THE EFFECT OF A POLYDNAVIRUS OF APANTELES GALLERIAEON THE

HEMOLYMPH PROTEINS OF HOST GALLERIA MELLONELA

UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA DE INGENIERÍA AGRONÓMICA
TUNJA
2019
 INTRODUCCIÓN
La polilla de la cera, cuya larva es conocida como
gusano de la cera (Galleria mellonella), es una
especie de insecto lepidóptero del suborden
Glossata y del clado Ditrysia. Es de distribución
mundial. Llega a ser una plaga agrícola​ en las
colmenas de abejas melíferas.

Las polillas son mariposas nocturnas, las larvas se

nutren de restos de productos almacenados. Se le
llama polilla grande de la cera por su alimentación.
En ingles se llama “greater wax moth” y en catalán
“arma de la cera” (Lloret, 2006).

La polilla grande de la cera es una de las plagas más importantes de las colmenas de las
abejas. Se alimentan de la cera, la miel y el polen almacenados en los panales de las
colonias activas de abejas, construye galerías (de aquí su nombre en latín de Galleria) y
puede destruir por completo la colmena.
 Los polidnavirus (Polydnaviridae) son una familia
de virus que infecta insectos de la que se conocen
dos géneros, Ichnovirus y Bracovirus.

El genoma del virus está compuesto de múltiples

segmentos de ADN bicatenario superhelical,
encapsulado en una cápside de proteínas y una
envoltura de doble capa (en los primeros) o simple (en
los segundo). Por ello se incluyen en el grupo I de la
clasificación de Baltimore.
 Apanteles galleriae

Esta avispa parásita

las larvas de la polilla
de cera Galleria
mellonella

Se ha reconocido que todas las

hembras de varias especies de
avispas parasitoides portan
virus en sus ovarios para una
parasitización exitosa del
huésped
 Materiales y métodos
Las orugas del
hospedante G.mellonella (Le
pidoptera, Pyralidae) se
criaron en cajas de plástico
a 28 ° C (con fotoperíodo de
luz de 14 horas / fotoperiodo
oscuro de 10 horas)

Los adultos de A.
galleriae se obtuvieron
de orugas parasitadas en
laboratorio y los cálices
de ovario se
diseccionaron el mismo
día de la emergencia.
 Materiales y métodos
Los cálices extraídos de 23
hembras de A. galleriae se
mantuvieron en solución
fisiológica de insectos durante
el experimento. El extracto de
cáliz se obtuvo por sonicación
y centrifugación a 6000 g
durante 15 minutos a 4 ° C
para la eliminación de restos
celulares.

El sobrenadante se usó para la

microinyección (5 µl) en el 4º
segmento abdominal de la sexta
y séptima etapa G.
mellonela. Se administró una
microinyección de solución
fisiológica (5 µl) como control.
 Materiales y métodos
Dieciocho y 36 horas después, Método de Sedmak y Grossberg
las orugas se sacrificaron por
congelación y los segmentos
abdominales 3, 4 y 5 se
maceraron para obtener el
extracto celular que también se
sometió a sonicación y
centrifugación, como se
describió anteriormente

La determinación de
proteínas totales de
extractos de cáliz y
segmentos
abdominales se llevó
a cabo mediante el
método de Sedmak y
Grossberg
 MATERIALES Y MÉTODOS
Material vegetal

Las semillas se extrajeron de una

población silvestre de A. hybridus,
se recolectaron aproximadamente
5500 semillas en lotes agrícolas
de la Universidad Pedagógica y
Tecnológica de Colombia, en
Tunja, Boyacá.
(Niño, 2018)
Ubicación
Mediciones: Laboratorio de Fisiología
vegetal Universidad Pedagógica y
Tecnológica de Colombia, T°C: 18 y
HR: 70%

(Niño, 2018)
 MATERIALES Y MÉTODOS
Experimento de fotoblastismo Experimento Profundidad de suelo

Se utilizó un diseño completamente al

Se utilizó un diseño
azar con 4 tratamientos, donde se
completamente al azar con 8
evaluaron las semillas en caja Petri
tratamientos, donde se evaluaron
expuestas con luz ambiente, sin luz, luz
las profundidades de siembra
roja y luz azul.
(1cm, 2cm, 3cm, 4cm, 5cm, 6cm,
7cm y 8 cm).

Para el estudio se utilizaron

recipientes de Icopor de 2L. El
sustrato utilizado fue turba rubia
canadiense. (Niño, 2018)

(Niño, 2018)

Experimento aplicación de giberelinas

Se utilizó un diseño completamente al azar con 5 tratamientos, donde se

evaluaron las semillas expuestas a diferentes concentraciones de
giberelinas (0 mg L-1, 200 mg L-1, 400 mg L-1, 600 mg L-1, 800 mg L-1 de
ácido giberélico).

