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CITOLOGÍA Y GENÉTICA
“Técnicas citológicas e histológicas”
Técnicas especiales.
Examen directo o inmediato de
células o tejidos vivos
Se utiliza Los M/O, de campo claro, especialmente los
M. de Contraste de Fase o Interferencia. (Observación
de Glóbulos rojos, protozoarios, algas, etc.)
Protozoario Vorticela
Coloración vital
Paramesium Vorticela
Técnicas corrientes o rutinarias
Examen del Material fijado: Frotis de Celulas ,Cortes de
Tejidos u Organos (examen mediato) al MO y ME
Técnica para MO:
Obtención de la muestra
Fijación (Fijadores:formol al 10%, alcohol absoluto y
mezclas fijadoras: Bouin (ácido acético, ácido pícrico,
formol), Zenker (bicromato de potasio, bicloruro de
mercurio, ácido acético), etc.
Corte : Lavado, deshidratación, aclaración, inclusión
en parafina, confección de los bloques.
Coloración: Hidratacion Gradual Aclaramiento
Montaje
Preparacion de Celulas
Descamadas de la Mucosa Oral
Inclusión en parafina
Inclusión en parafina
Procedimiento:
Desparafinado de los cortes con xilol.
Hidratación gradual. Alcohol de 100%, de 95%, agua
destilada.
Coloración con hematoxilina. Tiñe los núcleos de color
azul o púrpura oscuro.
Lavado en agua corriente y viraje.
Coloración con eosina del citoplasma.
Deshidratación gradual.
Aclarado en xilol.
Montaje con bálsamo de Canadá.
Coloración corriente: H.E.
Fijación
Los fijadores más utilizados son el tetraóxido de osmio y el
glutaraldehído, las muestras a fijarse deben ser muy pequeñas en
forma de cubos de 1 a 2 mm de lado.
Corte
Los cortes deben tener un espesor de 20 a 100 nm
Coloración
Vapores o soluciones de metales pesados como el acetato de
uranilo o el hidróxido de plomo.
El ácido ósmico, usado como fijador, también actúa como
“colorante”, el ácido fosfotúngstico, sombreado con vapores de
oro o platina.
Técnica para la obtención
de muestras al ME
TÉCNICAS ESPECIALES:
Métodos o procedimientos que se utilizan en trabajos de investigación
de Biología Celular. Las hemos subdividido en técnicas especiales para
la observación de células vivas y técnicas de citoquímica e
histoquímica.
2. Cámaras transparentes:
C,amara anterior del ojo ´transplate de tejidos
TÉCNICAS ESPECIALES:
Cultivo de células.
Procedimiento:
Homogeneización: fraccionamiento celular mediante un
ligero machacado
Ruptura de membrana celular y liberación de contenido
Centrífugas
Centrifugación.Isopicnica Centrifugación Zonal
Separa las partículas en La muestra se deposita en la
gradiente de densidades. parte superior de la gradiente
Utiliza solución con cloruro de densidades formada.
de cesio. Utiliza gradiente de sacarosa
Separa partículas similares en Separa particulas en función
tamaño , pero diferente de la masa.
densidad. Separa mitocondrias,
Separa Ac. Nucleicos o lisosomas ,peroxisomas
diferentes organoides
celulares
TÉCNICAS ESPECIALES:
Citoquímica e Histoquímica
Muestra “in situ” células y tejidos, la ubicación de los
diferentes componentes químicos.
Métodos químicos y
Métodos físicos
Métodos químicos
Son reacciones químicas específicas para detectar sustancias.
Colaración Sciff.PAS:
Proteínas: R. Ninhidrina
-Generales
- De grupo ,
- Específicas.
Enzimas
Fijación inmediata a temperat.
inferiores a 0 º C y los cortes
generalmente se realizan en un
criostato congeladora.
NADPdiaforasas sarcosomas Crióstato para cortes de histoquímica,
Sal de tetrazolio (mitocondrias Inmunohistoquímica, imnufluorescencia,
azules)
Autorradiografía, patología, neurociencia,
etc.
Lípidos: Coloración con Sudán III
Métodos químicos
Ácidos Nucleicos: Reacción de Feulgen para DNA
Técnica:
Hidrólisis con ácido clorhídrico normal desprende las
purinas de la desoxirribosa quedando un grupo aldehído
libre que se colorea con el reactivo de Schiff- PAS.
Histoprocesamiento Histoinclusión
Inmunohistoquímica - Inmunofluorescencia