Microbiologia e Imunologia

Morfocitologia
Bacteriana

Prof. Dr. Tarcizio José dos Santos Filho

2019.1
 Eucariotos x Procariotos

EUCARIOTOS
Cromossomo separado do citoplasma
Constituintes comuns: nuclear
pela membrana Membrana citoplasmática, ribossomos, material genético
Citoplasma compartimentalizado
Respiração celular realizada em
mitocôndrias
Presença de citoesqueleto
Genoma com íntrons
Tradução independente da transcrição
PROCARIOTOS
Cromossomo difuso no citoplasma
Ausência de organelas
Respiração é realizada por enzimas da
membrana citoplasmática
Ausência de citoesqueleto
Ausência de íntrons
Transcrição acoplada à tradução
 Classificação dos Microrganismos

Sistema dos 5 Reinos

• Whittaker, 1969
• Classificação baseada na
estrutura e metabolismo

Procariotos

Reino Monera = Bactérias

 Classificação dos Microrganismos

• Carl Woese, 1991

• Baseado na sequência do rRNA 16S
• 3 domínios: Bacteria, Archaea e Eukarya
 Domínio Archaea
• Unicelulares com características morfológicas
semelhantes às das bactérias

• Habitam ambientes extremos

- Termófilas e Hipertermófilas

- Psicrófilas
Archaea
- Halófilas
- Metanogênicas

• Possuem adaptações estruturais e

metabólicas que permitem a vida em
condições extremas
 Domínio Archaea

Carcaterística Bactérias Arquéas

Ligação dos lipídeos de Glicerol-éster Glicerol-éter
membrana
Estrutura dos lipídeos Cadeias de ácidos Cadeias de isoprenos
graxos
Estrutura da camada de lipídeos Bicamada de Camada única de
fosfolipídeos fosfolipídeos
Parede celular Peptideoglicano Camada S

Ácidos graxos isoprenos

Bicamada lipídica Monocamada lipídica

 Domínio Bacteria
• Bactérias Gram Positivas
• Proteobactérias (Gram Negativas)
• Espiroquetas
• Clamídias
• Cianobactérias
• Deinococcus
• Deferribacter e Nitrospira
• Verrucomicrobios
• Cytophaga
• Flavobactérias
• Bactérias verdes sulfurosas e não-sulfurosas

Grande diversidade morfológica e metabólica!

• Procariotos unicelulares
• Pequenos (em geral de 0,5 a 5µm)
– Quando o citoplasma é muito volumoso, a
superfície celular, por onde entram água e
nutrientes e por onde saem os
metabólitos, não consegue realizar todas
as trocas necessárias.

Epulopiscium fishelsoni (700µm) Thiomargarita namibiensis (800µm)

 Morfologia
Cocos: células esféricas, pequenas, de até 1 µm, que estabelecem
diferentes arranjos

Streptococcus
pyogenes

Neisseria
Staphylococcus
gonorrhoeae
aureus
• Bacilos: ou bastonetes. São cilíndricos, medem cerca de 3µm,
podendo ser curtos ou alongados

Bacillus cereus
• Vibriões: bacilos curvos, em • Espirilos: células curvas, espessas,
forma de “vírgula” que se movem através de flagelos
externos, dando voltas espirais em
torno do próprio eixo

Vibrio cholerae

Campylobacter jejunii

• Espiroquetas: células muito finas e longas, em formato espiral, que se

movem através de flagelos internos, dando voltas ao redor do próprio eixo

Treponema pallidum
Borrelia burgdorferi
Leptospira interrogans
Estruturas da Célula Bacteriana

Envelope
- Membrana citoplasmática
- Parede celular
- Membrana externa
Citoplasma
- Nucleóide e plasmídeos
- Ribossomos
- Grânulos de reserva
Apêndices bacterianos
- Flagelos
- Pili e fímbrias
Estruturas de resistência
- Esporos
 Citoplasma bacteriano
• Porção fluida, preenche o interior da célula bacteriana
• Constituído por água, proteínas e aminoácidos, nucleóide, ribossomos, e
materiais de reserva

1) Nucleóide
• Molécula de DNA cromossômico condensado, associado a proteínas.
Essencial para a célula
• De 500 mil a 10 milhões de pares de base
• Em geral único e circular
2) Plasmídeos
• Molécula de DNA circular, com 5 a 100 genes
• Replicação autônoma
• Função acessória
• Vantagens: carreia genes de virulência, resistência, capacidade
metabólica, etc.
• Utilização na engenharia genética: produção de proteínas para
pesquisa ou uso clínico → clonagem
2) Ribossomos
• Organelas formadas por proteínas e RNA
• Realizam a síntese de proteínas
– Sítio para tradução do RNA mensageiro
• Ribossomos 70S com 2 subunidades (50S e 30S)
• E. coli: cerca de 15 mil ribossomos → 25% da massa da célula
• Alvo para antimicrobianos

Subunidade
maior (50S)
Unidade S (Svedberg): unidade de
medida da taxa de sedimentação na
ultracentrifugação

Subunidade
maior (30S)
3) Materiais de Reserva e Vesículas de Gás
• Materiais de reserva: armazenam moléculas que podem ser utilizadas
em situações desfavoráveis, como glicogênio, lipídeos, enxofre.

