negativas
poseen porinas que son canales
cargados de agua y que
permiten la entrada y salida de
sustancias de la célula al
exterior y del interior de la
célula.
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Coloración de Gram.
 Protocolo
 Hacer un frotis
 Dejar secar al aire
 Fijar la muestra con calor a la
llama de una lámpara de alcohol
o con el licor de Hoffman.
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 Cristal violeta
 El lugol entra en las células y forma un
complejo insoluble con el cristal violeta.
 La mezcla de alcohol-acetona sirve para
realizar la decoloración. Las bacterias Gram.
positivas no se decoloran, mientras que los
Gram. negativas sí lo hacen.
 Para poner de manifiesto las bacterias Gram.
negativas se utiliza una coloración de contraste
de color rojo; safranina.
 Después de la coloración de contraste las
células Gram. negativas se observan de color
rojo, mientras que las Gram. positivas se
observan de color Morado.
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Interpretación
Gram negativas Gram positivas
29/12/2018 79
Tinción Bacteriológica de Gram.

El equipo para realizar
la tinción de Gram.
consta de:
Colorantes y
reactivos :
 Cristal Violeta, Yodo-
Lugol y Safranina.
Solvente:
Alcohol-Cetona.
Bandeja de
tinción.
Asa bacteriológica
o hisopo.
Frasco lavador.
Muestra
bacteriana sólida (agar),
líquida (caldo) o
espécimen clínico.
29/12/2018 80
Coloración de Gram. Paso 1.-
 Paso 1.- Cubrir la
preparación con
Cristal Violeta por
60 seg.
 y lavar
suavemente con
agua.
29/12/2018 81
preparación con
Yodo-Lugol por 60
seg y lavar
suavemente con
agua.

preparación con
Alcohol-Cetona
durante algunos
segundos (5-10)
y lavar
suavemente con
agua.

 Paso 4.- Cubrir
la preparación
con Safranina
por 60 seg y
lavar
suavemente con
agua.
 Secar y Observar
con lente de
100x
(inmersión).
preparándonos para la observación al microscopio
29/12/2018 85
Resultados de la coloración de Gram.
Bacterias teñidas de morado: Gram positivas
Teñidas de rojo: Gram negativas
Podemos observarle la forma, la disposición y la
propiedad tintorial.
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Coloración de Ziehl Neelsen
 La coloración de Ziehl Neelsen al igual que la de
Gram es positiva, compuesta y diferencial.
 Reactivos: fucsina básica fenicada - solución de
alcohol-ácido (3% de HCl en etanol de 95°) - azul
de metileno
Esta tinción permite diferenciar a los

microorganismos que son ácido alcohol
resistentes, de color rojo, de los que no lo son,
de color azul. Se utiliza en la identificación de
mycobacterias.
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Ziehl Neelsen
 La coloración ácido-resistente es otra coloración
muy usada para el examen microscópico de las
mycobacterias, y las nocardias.
 Debido al crecimiento lento de la mayoría de las
mycobacterias, los extendidos para identificar
bacilos alcohol-ácido resistente juegan un papel
importante en el diagnóstico temprano de la
infección por mycobacterias.
 El método clásico de coloración ácido-resistente
es el descubierto por Ziehl y Neelsen en el año
1882 y ampliamente usado hasta la fecha para
el diagnóstico de Mycobacterium
Tuberculosis y Mycobacterium leprae.
29/12/2018 88
 Es una coloración específica para colorear
bacterias cuyas paredes celulares
contienen largas cadenas de ácidos
grasos.
 Por su alto contenido de acido micolico
(cera no saponificable) tienen la
capacidad de unir el colorante fucsina a
su pared de manera que hacen a la célula
resistente a la decoloración con alcohol
ácido.
 Son bacilos ácido-alcohol resistente
(BAAR), las mycobacterias, y las
nocardias.
29/12/2018 89
Coloración de Ziehl Neelsen
 REALIZACIÓN
 Preparar un frotis bacteriano.

 Se deja secar al aire y se fija al calor.
 Cubrir la preparación con carbofucsina.
 Calentar la preparación con una lámpara de alcohol durante 5
min. No debe hervir.
 Si se evapora, se añade más carbofucsina para que no se seque
en ningún momento.
 Lavar con agua el resto de colorante.
 Decolorar con la mezcla alcohol-ácido por tres minutos
 Lavar con agua .
 Teñir con azul de metileno 1 min.
 Lavar con agua el resto de colorante.
 Secar la preparación.
 Examinar al microscopio.
29/12/2018 90
Resultados de la coloración de
Ziehl Neelsen
BAAR
29/12/2018 91
Resultados de la coloración de
Ziehl Neelsen

