FUNDAMENTO

ESPECTROFOTOMETRÍA DE
REGIÓN UV VIS, MÉTODO Y
APLICACIONES

QUÍMICA ANALÍTICA
INTRODUCCIÓN
Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medición
de la radiación electromagnética emitida o absorbida por los
analitos. En concreto la Espectrometría de Absorción UV Visible se
basa en la absorción de radiación electromagnética de la región de
onda comprendida entre 200 y 780 nm.
INTRODUCCIÓN
La radiación electromagnética es una forma de energía que se
transmite por el espacio que se propaga en forma de ondas
transversales a velocidades muy altas, siendo su vibración
perpendicular a la dirección de su propagación, en la que también
existe una propagación de energía que esta cuantizada en forma
de fotones.
FUNDAMENTO

Este análisis consiste en la medición de la absorción de luz por un

compuesto en su estado basal, pasándolo por un estado excitado,
volviendo a regresar a su estado basal. Dando una longitud de
onda.
La absorbancia es directamente proporcional a la longitud de la
trayectoria en la flama y a la concentración de vapor del analito en
ella.
FUNDAMENTO

Estado excitado 𝐸1

∆𝐸 = 𝐸1 − 𝐸0 = 𝐸𝐹𝑜𝑡ó𝑛 = ℎ𝑣
Estado basal o
fundamental 𝐸0
F

Los 𝑒 − mas externos pueden saltar a otro orbital vacío de mayor nivel energético si se les
comunica la E adecuada, esto debido a la absorción de un fotón cuya E coincida
exactamente con la diferencia entre el E0 y el E1
 ¿CÓMO ABSORBE RADIACION LA
MATERIA?
“Se ven” los objetos con color porque transmiten o reflejan sólo
una parte de la luz en esa región. Cuando la luz policromática, o
luz blanca, que contiene todo el espectro de longitudes de onda en
la región visible, atraviesa un objeto, el objeto absorberá ciertas
longitudes de onda y transmitirá las longitudes de onda que no
absorba. Esas longitudes de onda residuales transmitidas se
percibirán como un color.
 ¿CÓMO ABSORBE RADIACION LA
MATERIA?

Hay tres procesos básicos mediante los cuales una molécula

puede absorber radiación; todos consisten en elevar la energía
interna de la molécula a un valor mayor y el aumento de energía
igual a la energía de la radiación absorbida (ℎ𝜈).
 TRANSICIÓN ROTACIONAL
La molécula gira en torno a varios ejes, teniendo la energía de rotación niveles
definidos, por lo que la molécula puede absorber radiación y ascender a un mayor
nivel de energía de rotación.

TRANSICIÓN VIBRACIONAL
Los átomos o grupos de átomos dentro de una molécula vibran entre sí, por esto, la
molécula puede absorber una cantidad discreta de energía y ascender a un nivel
más alto de energía de vibración.

TRANSICIÓN ELECTRÓNICA

Los electrones de una molécula pueden ascender a una energía electrónica mayor.
 TRANSICIONES: ROTACIONAL,
VIBRACIONAL Y ELECTRONICAS.

Diagrama de niveles de
energía donde se ven los
cambios de energía
relacionados con la
absorción de radiación
electromagnética.
 LEY DE BEER
La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente la concentración de la
sustancia absorbente, cuando este haz pasa a través de un medio
homogéneo.

Donde:
P0 potencia de la radiación incidente,
P potencia de la radiación transmitida,
a es una constante que resulta de la combinación de k y k’,
c concentración,
b distancia recorrida por la radiación,
T transmitencia, FERT.
Como determinamos la longitud de onda
adecuada
• Haciendo un barrido en la región uv visible y se elige la longitud de
onda en el pico mas alto
 LEY DE BEER
𝑃 𝑃 ′𝑐
𝑇= = 10−𝑘𝑏 𝑇= = 10−𝑘
𝑃0 𝑃0
𝑃 𝑃 −𝑘 ′𝑐
log 𝑇 = log = log 10−𝑘𝑏 log 𝑇 = log = log 10
𝑃0 𝑃0
𝑃 𝑃
log 𝑇 = log = −𝑘𝑏 log 𝑇 = log = −𝑘 ′ 𝑐
𝑃0 𝑃0

