Terapia cu bacteriofagi

(alternativa antibioticelor)

Autor: Pop Alexandra-Ioana, BIA anul III

Coordonator ştiinţific:Conf.Dr. Bunea Andrea
 CUPRINS
INTRODUCERE

FAGI PENTRU DEZVOLTAREA VACCINURILOR

PROTEINE ​DERIVATE DIN FAGI CA AGENȚI ANTIBACTERIENI

1. POLIZAHARIDE DE DEPOLIMERAZE
2. ENDOLIZINELE
3. HIDROLAZE VIURON ASOCIATE DE PEPTIDOGLICANI (VAPGH)
4. HOLINE

DETECTAREA PATOGENULUI

BACTERII BIOSENZORI

FAZE ETICHETATE

CONCLUZII

REFERINTE
 INTRODUCERE

În 1919, d'Herelle și colegii săi din Paris au început să folosească

bacteriofagii într-un mod terapeutic, lansând "terapia cu fagi" .

În primul rând, acest studiu clinic la scară mică a vizat patru copii tratați
cu succes de dizenterie bacteriană;

După ce au primit o singură doză de preparat fag, toate au început să se

recupereze în 24 de ore.
 FAGI PENTRU DEZVOLTAREA
VACCINURILOR
Antibioticele de neutralizare sunt foarte utile ca terapeutice,
dar pot fi, de asemenea, de mare importanță pentru
identificarea epitopilor de protecție asupra structurilor
patogene.

Până în prezent există mai multe boli infecțioase umane care

nu pot fi tratate prin vaccinare, deoarece toate abordările
testate până acum s-au dovedit a fi nereușite.
 PROTEINE ​DERIVATE DIN FAGI CA
AGENȚI ANTIBACTERIENI
Progresele uriașe înregistrate în biologia moleculară
au deschis noi posibilități în proiectarea
proteinelor derivate din fag recombinant.
Încurajarea rezultatelor a apărut pentru enzimele de
fagi implicate în prima etapă a infecției virale
responsabile de degradarea învelișului bacterian,
denumite depolimeraze.
 1. POLIZAHARIDE DE DEPOLIMERAZE

După cum sa menționat mai sus, hidrolazele

polizaharidice (depolimerazele) sunt enzime
utilizate de fagi pentru degradarea celulelor
bacteriene, în special pentru a viza carbohidrații
macromolecule din polizaharidele extracelulare
(EPS) și lipopolizaharidele (LPS) .
Depolimerazele sunt enzimele pe care le
utilizează pentru "îndepărtarea"
polizaharidelor bacteriene extracelulare și,
prin urmare, au fost testate ca terapeutice .

Până în prezent, au fost incercate puține

protocoale terapeutice in vivo.
Mai mult, aceste enzime derivate din fagi pot
avea un potențial mai mare ca agenți
terapeutici împotriva formării biofilmelor,
deoarece structura principală a glicocalixului
este compusă din EPS bacterian .

Depolimerazele pot fi eficiente în îndepărtarea

EPS, făcând bacteriile biofilmice mai sensibile la
tratamentul cu antimicrobiene.
 2. ENDOLIZINELE
Endolizinele sunt enzime produse la sfârșitul ciclului de
viață al fagului litice: se acumulează în citoplasma
bacteriei gazdă până când se translochează prin
găurile formate de holine în membrana plasmatică.

Aceste proteine ​sunt printre cele mai active și mai sigure

substanțe capabile să ucidă bacteriile, însă activitatea
lor are o constrângere majoră.

De fapt, activitatea antibacteriană a endolizinei este

deosebit de eficientă împotriva bacteriilor gram-
pozitive, deoarece acestea nu au o membrană
exterioară, spre deosebire de cele Gram negative .
Endolizinele pot fi împărțite în cinci clase diferite în
funcție de activitatea lor enzimatică:
(1) N-acetilmuramidaze (lizozime),
(2) endo-p-N-acetilglucozaminidaze,
(3) transglicozilaze litice,
(4) endopeptidaze
(5) N-acetilmuramil-L-ala-amidaze.
 3. HIDROLAZE VIURON ASOCIATE DE
PEPTIDOGLICANI (VAPGH)

O altă proteină derivată din fag este reprezentată

de hidrolaza asociată cu virion de peptidogligani
(VAPGH sau lizina asociată cu coada).

Aceste enzime sunt componente structurale ale

unor particule de fag și mediază hidroliza locală a
peptidoglicanului din peretele celular, permițând
tubului de coadă a fagului să acceseze citoplasma
pentru transferul ADN virale .
Enzima himerică P128 este singurul testat VAPGH
terapeutic in vivo.

O tulpină de MRSA a fost instilată în nare de

șobolani urmată de 2 tratamente intranazale
ale unei formulări de hidrogel de P128 (50 mg /
doză) sau sub formă de 2% unguent de
mupirocin (30 mg / doză).
 4. HOLINE

După cum s-a descris, endolizinele sunt responsabile

de degradarea peptidoglicanului în etapele finale
ale lizării celulare.

Activitatea lor implică o altă clasă de enzime numite

holine, care acționează în două căi diferite:
sistemele de endolizină holol-endolizină și
pinholin-SAR (eliberarea de ancoră semnal).
Activitatea bacteriostatică a proteinei Tmp1
asemănătoare holinei a fost demonstrată în primul
rând de Rajesh și colab.