Coloración de Cápsula
 La tinta china o la nigrosina dan un fondo

oscuro sobre el cual la cápsula de
terminados microorganismos como el
Cryptococcus neoformans se observará
como un halo claro alrededor del
microorganismo.
29/12/2018 93
 Método con tinta china (Método de Gin)
 Técnica
 Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo.
 Tomar una pequeña cantidad del material
bacteriológico del cultivo y mezclar con las gotas de
dextrosa.
 Colocar una gota de tinta china en un porta objetos
y añadir una gota de la mezclar anterior y con el
extremo de un portaobjetos , hacer un frotis delgado
y secar al aire, fijar con alcohol metílico por un
minuto.
 Teñir por 2 minutos con Cristal violeta.
 Lavar con abundante agua, secar y observar al
microscopio.
29/12/2018 94
Resultado
29/12/2018 95
LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS
(Respiración – Fermentación)
 El termino respiración se refiere a todas las

reacciones que ocurren dentro de las células
de liberación de energía (oxidaciones)
 Es posible hacer una distinción entre las

oxidaciones que utilizan oxigeno molecular y
aquella que no lo hacen como sigue:
 Respiración es la oxidación que utiliza

oxigeno molecular como aceptor primario de
hidrogeno AEROBIA y la oxidación que tiene
lugar en ausencia de oxigeno molecular
ANAEROBIA.
29/12/2018 96
 La respiración y la fermentación son los dos
mecanismos de que dispone la célula viva para
proveerse de energía; ambos llevan a cabo la
oxidación del sustrato.
 La condición de aerobio o anaerobio puede ser

estricta. Es decir ser una necesidad especifica,
en tal caso recibe el nombre de anaerobio
obligatorioas o aerobios obligatorios,
posiblemente este ultimo grupo posee enzimas
esenciales, las cuales funcionan únicamente en
el estado reducido y son particularmente
sensibles a la inactivación del oxigeno.
29/12/2018 97
 Otras son facultativas y son capaces de

vivir aeróbica o anaerobicamente.
 Microaerofilicos : han sido llamados

aquellos organismos que requieren
oxigeno libre en menor concentración
que la existente en la atmósfera.
 Medio de cultivo para el estudio de la
respiración bacteriana es el Caldo de
Thioglicolato
29/12/2018 98
Tipos de respiración bacteriana
 Aerobia: crece en la superficie del tubo

Anaerobia: crece en la profundidad del
tubo de caldo de thioglicolato de sodio
 Microaerofilica:crece debajo de la zona
oxigenada del tubo de caldo de
thioglicolato de sodio
 Facultativa: crece en todo el tubo de
caldo de thioglicolato de sodio
29/12/2018 99
La respiración bacteriana
Medio de cultivo Caldo de thioglicolato de sodio
y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros
29/12/2018 100
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE
CARBONO
Durante el proceso del metabolismo algunas

bacterias son capaces de reducir a los
carbohidratos a compuestos menos complejos
que pueden penetrar en el interior de las células.
Para que se den estas reacciones es preciso que

los microorganismos sean capaces de elaborar
enzimas.
29/12/2018 101
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS
HIDRATOS DE CARBONO
 La mayoría de las bacterias

heterótrofas metabolizan la glucosa,
pero la degradación sigue distintas
direcciones, según la constitución
enzimática de las diversas especies
de bacterias.
29/12/2018 102
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE
LOS HIDRATOS DE CARBONO
 Para realizar esta práctica se

requiere de medios de cultivo que
contengan azucares

TSI
 contiene tres azúcares que son:

glucosa, lactosa y sacarosa
contiene también sulfato amínico
ferroso, que reacciona con el
acido sulfhídrico, con el cual se
determina la formación de H S 2
(sulfuro de hidrogeno)un
precipitado de color negro.

 Interpretación:
 Se verifican varias reacciones,
 Ninguna reacción, alcalino superficie/alcalino fondo
(K/K). El medio se queda inerte, no cambia de color
por tanto es un “No Fermentador” y se descarta
Enterobacteriaceae.
 Alcalino superficie/Acido fondo (K/A), significa solo
fermentación de la glucosa, por tanto, es un “No
fermentador de lactosa” (o sacarosa ).
 Acido superficie/Acido fondo (A/A), significa que se
trata de un fermentador de lactosa (o sacarosa en
TSI).
 Alcalino superficie/Acido fondo con precipitado negro,
se reporta como H2S positivo.
 Además de las características anteriores se pueden
observar burbujas o rompimiento del medio debido a la
producción de gas en el medio.
29/12/2018 105
Interpretación:
TSI

MAC-CONKEY:
 Es un medio de cultivo selectivo y diferencial

 Es un medio de cultivo selectivo para bacterias
Gram. negativas
 Este medio contiene el azúcar lactosa y un
indicador de PH( rojo neutro), entre otros
componentes.
 Si la bacteria fermenta el azúcar
 las colonias se tornan rosadas.
 Si no la fermenta las colonias se observan
transparentes.
29/12/2018 107
Mac Conkey se observan Colonias Rosadas.
Resultado: Lactosa Positivo
29/12/2018 108
Mac Conkey: Colonias Claras o Transparentes
Resultado: Lactosa Negativo
29/12/2018 109
Interpretación:
 Se verifican dos reacciones

 Colonias rosadas la bacteria
fermento la lactosa
 Colonias transparentes la bacteria
no fermento la lactosa
29/12/2018 110
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE
(CLBVB):
 Es un medio de cultivo selectivo

para Gram. negativos. En tubos de
Durham cuando hay gas en el tubito
invertido nos indica que hay
presencia de gas por tanto ha
ocurrido la fermentación de la
lactosa
 Esta reacción es producida por los
coliformes .
29/12/2018 111
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE (CLBVB):
 Interpretación:
 Si se observa un desplazamiento en
el tubito invertido se reporta:
 gas +
 Si el tubito invertido permanece
lleno del liquido se reporta: gas -
29/12/2018 112
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE
BRILLANTE.
GAS POSITIVO GAS NEGATIVO