Donde:
𝑃 𝑃 P0 potencia de la radiación incidente,
𝑇= = 10−𝑎𝑏𝑐 log 𝑇 = log = −𝑎𝑏𝑐 P potencia de la radiación transmitida,
𝑃0 𝑃0 a es una constante que resulta de la combinación de k
y k’ (absortividad),
c concentración,
1 𝑃0 b distancia recorrida por la radiación,
A = −log 𝑇 = log = log = abc
𝑇 𝑃 T transmitencia, FERT.
TRANSMITANCIA (T)
• Fracción de la energía radiante transmitida: Es la razón entre la luz
monocromática transmitida (P) por una muestra y la energía o luz
incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la
transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.

𝑃
𝑇= = 10−𝑎𝑏𝑐
𝑃0
ABSORBANCIA(A)
Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una
sustancia pura o en solución.

1 𝑃0
A = −log 𝑇 = log = log = 𝑎𝑏𝑐
𝑇 𝑃

Donde: P potencia de la radiación incidente, P potencia

0

de la radiación transmitida, c concentración, b distancia

recorrida por la radiación, a combinación de k y k’.
 ¿QUÉ LE SUCEDE A LA RADIACIÓN
ABSORBIDA?

Los estados excitados de las moléculas duran muy poco, disipan su

energía (en forma de calor, Ec y fluorescencia) y regresan a su estado
fundamental.
 INSTRUMENTACIÓN
ESPECTROMÉTRICA
Un espectrómetro o espectrofotómetro es un instrumento que
descompone la radiación policromática en distintas longitudes de onda.
Todos los espectrómetros necesitan:
FUENTE
INSTRUMENTACIÓN
ESPECTROMÉTRICA
La fuente debe tener una producción de radiación fácilmente detectable en
la región de longitudes de onda para la cual está diseñado el instrumento.
REGIÓN VISIBLE: lámpara incandescente de filamento de tungsteno.
REGIÓN UV: tubo de descarga de H2 o de D2 a baja presión.
MONOCROMADOR
Está formado principalmente por lentes o espejos que enfocan la radiación
por rendijas de entrada y salida y separan las longitudes de onda.
PRISMAS: Las longitudes de onda siguen una dispersión no lineal.

REJILLAS DE DIFRACCIÓN:
Las longitudes de onda
siguen una dispersión lineal.
CELDAS PARA MUESTRA
Las celdas que usan los espectrómetros en visible y ultravioleta suelen ser
prismas rectangulares huecos de 1 cm de ancho entre sus paredes
paralelas internas, aunque pueden usarse celdas de diversas longitudes de
paso y volúmenes. Normalmente son de cuarzo.
DETECTOR

Un fototubo o fotocelda es de uso común en las regiones ultravioleta y visible.

Éste consiste de un cátodo fotoemisor y un ánodo. Se aplica un alto voltaje
entre ánodo y cátodo. Cuando un fotón entra por la ventana del tubo y llega al
cátodo se emite un electrón que es atraído hacia el ánodo, haciendo que pase
una corriente que se puede amplificar y medir.
TIPOS DE INTRUMENTACIÓN
Espectrofotómetro de doble haz
TIPOS DE INTRUMENTACIÓN
Espectrofotómetro de un solo haz
 APLICACIONES
BIOLOGÍA MOLECULAR
La determinación de la concentración y pureza de ácidos nucleicos. Los ácidos
nucleicos absorben luz a 260 nm a través de los residuos de adenina.
BIOQUÍMICA
Determinar las reacciones de enzima-sustrato.
CLÍNICA
Se utiliza para examinar la sangre o los tejidos para el diagnostico clínico.
MEDICIÓN DE TRANSMITANCIA
En solidos transparentes u opacos.
DIFUSIVIDAD
En cualquier intervalo de luz de hasta 200 nm-2500 nm.
BIBLIOGRAFIA
• Química Analítica Cuantitativa, Day and Underwood.
• Química Analítica, Skoog and West.
• Análisis Instrumental, Douglas R. Skoog and Donald M. West.