(Niño, 2018)
 MATERIALES Y MÉTODOS
Prueba de Tetrazolio Determinación de patrones topológicos por tetrazolio

Se tomaron las La clasificación de la viabilidad de las semillas, se realizó

semillas no mediante la identificación de tres categorías recomendadas por
germinadas, un total Rao et al. (2007) para la interpretación de patrones de tinción:
de 1336 y se le realizó
Categoría 1. Semillas viables. Aquellas que presentaban: embrión
un corte a la mitad con
y endospermo completamente teñidos
una cuchilla
Categoría 2. Semillas no viables. Aquellas que presentaban:
embrión y el endospermo sin teñir (muertas)
Las semillas se
sumergieron en una Categoría 3. Semillas dudosas: semillas parcialmente teñidas
solución de tetrazolio producirán plántulas normales o anormales, dependiendo de la
al 1%. Posteriormente intensidad y patrón de la tinción
fueron llevados a la
mufla a una
temperatura de 37°C
por 2 horas (ISTA,
2007).

(Rao et al. 2007)

 MATERIALES Y MÉTODOS

Con los datos obtenidos se realizaron pruebas de normalidad y homogeneidad de varianzas, las
variables que cumplieron con estos supuestos se sometieron a análisis de varianza

Para determinar los mejores tratamientos se realizó una prueba de comparación de promedios de
Tukey (P≤0,05). Con las variables que no cumplieron los supuestos, se realizó transformación de
2
datos, para las variables con porcentajes se utilizo (arcoseno( 2 𝑝𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒)) y para los demás

Los análisis se realizaron con el programa estadístico SPSS V.19 e Infostat V. 2016.
 RESULTADOS FOTOBLASTISMO
70 Porcentaje de germinación
60 a

Responden a un requerimiento de
50
oscuridad (fotoblásticas negativas)
Germinación (%)

40

30
Orozco (1989) indica que tanto
en semillas fotoblásticas
20 positivas como en fotoblásticas
negativas la luz roja estimula la
10
b germinación, mientras que la luz
bc
c
roja lejana la inhibe.
0
Testigo Rojo Azúl Sin Luz
Tratamientos
Efecto de diferentes tratamientos de luz sobre la
germinación de semillas de bledo. Promedios seguidos de
letras distintas indican diferencias estadísticas de acuerdo
con la prueba de Tukey (p<0,05). Barras verticales en
cada promedio indican el error estándar (n=4). CV(%):
88,11
 RESULTADOS FOTOBLASTISMO
Velocidad media de germinación
10

9 a
VMG (semillas germinadas/día)

7
Semillas que son inhibidas en
6
presencia de la luz son de
fotoblastismo negativo
5
(Piedrahita, 1997)
4

1
b
bc
Takaki, (2001) indica que el
c
0 fitocromo está presente en las
Testigo Rojo Azúl Sin Luz
Tratamientos
semillas no fotoblásticas y que
Efecto de diferentes tratamientos de luz sobre la velocidad bajo condiciones específicas
media de germinación de semillas de bledo. Promedios (Estrés hídrico de las semillas,
seguidos de letras distintas indican diferencias intensidad y calidad de la luz,
estadísticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p<0,05). variación de temperaturas) se
Barras verticales en cada promedio indican el error puede demostrar su presencia.
estándar (n=4). CV(%): 50,45
 RESULTADOS FOTOBLASTISMO
Tiempo medio de germinación
8

7 a a a
b
6
TMG (Días)

3 La luz sobre las semillas de A.

2
hybridus no rompe la latencia para
que se dé la germinación y no se
1
considera un factor propicio para
0 su germinación (Flores-Córdova et
Testigo Rojo Azúl Sin Luz
al. 2016)
Tratamientos
Efecto de diferentes tratamientos de luz sobre el tiempo
medio de germinación de semillas de bledo. Promedios
seguidos de letras distintas de acuerdo con la prueba de
Tukey (p<0,05). Barras verticales en cada promedio
indican el error estándar (n=4). CV(%): 76,98
 RESULTADOS APLICACIÓN GIBERELINAS
Porcentaje de germinación
100

90 a
a
80

70
Germinación (%)

60

50 b

40

30
Las semillas pueden romper su
c

20
y= 5E-07x3 - 0.0007x2 + 0.361x - 1.7964
R² = 0.7702 posible latencia por condiciones de
10
luz, con un aumento en el
0
d ambiente de la fitohormona
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 Giberelina (Mantilla, 2008)
Ácido giberélico (mg L-1)