Prueba de la Coagulasa
 cepa de Staphylococcus
 La coagulasa actúa como una enzima
termoestable que permite diferenciar el
Staphylococcus aureus del resto de los
Estafilococos coagulasa negativos.
 Se producen dos tipos de coagulasa, la
unida a la pared celular y la liberada por la
célula como coagulasa libre y es la
detectada por la técnica en tubo.
 La coagulasa actúa sobre la protrombina
para producir trombina que actúa sobre el
fibrinógeno para formar el coagulo.
29/12/2018 114
Interpretación:
 Si se forma un coagulo la prueba

es: positiva
 Si no se forma el coagulo la prueba
es: negativa.
 Staphylococcus aureus forma un
coagulo, es coagulasa +
 Staphylococcus que no forman
coagulo son: coagulasa –
29/12/2018 115
Interpretación:
 Coagulasa +  Coagulasa -
29/12/2018 116
Prueba de oxidasa
 Fundamento:
 La Prueba de la Oxidasa hace una diferenciación
inicial de las bacterias Gram. negativas.
 Se basa en que determinadas bacterias poseen las

enzimas citocromo oxidasa o indofenol oxidasa,
que catalizan el transporte de electrones.
 En esta prueba, un tinte incoloro, como el

dihidrocloruro de p-fenilendiamina sirve como un
aceptor artificial de electrones para la enzima
oxidasa.
 El tinte es oxidado y forma el compuesto coloreado,
azul de indofenol.
29/12/2018 117
Prueba de oxidasa
29/12/2018 118
La prueba de la Catalasa
 Esta prueba permite diferenciar los microorganismos
aerobias y facultativas Catalasa POSITIVA de las
anaeróbicas y de las Microaerofilicas las cuales son
Catalasa negativa
 La catalasa es una enzima respiratoria, es una
porfirina de hierro cuya funcion es desdoblar
los peroxidos en H2O y O2
 Se utiliza en el laboratorio para diferenciar el
Estafilococos de Estreptococos
29/12/2018 119
Prueba de la Catalasa+
29/12/2018 120
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LAS PROTEINAS
Proteólisis
Durante su metabolismo La proteólisis es la

las bacterias que poseen degradación de las
proteínas.
enzimas proteolíticas son El resultado final de la acción
capaces de desdoblar las proteolítica es la
proteínas que son producción de
aminoácidos.
moléculas demasiado
grandes para poder
penetrar en las células
bacterianas razón por la
cual tienen que ser
desarticuladas en
compuestos más
sencillos para que las
células puedan utilizarla
como elemento nutritivo.
29/12/2018 121
INDOL
 El Indol es uno de los productos

de degradación metabólica del
aminoácido triptofano.
 Las bacterias que poseen la
triptofanasa son capaces de
hidrolizar el triptofano con
producción de indol.
 La producción de indol es una
característica importante para la
identificación de muchas especies Anillo Anillo rojo
de microorganismos.
 La prueba de indol está basada
amarillo +
en la formación de un anillo rojo -
cuando el indol reacciona con el
grupo aldehído del p-
dimetilaminobenzaldehído.
 (reactivo de Kovacs )
 Este es el principio activo de los
reactivos de Kovacs y Ehrlich. El
medio de cultivo utilizado debe
ser rico en triptofano.
29/12/2018 122
UREA
 Es una prueba que se

realiza para determinar si la
bacteria posee la enzima
ureasa (esta enzima
descompone la urea en
amoniaco).
 El medio de cultivo es un
caldo rico en urea el cual
posee un indicador de PH el
cual se torna (fucsia) en
medios alcalinos.
 Resultados: el desarrollo de
un color fucsia indica que la
prueba es positiva.
Si no hay el desarrollo de un
color fucsia indica que la
prueba es negativa
29/12/2018 123
Gelatina
 Es una prueba que se

realiza para determinar Resultados:
si la bacteria es capaz de
licuar la gelatina por la NEGATIVA
presencia de la enzima  Al sacar la prueba de
Gelatinasa. gelatina de la nevera está
 El medio de cultivo es gelificada
gelatina.
 El fundamento de la
prueba es la licuación
irreversible de la
gelatina
 Esta prueba hay que  POSITIVA
llevarla a la nevera por  Al sacar la prueba de
una o dos horas después gelatina de la nevera
de sacarla de la está
incubadora.
 liquida (licuación
irreversible)
29/12/2018 124
prueba
ACCIÓN DESustrato Enzima
SOBREProducto
Interpretación
LAS BACTERIAS LAS
final
PROTEINAS
urea Caldo de ureasa Amoniaco Fucsia+
Urea Limoncillo-
indol Caldo Triptofanasa Indol Añadir
triptonado o Kovacs
peptonado Anillo rojo+
Anillo
amarillo-
Gelatina Gelatina gelatinasa Licuación Refrigerar
Irreversible Liquida +
Gelifica -
Lisina Lisina Iron Descarboxilasa Cadaverina Fondo morado+
Fondo amarillo-
Agar (LIA)
Superficie rojo
Ácido alfa ceto con fondo
Desaminasa carbónico amarillo+
Sin cambio-
Precipitado negro
H2S
29/12/2018 125
HEMOLISIS
 Es la destrucción de los glóbulos rojos. Muchos
organismos producen sustancias que disuelven
los glóbulos rojos, estas sustancias se
denominan Hemolisinas.
 La Hemólisis se puede observar en medio de
cultivo de agar sangre.
 Cuando las bacterias producen hemolisinas
solubles que dan por resultado la aparición de
una zona clara transparente alrededor del
crecimiento de la colonia, se ha producido una
Hemólisis tipo Beta.
29/12/2018 126
HEMOLISIS
 Otros microorganismos producen otro tipo
de hemolisinas que originan cambios en la
hemoglobina de los glóbulos rojos
(transformación a meta hemoglobina) la
cual se hace visible por una coloración
verde alrededor de las colonias. Entonces
se dicen que han producido una
Hemólisis tipo Alfa.
 Cuando no se produce ningún cambio se
le denomina Hemólisis tipo Gamma.
29/12/2018 127
HEMOLISIS: Alfa, Beta y Gamma
No Hemolitica Beta
Alfa
29/12/2018 128
Pigmentos
 LOS PIGMENTOS
 Son sustancias coloreadas metabolizadas por
microbios.
 Uno de los caracteres más llamativos de los
cultivos es la pigmentación o cromo génesis.
 Se denomina endopigmento cuando el pigmento
no se segrega al exterior sino que queda en el
interior de la célula bacteriana
 Se denomina exopigmento (Pseudomonas)
cuando el pigmento se segrega además de las
colonias al medio exterior.
29/12/2018 129
Exopigmento
 Exopigmento
(Pseudomonas)
cuando el
pigmento se
segrega además
de las colonias al
medio exterior.
 Es de color verde
29/12/2018 130
Endopigmento
 Se denomina
endopigmento
cuando el pigmento
no se segrega al
exterior si no que
queda en el interior de
la célula bacteriana
 Staphylococcus aureus
 Endo pigmento de
color amarillo dorado
29/12/2018 131
Endopigmento
29/12/2018 132
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS QUIMIOTERAPEUTICOS.
Antibiograma
 La determinación de la  Esto significa que un