Astfel, amestecul holin-LySMP a fost capabil să

extindă spectrul endolizinei în monoterapie,
prezentând o activitate interesantă împotriva mai
multor tulpini de S. suis și S. aureus rezistente la
mai multe medicamente .
 DETECTAREA PATOGENULUI

Din cauza lipsei unei reglementări stricte a utilizării

lor ca produse terapeutice, produsele pe bază de
fagi sunt luate in considerare mai mult pentru
detectarea agenților patogeni în domenii precum
industria alimentară, supravegherea calității apei
sau bioterorismul, unde contaminările sunt
frecvent responsabile de gastroenterită,
respiratorie și infecții ale mucoasei și, dacă nu mai
rău, sechele.
 1. BACTERII BIOSENZORI
Metodele microbiologice standard pentru
identificarea agenților patogeni sunt
consumatoare de timp; În plus, metodele
moleculare, cum ar fi PCR cantitativ (qPCR) sau
hibridizarea ADN, necesită specimene de puritate
înaltă .

De asemenea, testele enzimatice, cum ar fi ELISA,

sunt foarte sensibile, dar nu sunt potrivite pentru
proiecții de mare viteză.
Până în prezent, unele sisteme au fost dezvoltate
cu E. coli 0157: H7 ca țintă și două grupuri
principale de aplicații sunt disponibile: una
utilizează particule inerte de fag sau proteinele
lor, iar cealaltă necesită infectarea fagilor.
 2. FAZE ETICHETATE

Testul luciferazei este un test rapid și ieftin,

deoarece necesită doar 1 sau 2 zile pentru a
estima expresia luciferazei în celulele țintă care
detectează bioluminescența , astfel încât poate fi
utilizată și în laboratoarele din țările în curs de
dezvoltare .
Din păcate, tipizarea cu bacteriofagi are limitări
importante, cum ar fi problemele de rezistență la
fagi și dificultățile legate de stocurile de fagi și
întreținerea tulpinilor de înmulțire
Totuși, doar câteva seturi de fagi pentru detectarea
patogenului din probele umane au ajuns pe piață,
cum ar fi testul FASTPlaqueTB descris anterior și
testul de cultură a sângelui MRSA / MSSA .
Acest lucru se datorează faptului că aceste sisteme
de detectare trebuie să fie de unică folosință și
kituri de unică folosință;
 CONCLUZII
 Metodele de terapie fagică, care profită de
caracteristicile fagului litic, au inspirat începutul a
numeroase studii clinice umane care au potențial
mare ca tratamente noi ale infecțiilor bacteriene.
 Proteinele derivate de la fagi au câștigat aprecierea ca
agenți antibacterieni și au pus în aplicare relevanța
prin depolimeraze polizaharidice, endolizine,
endolizine modificate, hidrolaze peptidoglican
asociate cu virion și holine.
 În cele din urmă, bacteriofagii s-au dovedit utile ca
biosenzori în detectarea patogenului.
 În concluzie, deși rămân multe de făcut, bacteriofagii
și aplicațiile lor par a fi o alternativă validă față de
abordările tradiționale pentru prevenirea și tratarea
epidemiilor bacteriene.
Referinte

1. Wommack K. E., Hill R. T., Kessel M., Russek-Cohen E., Colwell R. R. Distribution of viruses in the
Chesapeake Bay. Applied and Environmental Microbiology. 1992;58(9):2965–2970. [PMC free
article][PubMed]
2. D'Herelle F., Twort F. W., Bordet J., Gratia A. Discussion on the bacteriophage
(bacteriolysin) BMJ. 1922;2:289–299.
3. Twort F. The discovery of the ‘bacteriophage’ The Lancet. 1925;205(5303):p. 845. doi: 10.1016/S0140-
6736(01)22250-8. [Cross Ref]
4. Duckworth D. H. Who discovered bacteriophage? Bacteriological Reviews. 1976;40(4):793–802. doi:
10.1016/j.mimet.2017.01.019. [PMC free article] [PubMed] [Cross Ref]
5. Giguère S., Prescott J. F., Dowling P. M. Antimicrobial Therapy in Veterinary Medicine. Hoboken, NJ, USA:
John Wiley & Sons; 2013.
6. Henry K. A., Arbabi-Ghahroudi M., Scott J. K. Beyond phage display: non-traditional applications of the
filamentous bacteriophage as a vaccine carrier, therapeutic biologic, and bioconjugation
scaffold. Frontiers in Microbiology. 2015;6(755):1629–1618. [PMC free article] [PubMed]
7. Hofschneider P. H., Mueller-Jensen K. Über infektiöse Substrukturen aus E. coli-
Bakteriophagen. Zeitschrift für Naturforschung Part B. 1963;18(11):922–927. [PubMed]
8. Marvin D. A., Hoffmann-Berling H. A fibrous DNA phage (fd) and a spherical RNA phage (fr) specific for
male strains of E coli. Zeitschrift für Naturforschung Part B. 1963;18(11):884–893. doi: 10.1515/znb-
1963-1106. [PubMed] [Cross Ref]
9. Zinder N. D., Valentine R. C., Roger M., Stoeckenius W. F1, a rod-shaped male-specific bacteriophage that
contains DNA. Virology. 1963;20(4):638–640. doi: 10.1016/0042-6822(63)90290-3. [PubMed] [Cross
Ref]
10. Salivar W. O., Tzagoloff H., Pratt D. Some physical-chemical and biological properties of the rod-shaped
coliphage M13. Virology. 1964;24(3):359–371. doi: 10.1016/0042-6822(64)90173-4. [PubMed] [Cross
Ref]
VA MULTUMESC!!