• Vesículas de gás: estruturas

protéicas ocas, impermeáveis
à água e solutos, permeáveis
Vesículas
somente a gases que de gás
favorecem a flutuabilidade.
4) Endósporo
• Estrutura de resistência formada por alguns gêneros bacterianos
como Clostridium spp. e Bacillus spp.

Clostridium botulinum
• Produzidos em situações ambientais desfavoráveis, resistem no
ambiente por muitos anos e germinam rapidamente

Estruturas

Capa e exospório: camadas de proteína

semelhantes à queratina que
impermeabilizam o endósporo

Córtex: camada espessa de peptideoglicano,

Core: equivalente ao citoplasma, é

desidratado e mineralizado. Contém:
▪ dipicolinato de cálcio que atua na
desidratação e protege o DNA.
▪ proteínas SASP: associam-se ao DNA e
mudam sua forma de B para A (+
resistente)
 Envelope bacteriano
1) Membrana citoplasmática
Bicamada de fosfolipídios, de cerca de 8nm de espessura, nas quais as
porções hidrofóbicas se unem no interior da membrana e as porções
hidrofílicas ficam expostas.
- fosfolipídios: glicerol + fosfato ligados a 2 ácidos graxos de 16 a 18
carbonos

Colina
Glicerol
Cabeça
hidrofílica
Fosfato

Ácidos graxos
Cauda
hidrofóbica
• Contém proteínas imersas que se movem livremente entre os
fosfolipídios → modelo do mosaico fluido
Proteínas
transmembranas
Bicamada de
fosfolipídios

• Não contém esteróis (exceto micoplasmas)

• Estabilizada por pontes de hidrogênio, interações hidrofóbicas e cátions
Ca2+ e Mg2+
• Alvo para antimicrobianos → polimixina e daptomicina
a) Controla o tráfego de moléculas → barreira de permeabilidade seletiva

Impermeável a moléculas carregadas positivamente (inclusive

prótons) e hidrofílicas e permeável a substâncias hidrofóbicas

Necessidade de transporte através de proteínas transmembrana

Transporte passivo → sem gasto de energia

- Difusão facilitada: proteínas

- Difusão passiva: moléculas transmembranas permeases
atravessam os fosfolipídeos carreiam a molécula
 Transporte ativo → com gasto de energia

As moléculas se movem contra o gradiente de concentração e

utilizam proteínas carreadoras que transportam a molécula

Uniporte Simporte Antiporte

As proteínas carreadoras são altamente específicas, tendo afinidade com

um tipo de molécula ou classe química e são sintetizadas de acordo com
a necessidade do microrganismo
b) Ancoragem de proteínas

c) Síntese e conservação de energia

Quebra de compostos orgânicos ou inorgânicos
• Elétrons: enviados para a cadeia de transporte de elétrons

• Prótons: enviados para o meio extracelular, tornando a parte externa

da membrana positivamente carregada e o interior negativamente
carregado

Gradiente de prótons
Confere energia para
Célula bacteriana movimento do flagelo,
transporte ativo e síntese de
ATP
2) Parede Celular
• Confere rigidez à célula bacteriana, protegendo contra choques
mecânicos e, principalmente, contra a pressão osmótica
• Arcabouço rígido formado por moléculas com uma porção protéica
associada a um dissacarídeo → peptideoglicano ou mureína

Peptideoglicano
Dissacararídeo:
- Ác. N-acetil glicosamina (NAG)
- Ác. N-acetil murâmico (NAM)

Peptídeo:
- Cadeias de 4 ou 5 aminoácidos
(alanina, lisina, glutamato e ácido
diaminopimélico [DAP])
Ligações entre as moléculas de peptideoglicano:
- Glicosídica: entre NAG/NAM → frágil
- Peptídica: entre os aminoácidos de duas cadeias de peptideoglicano →
essencial para manter a rigidez da parede → LIGAÇÕES CRUZADAS
Gram Positivo
• Mais de 90% da parede é composta de peptideoglicano
• Presença de ácidos teicóicos e lipoteicóicos → virulência
• Moléculas formadas por ribitol-fofato ligado a D-alanina
• Carregadas negativamente, que atuam na adesão e transporte
• Presença de pontes interpeptídicas