sensibilidad resultado “sensible”
antimicrobiana a los implica una alta
aislamientos bacterianos probabilidad de que el
que tienen significado paciente va a responder
clínico es una de las al tratamiento con ese
principales funciones del determinado
laboratorio de antimicrobiano. Y un
microbiología. resultado dado como
 El objetivo principal de “resistente” es casi
las pruebas de seguro que falle con ese
sensibilidad es predecir tratamiento.
el éxito del tratamiento  La prueba de
con los antimicrobianos sensibilidad mas usada
ensayados. es el método
Estandarizado de Disco-
Difusión (Kirby-Bauer)
Antibiograma
 Método de la prueba: Difusión –Kirby Bauer

 Método de la siembra: Embadurnamiento
 Medio de cultivo: MH
 Instrumento de siembra : Hisopo
 Resultados: Sensible, resistente e intermedio
 Sensible: si al rededor del disco de sensibilidad el
microorganismo no crece y se forma un halo claro de
inhibición.
 Resistente: si al rededor del disco de sensibilidad el
microorganismo crece y NO se forma un halo claro de
inhibición.
 Intermedio :si alrededor del disco de sensibilidad se forma
un pequeño halo o si el halo es grande pero aparecen
colonias de bacterias mutantes
Resistente
Antibiograma
Sensible
29/12/2018 135
Antibiograma
 SENSIBLE: Si alrededor del disco se forma un

halo de inhibición que corresponda a los puntos
de corte establecidos (CLSI) para cada
combinación de microorganismo/antimicrobiano
 Esta categoría implica que una infección dada por
la cepa en estudio puede ser tratada
apropiadamente con dosis de antibiótico
recomendada para el tipo de infección y la
especie infectante a menos que hubieran
contraindicaciones.
29/12/2018 136
Antibiograma
 RESISTENTE: No se forma un halo

claro alrededor del disco de
sensibilidad.
 La bacteria crece alrededor del
disco.
29/12/2018 137
Producción de ß-
lactamasas.
Las enzimas son codificadas por:
 Genes de los cromosomas.

 Plásmidos extracromosomales.

Su producción puede ser :
 Constitutiva (cuando se hace de

manera constante).
 Inducible, es decir, luego de la

exposición de la bacteria al
antibiótico.
29/12/2018 140
Las ß-lactamasas rompen el anillo
lactámico de penicilinas.
29/12/2018 141
Sustancias más estables frente a la
acción de las ß-lactamasas.
 Las cefalosporinas de espectro

extendido (ceftazidima, cefotaxima y
ceftriaxona).
 Losantibióticos monobactámicos
como aztreonam.
29/12/2018 143
Estadísticas
 En 1994, fue reportado que 1.3% a

8.6% de los aislados clínicos de E.
coli y Klebsiella pneumoniae eran
resistentes parcial o totalmente a
ceftazidima y hasta en 50% de los
casos, tal propiedad estaba
relacionada con la síntesis de ß-
lactamasas de espectro extendido.
29/12/2018 144
RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS
ß-LACTÁMICOS.
Compuestos
B- Lactamicos.
• Penicilinas.
• Cefalosporinas.
• Monobactámicos.
• Carbapenems.
29/12/2018 146
Principales mecanismos de resistencia a los
ß-lactámicos
 Cambios en las proteínas

fijadoras de penicilina.
 Alteraciones en las porinas de la
membrana externa.
 Producción de ß-lactamasa que
inactivan al antimicrobiano.
29/12/2018 147
Modificación de las proteínas fijadoras de
penicilina.
 Mutación de los genes que codifican