Efecto de diferentes concentraciones de ácido giberélico

sobre la germinación de semillas de bledo. Promedios
seguidos de letras distintas indican diferencias
estadísticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p<0,05).
Barras verticales en cada promedio indican el error
estándar (n=4). CV(%): 2,86
 RESULTADOS APLICACIÓN GIBERELINAS
16
Velocidad media de germinación

14 a a
VMG (semillas germinadas/día)

12

10

8
b

6
El efecto de la aplicación de las
4
c y= 6E-08x3 - 0.0001x2 + 0.055x - 0.3037
R² = 0.7501 giberelinas pueden activar las
2
enzimas hidrolíticas como α-
d
amilasa, en la capa de aleurona
0
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
(Davies, 2004)
Ácido giberélico (mg L-1)

Efecto de diferentes concentraciones de ácido giberélico

sobre la velocidad media de germinación de semillas de
bledo. Promedios seguidos de letras distintas indican
diferencias estadísticas de acuerdo con la prueba de
Tukey (p<0,05). Barras verticales en cada promedio
indican el error estándar (n=4). CV(%): 83,78
 RESULTADOS APLICACIÓN GIBERELINAS
Tiempo medio de germinación
8

a a
7 a ab
b

5
TMG (Días)

4
y = 2E-06x2 - 0.0012x + 6.6874
R² = 0.7633
3
La morfología y fisiología que
2
posee este tipo de semillas.
1 Produce un leve efecto en el
0 TMG de estas semillas.
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
Ácido giberélico (mg L-1)

Efecto de diferentes concentraciones de ácido giberélico

sobre el tiempo medio de germinación de semillas de
bledo. Promedios seguidos de letras distintas indican
diferencias estadísticas de acuerdo con la prueba de
Tukey (p<0,05). Barras verticales en cada promedio
indican el error estándar (n=4). CV(%): 45,81
RESULTADOS DETERMINACION DE PATRONES
TOPOLOGICOS
 RESULTADOS PROFUNDIDAD DE SUELO
Porcentaje de germinación
60

a a
50 a

La inhibición de la germinación
Emergencia (%)

40 b

en oscuridad favorece la
30 c formación de bancos de semillas
persistentes al evadir la
20

y = 0.0005x3 - 0.075x2 + 2.269x + 32.607

germinación de semillas en suelo
10
R² = 0.994 d muy profundo o vegetación
e e
cerrada donde se establecen
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
relaciones de competencia entre
Profundidad (mm) plántulas por factores como la
luz, agua y nutrientes (Grime et
Efecto de diferentes profundidades de siembra sobre el
porcentaje de semillas emergidas en bledo. Promedios al., 1981; Pons, 1992; Vazquez y
seguidos de letras distintas indican diferencias Orozco, 1993);
estadísticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p<0,05).
Barras verticales en cada promedio indican el error
estándar (n=4). CV(%): 66,65
 RESULTADOS PROFUNDIDAD DE SUELO
Velocidad media de germinación
10
a
a
9 a

7
VME (plántulas/d)

b
6

5
c
4 La menor VME tiene lugar a mayor
3 profundidad, posiblemente por la
2
y = 9E-05x3 - 0.0122x2 + 0.338x + 6.6257
d
morfofisiología de la semilla y el
R² = 0.9952

1
tamaño
e e
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Profundidad (mm)
Efecto de diferentes profundidades de siembra sobre la
velocidad media de emergencia en bledo. Promedios
seguidos de letras distintas indican diferencias
estadísticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p<0,05).
Barras verticales en cada promedio indican el error
estándar (n=4). CV(%): 46,36
 RESULTADOS PROFUNDIDAD DE SUELO
Tiempo medio de germinación
7
a
a a
6 a a
a

5
TME (días)

3
Las semillas de menor tamaño
y = -6E-05x3 + 0.0046x2 - 0.0842x + 5.8692 b
y que tiendan a ser redondas
R² = 0.9068
2
poseen las mejores condiciones
1 de sobrevivir en condiciones
b inadecuadas (Sánchez et al,
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 2005).
Profundidad (mm)

Efecto de diferentes profundidades de siembra sobre el

tiempo medio de emergencia en bledo. Promedios
seguidos de letras distintas indican diferencias
estadísticas de acuerdo con la prueba de Tukey (p<0,05).
Barras verticales en cada promedio indican el error
estándar (n=4). CV(%): 36,05
 CONCLUSIONES

Las semillas de Bledo presentaron germinación en ausencia de luz, características

propias de las malezas.

Para el experimento de giberelinas el mejor resultado fue el de 800 mg L-1 de ácido

giberélico.

Las pruebas de tetrazolio permitieron observar la viabilidad de las semillas no

germinadas corroborando así la latencia de las semillas.

Para el experimento de profundidad de suelo se observó buena germinación por parte

de las semillas en profundidades de 10mm a 50mm.