Ácido teicóico Ácido lipoteicóico

Peptideoglicano

Parede
celular

Membrana
citoplasmática
Gram Negativo A maior parte da
PC é a
• Cerca de 10% parede é composta de peptideoglicano
membrana
• A porção peptídica não contém L-lisina e sim DAP externa
• Ausência de pontes interpeptídicas
– ligação direta entre D-alanina e DAP

Membrana
externa Parede
Celular

Peptideoglicano

Membrana
citoplasmática
Membrana Externa
• Segunda bicamada lipídica, externa ao pepetideoglicano
-Porção externa: lipopolissacarídeos (LPS)
-Porção interna: fosfolipídeos e lipoproteínas
- Presença de Proteínas da Membrana Externa (OMPs)

Membrana
externa
→ Lipopolissacarídeo (LPS)
• Lipídio + carboidrato →exclusivo de G-
• Endotoxina: liga-se a TLR4 e LBPs,
podendo levar ao choque séptico

o Dividido em 3 porções:

Polissacarídeo O: região Polissacarídeo Interno ou do Lipídeo A: ácidos

variável com sequências Core: região não variável graxos ligados à
longas de carboidratos não composta por diferentes glicosamino-
usuais e hexoses carboidratos fofatos → porção
tóxica
Antígeno O → varia de acordo com a
bactéria e tem ramificações laterais
Útil para sorotipagem

Core → Invariável, carboidratos comuns

Periplasma
• Espaço entre as membranas citoplasmática e externa
• Concentração de enzimas envolvidas em transporte, quimiotaxia,
construção da parede, etc.
Gram Positivo x Gram Negativo
Gram Positivo e Gram Negativo
As bactérias podem ser divididas em dois grupos
de acordo com as características da sua parede
celular

Gram + Gram -
Hans Christian
Gram, 1884

Microscopia eletrônica → 1950

Gram Positivo x Gram Negativo

Coloração de Gram
Gram Positivo x Gram Negativo
3) Glicocálice
• Estrutura em geral de natureza polissacarídica que reveste as
células bacterianas

• Podem ser construídos de vários tipos de carboidratos,

principalmente ácido D-glucurônico, glicose e ácido siálico → Uma
exceção é B. anthracis que tem cápsula de natureza protéica (ácido
D-glutâmico)

• Quando está firmemente aderido à célula e exclui corantes é

denominado CÁPSULA; quando a matriz é mais frouxa e permite
corantes é chamado CAMADA LIMOSA
Funções do glicocálice
Adesão
• conferem carga negativa à superfície celular

Virulência → cápsulas
• recobrem os antígenos bacterianos
• cápsulas de ácido siálico podem regular negativamente o sistema
complemento
• principal fator de virulência para S. pneumoniae e N. meningitidis
• Sorotipagem → Em E. coli → Ag K
 Apêndices bacterianos
1) Flagelos
• Apêndices que conferem motilidade à célula bacteriana
Polar ou
monotríquio

Lofotríquio

Anfitríquio

Peritríquio
• Filamento: longo, oco, diâmetro Flagelos como estrutura antigênica
constante, formado por flagelina
- Antígeno H em enterobactérias
disposta helicoidalmente - Sofre variação de fase → evasão da
resposta imune
• Gancho: largo, formado por
FlgE, prende o filamento no
corpo basal

• Corpo basal: conjunto de anéis

Filamento
sucessivos que ancoram o flagelo

→ O flagelo se move muito Gancho

rapidamente, através da força Corpo basal
próton-motiva e segue sinais de
quimiotaxia
Endoflagelos
• Presente em espiroquetas
• Percorrem todo o corpo da
bactéria pelo periplasma e
prendem-se pelos ganchos nas
extremidades
• Quando giram, conferem o
movimento espiralado
Motilidade por deslizamento
• Característico do grupo
Cytophaga–Flavobacterium
• Proteínas da membrana
citoplasmática impulsionam
proteínas da membrana
externa ao longo de trilhos

Endoflagelo

Gancho Anéis
2) Píli e Fímbrias
• Apêndices protéicos não-flagelares (pilina)
• Mais curtos e numerosos que os flagelos

Fímbrias: mais numerosas, envolvidas em processos de adesão

Pili: um ou dois por célula, envolvidos em processos de conjugação

Pílus Fímbrias Flagelo

Fímbrias

Virulência: as fímbrias podem sofrer variação de fase e variação antigênica