para estos péptido.
 Adquisición de genes extraños que
codifican para nuevas proteínas
fijadoras de penicilina.
29/12/2018 148
Composición de la envoltura de las bacterias
Gram. positivas (A) y Gram. negativas (B).
29/12/2018 149
Impermeabilidad de la pared.
29/12/2018 150
Bacterias que modifican las
porinas de su cápsula externa .
 E. coli.
 Pseudomonas aeruginosa .
 Serratia marcescens.
29/12/2018 151
IMPORTANCIA CLÍNICA DE LA
RESISTENCIA BACTERIANA.
MEDIDAS PARA MODIFICAR LA
VELOCIDAD CON QUE SE
DESARROLLA LA RESISTENCIA.
 El uso racional de estos

medicamentos.
 La educación de los pacientes.
 La selección adecuada del
régimen antibiótico.
29/12/2018 153
BACTERIAS QUE SON RESISTENTES
POR LA ACTIVIDAD DE ß-LACTAMASAS
DEL GRUPO 2.
 Escherichia coli.
 Klebsiella spp.
 Proteus spp.
29/12/2018 154
 El enterococo es un
microorganismo patógeno que
actualmente presenta
insensibilidad intrínseca a varios
antibacterianos comunes y a
ciertos compuestos como
vancomicina y otros antibióticos
glicopéptidos de reciente
desarrollo.
29/12/2018 155
 De acuerdo con los reportes más
recientes, emitidos por los
Centros para el Control de
Enfermedades de Atlanta, en
Estados Unidos la prevalecía de
cepas nosocomiales de
neumococo resistente a
vancomicina es de 10% a 12% y
dicha cifra va en aumento.
29/12/2018 156
 La resistencia a vancomicina es, en
estos momentos, un motivo de
creciente preocupación para la
comunidad médica, ya que tal
antibiótico era considerado como la
última herramienta para combatir
las infecciones causadas por
gérmenes multirresistentes, en
particular estafilococo coagulasa
negativo y S. aureus resistente a
meticilina.
29/12/2018 157
ACCIÓN DE LOS AGENTES QUÍMICOS: ANTISÉPTICOS Y
DESINFECTANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS
 Determinar la acción de los

agentes químicos: antisépticos y
desinfectantes sobre los
microorganismos e interpretar los
resultados tiene importancia para el
área de salud
29/12/2018 158
 El antiséptico o el desinfectante en el
disco difunde a través del agar.
 En la medida que aumenta la distancia al
disco, disminuye logarítmicamente la
concentración del antiséptico o el
desinfectante, produciéndose en el agar
un gradiente de concentración del
antiséptico o el desinfectante alrededor
de cada disco.
 Continua-----
29/12/2018 159
 Concomitantemente con la difusión
del antiséptico o el desinfectante, la
bacteria que fue inoculada en la
superficie y que no es inhibida por el
antiséptico o el desinfectante
continúa su multiplicación hasta
tener un crecimiento visible.
 En las áreas donde el antiséptico o el
desinfectante inhibió la bacteria, se
produce una zona de inhibición del
crecimiento alrededor de cada disco.
29/12/2018 160
Antiséptico / Desinfectante
29/12/2018 161
Resultados
 Eficaz : Si el microorganismo no crece
alrededor del disco impregnado de
antiséptico o desinfectante
 Ligero Eficaz : Si el microorganismo
crece ligeramente alrededor del disco
impregnado de antiséptico o
desinfectante
 No Eficaz : Si el microorganismo crece
alrededor del disco impregnado de
antiséptico o desinfectante
29/12/2018 162
 ESTUDIO BACTERIOLOGICO DEL
AGUA Y OTROS LIQUIDOS DE
CONSUMO
29/12/2018 163
Estudio bacteriológico del agua
y otros líquidos de consumo
 Para determinar la presencia de

coliformes y contaminación fecal se
realizan dos pruebas:
 La prueba preliminar _estadística y
la prueba confirmatoria.
29/12/2018 164
Prueba Preliminar
 Para hacer la prueba
preliminar se utilizan 5
tubos de caldo lactosado
Bilis Verde Brillante a los
cuales se les añade 5
ml. De la muestra en
estudio.
 Se lleva a la incubadora.
a las 24 horas se lee
cuantos tubos hay
positivos y cuantos
tubos negativos,
utilizando una tabla
ESTÁNDAR.
 Se obtiene el numero
mas probable de
coliformes presentes en
la muestra.
29/12/2018 165
Tabla para obtener el No. Mas probable de
coliformes en el liquido estudiado
Tubos de C.L.B.V.B.
NEGATIVOS POSITIVOS No. Mas probable de

coliformes en el liquido
estudiado
5 0 0
4 1 200
3 2 510
2 3 920
1 4 1,610
0 5 Mas 1610
29/12/2018 166
IMViC
 El IMVIC esta conformado por 4 pruebas:
 Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskawer y
Citrato.
29/12/2018 167
IMViC
Resultados:
++-- E. coli
29/12/2018 168
IMViC
Resultados:
--++
Klebsiella
o Enterobacter
29/12/2018 169
La prueba del IMViC puede ser sustituida por una prueba de
movilidad en semisolido y una prueba de indol
 La E. coli: indol Klebsiella es

positivo inmóvil
 Es una bacteria Indol negativo
móvil
 Brillo metálico o Enterobacter
en EAM  Indol negativo
 Es móvil
29/12/2018 170
sembrando en Eosina azul de
metileno(EAM).
La E. coli crece con brillo verde

