INSTITTUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE GENÉTICA MICROBIANA

PRÁCTICA 1.

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE DNA

EQUIPO 3
BENÍTEZ BECERRIL ROCÍO
B E LT RÁ N C O RT É S J O S É Á N G E L
Ácidos nucleicos

Polímeros lineales formados por

nucleótidos que están compuestos por
un azúcar, un grupo fosfato y bases
nitrogenadas.
Purinas
 Están formadas por de dos anillos
heterocíclicos fusionados

PURINA
Pirimidinas
 Formados por un anillo
heterocíclico de seis
miembros

Pirimidina
Azúcares

Ribosa Desoxirribosa
 Nucleósido
Monómeros que están compuestos de bases nitrogenadas y un azúcar enlazado a un nitrógeno
de anillo de una purina y pirimidina.
o Las pentosas están unidas a las bases nitrogenadas por medio de un enlace glucosídico, que en las purinas
se la en el N-9 y en las pirimidinas en el N-1.

Timidina
Nucleótido

Son nucleósidos fosforilados con

uno o mas grupos fosfato
Enlaces de la estructura del DNA
 Las pares de bases se mantienen juntos por puentes de hidrógeno, que aunque son
interacciones débiles estabilizan la hélice debido a su gran número.
 las bases de pares apiladas se atraen mutuamente mediante fuerzas de Van der Waals, la
energía asociada a una única interacción es muy débil, sin embargo, en la doble hélice es
sustancial.
Estructura primeria, secundaria
y terciaria.
 Primaria: colocación ordenada de
nucleótidos uno tras otro unidos por
grupos fosfato.
 Secundaria: tiene una disposición
helicoidal que caracteriza la doble hélice
del DNA.
Estructura
terciaria.

Está constituida por

plegamientos complejos que
permiten el
empaquetamiento del DNA.
Un tipo de estructura
terciaria es el
superenrollamiento, el cual
puede ser positivo o
negativo.
Propiedades fisicoquímicas del
DNA.
Estabilidad, vicosidad
Propiedades del DNA. "Artículo"
"En el aislamiento del ADN una gran dificultad es mantener físicamente intacta una molécula rígida de
este tipo."

"Un método para aislar ADN casi libre de proteína y ARN fue publicado, por ejemplo, por Marmur. Las
paredes de las células bacterianas se digieren con la enzima lisozima o se rompen con un detergente. Se
utiliza perclorato sódico para disociar la proteína y el ácido nucleico, y se desproteiniza la solución
agitando con una mezcla de cloroformo e alcohol isoamilico. "

"Un procedimiento alternativo para aislar el ADN polimerizado alto de tejidos animales es el método de
extracción de fenol de Kirby"
"En general, la estructura secundaria del ADN nativo depende de su contenido de las bases
guanina y citosina (G + C). Cuanto mayor es el contenido de G + C, más fuertes son las fuerzas
que mantienen unidas las dos cadenas. "
"Hay además el hipercromismo residual, que está presente incluso en los polímeros monocatenarios
medidos separadamente y que sólo se hace evidente cuando el polímero se descompone en
mononucleótidos. Incluso y los trinucleótidos muestran hipercromismo residual. Se debe
presumiblemente a una interacción entre bases vecinas unidas entre sí como oligo-nucleótidos o
polinucleótidos "
"Para describir cuantitativamente el efecto hipercrómico, podemos definirlo en términos de una
temperatura � � en la que el proceso está medio completo. El valor de � � es característico para una
especie particular de ADN y depende, en una primera aproximación, del contenido de G + C en ese
ADN a un pH y una fuerza iónica especificados."
"� � = 69.3 + 0.41(� + �)"
"Si por otra parte la muestra de solución de ADN calentada se enfría extremadamente lentamente,
tomando quizá 3 h para enfriar de 91ºC a 48ºC, la absorbencia del ADN retorna casi a su valor original a
25ºC; Esto equivale a decir que la estructura helicoidal doble con su emparejamiento exacto de la base
es en gran parte, si no completamente restaurada. "
"La renaturalización del ADN es un proceso notable, teniendo en cuenta la gran longitud de las dos
hebras aleatoriamente enrolladas de ADN desnaturalizado que hace que encuentren su posición de
coincidencia exacta para poder reformar una doble hélice precisa. La renovación funciona mejor con
las moléculas de ADN del fago más cortas y casi con el ADN muy largo de los organismos superiores"

"La facilidad de la renaturalización está relacionada con la probabilidad de que cualquier parte de una
cadena de nucleótidos de cadena sencilla encuentre susecuencia complementaria y se registre en
ella. Una vez que esto se ha logrado, el resto de los hilos renaturalizan rápidamente. La probabilidad
de esta iniciación de renaturalización aumenta mucho si el ADN se retícula químicamente antes de la
desnaturalización o si las hebras permanecen íntimamente entrelazadas después de la
desnaturalización "
Conceptos:
oDesnaturalización: Cambio estructural por rompimiento de enlaces o puentes de hidrogeno, esta se puede dar en
condiciones drásticas como un pH elevado, altas temperaturas o por compuestos que interfieren con la formación de
puentes de hidrógeno
o Degradación:
o Efecto hipercrómico: Aumento en la intensidad de absorción
o Efecto hipercrómico residual:
https://books.google.com.mx/books?id=7XAlCgAAQBAJ&pg=PA48&dq=DEGRADACION+de+dna&hl
=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwjxr9324YngAhUNIqwKHc0CAfgQ6AEIQTAE#v=onepage&q=DEGRADACION
%20de%20dna&f=false
https://books.google.com.mx/books?
id=FXDiqLK6GmAC&pg=PA835&dq=efecto+hipercromico&hl=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwjj-
N_t4ongAhVQR6wKHSabCRcQ6AEISDAG#v=onepage&q=efecto%20hipercromico&f=true