metálico.
La E. coli es la bacteria que se toma
como índice de contaminación fecal
29/12/2018 171
Eosina Azul de Metileno
EAM con brillo
29/12/2018 172
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
 Cándida albicans
 Tubo
germinativo
positivo
29/12/2018 173
Test de Camp
 Para diferenciar a
los estreptococos
grupo B
29/12/2018 174
Sensibilidad a la optoquina / Streptococcus pneumoniae
(en agar sangre
29/12/2018 175
 Bacilos gram.
Negativos
Fermentadores de
Glucosa
 Haemophilus
influenzae
 Coloración de Gram.
 Forma: Coco Bacilos
 Propiedad tintorial.
Gram. Negativo
29/12/2018 176
29/12/2018 177
29/12/2018 178
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
 Diplococos gram.
Negativos
 Neisseria
gonorroheae
 Coloración de Gram.
 Forma. Cocos
 Disposición:
diplococos
arriñonados
intracelulares
 Propiedad tintorial.
Gram. negativo
 ( Cocos teñidos de
rojo de rojo)
29/12/2018 179
Prueba de oxidasa
 Prueba de
oxidasa + en la
N. gonorroheae
 igual que N.
meningitidis
29/12/2018 180
Control de Microorganismos
 1.- De qué métodos se vale el hombre para el
control de los microorganismos?
 De agentes físicos, químicos y quimioterapeuticos.
 2.- Define los siguientes términos:
 Esterilización: Es el proceso de destruir todas
las formas de vida microbiana.
 Estéril: Libre de vida de cualquier clase.
 Desinfectante: Es un agente que tiene la propiedad
de matar las formas de desarrollo, pero no
necesariamente las esporas resistentes de
microorganismos patógenos.
 Se aplica en superficies inanimadas (pisos, mesas,
paredes).
29/12/2018 181
 Desinfección : Es la operación de destruir agentes
infecciosos.
 Antiséptico: Sustancia que impide el desarrollo de
microorganismos por destrucción o inhibición de su
crecimiento o actividad. Contrario al desinfectante se
aplica sobre el cuerpo.
 Séptico: Caracterizado por la presencia de
microorganismos perjudiciales en el tejido vivo.
 Bactericida: Agente que mata a las bacterias
(Acción irreversible).
 Bacteriostático: Agente que inhibe la multiplicación
bacteriana (Acción reversible).
 Germicida: Agente que mata microbios.
 Desgerminación: Procedimiento encaminado a
disminuir el numero de gérmenes en un área, tal es el
caso de aseos de pisos y descontaminación de paredes y
techos.
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Agentes antimicrobianos
 Agentes antimicrobianos: son los que interfieren en el
crecimiento y la actividad de los microbios y se
denominan terapéutico (se utilizan en el tratamiento de
las infecciones).
 3.- Cuáles son los factores que influyen sobre la
esterilización y la desinfección? La hidratación, el
tiempo, la temperatura, concentración, materia orgánica
extraña, pH.
 4.- Cuál es el modo de acción de los agentes
antimicrobianos?
 Daños a la pared celular.
 Alteración de la permeabilidad celular.
 Alteración o coagulación de las moléculas de proteínas y
de los ácidos nucleicos.
 Inhibición de la acción enzimática.
 Mecanismos genéticos.
29/12/2018 183
 5.- Control por agentes físicos.
 Cuáles son los agentes físicos más usados?
 La temperatura.
 Radiaciones.
 Filtración.
 Gases.
 Presión osmótica.
 6.- Por qué mata el calor seco a las bacterias?
Porque les coagula las proteínas y las deshidrata.
 Por qué mata el calor húmedo a las bacterias?
 Por hidrólisis y coagulación de las proteínas

 7.- Mencione los medios mas usados
para matar bacterias por calor
húmedo: el autoclave, la ebullición, la
tindalización, Pasteurización.
 8.- Entre los agentes químicos capaces
de matar bacterias, cuáles son los más
usados? Alcoholes, fenol y compuestos
fenolicos, metales pesados y sus
compuestos, agentes oxidantes, colorantes,
detergentes, gases.

 10.- Cuál es el mecanismo de acción de los
antibióticos?
 Inhibición de la formación de la pared celular.
Ej.: Penicilina, cesfalosporina, vancomicina.
 Efecto sobre la membrana celular.
Ej.:Polimicina, nistatina, anfotericina, etc.
 Inhibición de la síntesis proteica. Ej.:
tetraciclina, cloranfenicol, gentamicina, neomicina.
 Acción sobre los ácidos nucleicos. Ej.:
griceofulcina, antinomicina.
 inhibición de metabolitos esenciales, los sulfas
que compiten con el paba.
29/12/2018 186
 1.- En qué consiste cultivar una bacteria? Es el
procedimiento por el cual promovemos el crecimiento de
los microorganismos in vitro y el medio por el cual
estudiamos su fisiología.
 2.- Cuál es la formula básica de los medios de
cultivo?
 Agua
 Na Cl
 Peptona
 Extracto(levadura o carne)
 3.- Cómo se clasifican los cultivos según su estado
físico?
 Líquidos
 Semi-solidó
 solidó
29/12/2018 187
 4.- Cómo se clasifican los cultivos según su uso y finalidad?
 Enriquecidos
 Diferenciales
 Selectivos
 Especiales
 Simples
 5.-Define:
 Medio de cultivo simple: crecen en ellos microorganismos no
exigentes.
 Medio de cultivo enriquecido: contienen nutrientes extra
como el agar sangre y agar chocolate
 Medio de cultivo selectivo: medios en los que se favorece el
desarrollo de determinado microorganismo, al contener sustancias
inhibidoras para los demás gérmenes. MC, EAM etc
 Medio de cultivo diferencial: medios generalmente sólidos,
que le imparten algunas características especiales a las colonias de
determinado microorganismo, por medio de cual podemos fácilmente
identificarlo. MC y EAM
29/12/2018 188
 6.- Cómo se le llama a la sustancia que
proporciona solidez a los medios de
cultivo? agar
 7.- Qué son los pigmentos bacterianos
y como se clasifican? son sustancias
coloreadas elaboradas por las bacterias
 Exopigmento
 Endopigmento.
29/12/2018 189
Bioseguridad
 La Bioseguridad no solo esta limitada a un mero listado de

normas de trabajo sino que requiere de participación.
 Es el conjunto de medidas preventivas destinadas a
proteger la salud de los trabajadores, los usuarios del
servicio y la preservación del medio ambiente frente a
riesgos de agentes biológicos, físicos o químicos.
 agentes físicos, químicos y biológicos en sus áreas de
trabajo, a los usuarios del servicio y preservar el
ambiente.
 La Bioseguridad se concibe hoy como:
 Un derecho de la población (que exige la protección de las
personas y del ambiente)
 Derecho de los pacientes
 Derecho de quienes trabajan en ellos. Se relaciona así con
la higiene hospitalaria y el control de las infecciones
nosocomiales y con la higiene y la seguridad en el trabajo
29/12/2018 190
Objetivos de las normas de
Bioseguridad
 Reducir el riesgo de accidentes en el personal que
labora en los laboratorios de microbiología
provocado por las acciones que estos realizan.
 Reducir la contaminación ambiental producto de los

desechos emanados de los laboratorios
 Asegurar la integridad de las muestras

bacteriológicas contra la degradación o
contaminación de las mismas que pueda poner en
peligro la validez de los resultados.
 Proteger la salud del personal que labora en

laboratorios frente a riesgos asociados con
29/12/2018 191
Bioseguridad
 Normas generales de bioseguridad

 Colocar la señal de Riesgo Biológico.
 Utilizará bata de trabajo. Evitar su uso fuera de los
ambientes del laboratorio.
 Utilizar guantes, mascarillas, lentes y/o cubreboca
para todos los trabajos, que obliguen el contacto de
material infeccioso del nivel 4
 Evitar entrada del personal ajeno al laboratorio
durante la jornada de trabajo
 Durante el trabajo deberá mantenerse las puertas
cerradas
 No comer, beber, fumar, aplicarse cosméticos dentro
del ambiente de laboratorio
 Lavarse las manos antes y después de manipular el
material biológico con jabón líquido.
 Usar toallas desechables para el secado de las
manos.
 No utilizar las neveras para almacenar alimentos.
29/12/2018 192
Bioseguridad
 No conservar alimentos en el área de

trabajo del No manipular material
infeccioso en el área de papelería.
 No reencapuchar las agujas, pues es una
fuente importante de accidentes corto
punzantes.
 En caso de ruptura de material de vidrio,
no recoger vidrios rotos con los dedos.
29/12/2018 193
Bioseguridad
 Descartar agujas u otros materiales

punzocortante en recipientes de paredes
gruesas, NUNCA EN LA BASURA COMÚN
 Descontaminación de los desechos
contaminados antes de su eliminación
según tipo
 Disponer de manual de procedimientos
para toma de muestras variadas
29/12/2018 194
Bioseguridad
 Todo el personal del laboratorio deberá
ser sometido a un examen médico
completo, que debe comprender una
historia clínica detallada al momento de
su incorporación a la institución, este
debe ser repetido una vez al año
 Todo el personal del laboratorio recibirá
inmunización protectora según área
específica en que labore, bajo supervisión
médica y según criterio epidemiológico
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Bioseguridad
 Las personas que usan pelo por debajo de
los hombros deben protegerse con gorro
o mantener amarrado el cabello hacia
atrás.
 No usar durante la jornada de trabajo

brazaletes o collares largos.
 Usar zapatos que cubran completamente

los pies
29/12/2018 196
Bioseguridad
 Normas de Bioseguridad para

evitar riesgos físicos
 Tener totalmente libres las zonas de
circulación.
 Mantener orden en el laboratorio.
 Tener estantes seguros.
 Evitar sobrecarga en las conexiones

eléctricas
 Utilice, siempre que sea posible, ayudas
mecánicas para manipular cargas
pesadas.
29/12/2018 197
Señal de Riesgo Biológico.
29/12/2018 198
Debes recordar:
 1-Cuales son las formas

fundamentales de las bacterias?
cocos, bacilos y helicoidal
 2-Cuales son las formas
fundamentales de los hongos?
 Levaduriforme y filamentosa
29/12/2018 199
Hongos filamentosos

Levaduras

 5.- Esquematice una célula bacteriana y
póngale sus nombres a las diferentes partes.
 Diagrama de un Corte Axial de una Bacteria
 Fimbrias
 Membrana Citoplasmática
 Sustancias Nuclear
 Gránulos
 Flagelos
 Cápsulas
 Pared celular

Célula bacteriana

 6.- Mencione las partes fundamentales de las
bacterias.
 Partes fundamentales:
 Membrana citoplásmica.
 Pared celular
 Citoplasma material nuclear.
 Mesosoma.
 Ribosomas.
 Partes especiales.
 Fimbrias
 Flagelos
 Espora
 Cápsula

 7.- Esquematice y póngale sus nombres a
los diferentes tipos de flagelos.
 Los flagelos son apéndices muy
delgados que sobresalen a través de la
pared celular y se originan en el
citoplasma.
 8.- De qué sustancia están
químicamente compuestos los flagelos
de la bacterias? Por una proteína llamada
flagelina.
 9.- Los flagelos les proporcionan a las
bacterias: movilidad.

Flagelos

Bacteria con flagelos

Fimbrias o Pilis:
 Fimbrias o Pilis: Son
apédices filamentosos que
no son flagelos.
 Son más pequeños y no
tienen función en la
movilidad. Hay varios tipos
como la F que funciona en
la cópula sexual de
transmisión de material
genético que se llama
conjugación.
 Las fimbrias facilitan la
adherencia a las células
epiteliales, como ocurre en
pacientes con fibrosis
quística, en los cuales la
infección por pseudomonas
esta relacionada con la
presencia de fimbrias y
otros factores.

Esporas
 10.- Defina espora bacteriana :

se denomina también endoesporas,
pues se produce intracelularmente,
y son formas resistentes que
adquieren los microorganismos en
determinadas condiciones.
 Contienen acido dipicolinico + calcio

químicamente compuestas las esporas
bacterianas? De ácido dipicolinico y calcio.
 12.- Qué le proporcionan las esporas a
las bacterias? Resistencia
 13.- Define cápsula bacteriana: cubierta
mucilaginosa que cubre toda la célula.
 Aumenta la capacidad infecciosa de la
bacteria.
 Son las causantes de algunas molestias en
procesos industriales porque producen
material viscoso.

 14.-Que le proporcionan las
cápsulas a las bacterias? Una
cubierta protectora.
químicamente compuestas las
cápsulas bacterianas? De
polisacáridos como : dextran,
dextrin, levan y celulosa.

Cápsulas
La capsula es un Factor de
virulencia
Esta es una coloración negativa
porque no se tiño la cápsula se
observa REFRINGENTE
29/12/2018 212
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 Warrem E.Levimson Ernest Jawetz,
Microbiología e inmunológica
 Jawetz. Melnich Adelberg: Microbiología
29/12/2018 Médica Altagracia Jimenez Diaz MA 217
 Es un recurso didáctico fácil de
elaborar, económico se puede enviar
por correo electrónico , lo puedes
colocar en una pagina Web y
permite a los usuarios aprender, a su
medida según el tiempo disponible en
su hogar cómodamente y compartirlo
con sus compañeros, estudiar a
distancia y se ha comprobado que el
aprendizaje con su uso es eficaz,
eficiente y efectivo.
Manual de práctica de
Microbiología
Digital
 Se le debe hacer revisiones permanentes

y actualizarlo
 Se entregará a la cátedra de
microbiología a la cual pertenezco para
que le hagan las revisiones y correcciones
pertinentes.
 Agradezco las sugerencias a la siguiente
 Dirección electrónica
 A Jiménez 16@ hot mail. com

Manual2009 110801180507 Phpapp02

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Maestra Altagracia Jiménez Díaz

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 3

 Asas y agujas bacteriológicas

 Se utiliza para Crear

 MORFOLOGIA Y DISPOSICIÓN DE LAS

 Aquellos que se dividen en dos planos y

 Aquellos que se dividen siguiendo planos al

 y si se presentan en cadenas se denominan

 Disposición de los bacilos:

 Las colonias pueden ser:

 Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de

 Medio enriquecido: medio al que se le

 Medio selectivo: medio que sólo

 Mac conkey: Cuando el microorganismo utiliza el

 Amarillo (A): ácido

Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y

 ( ion coloreado) que es el lugar donde se verifica

 El proceso de coloración de las bacterias es un

 Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de

 Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La

 La tinción negativa es un modo satisfactorio de

 La coloración de Gram. tiene interés

 La técnica revela diferencias constitutivas de la

 Su pared celular es más delgada, pero más

 El LPS es una molécula que contiene tres

 La membrana externa de las

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 82

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 83

Esta tinción permite diferenciar a los

 Preparar un frotis bacteriano.

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 92

 La tinta china o la nigrosina dan un fondo

 El termino respiración se refiere a todas las

 Es posible hacer una distinción entre las

 Respiración es la oxidación que utiliza

 La condición de aerobio o anaerobio puede ser

 Otras son facultativas y son capaces de

 Microaerofilicos : han sido llamados

 Aerobia: crece en la superficie del tubo

y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros

Durante el proceso del metabolismo algunas

Para que se den estas reacciones es preciso que

 La mayoría de las bacterias

 Para realizar esta práctica se

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 103

 contiene tres azúcares que son:

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 104

29/12/2018 Altagracia Jimenez Diaz MA 106

 Es un medio de cultivo selectivo y diferencial

 Se verifican dos reacciones

 Es un medio de cultivo selectivo

GAS POSITIVO GAS NEGATIVO

 Si se forma un coagulo la prueba

 Se basa en que determinadas bacterias poseen las

 En esta prueba, un tinte incoloro, como el

Durante su metabolismo La proteólisis es la

 El Indol es uno de los productos

 Es una prueba que se

 Es una prueba que se

 La determinación de la  Esto significa que un

 Método de la prueba: Difusión –Kirby Bauer

 SENSIBLE: Si alrededor del disco se forma un