DIAGNÓSTICO BASADO EN

CITOMETRÍA DE FLUJO DE
ENFERMEDADES DE
INMUNODEFICIENCIA
PRIMARIA
 Infecciones recurrentes o
Grupo heterogéneo de graves, autoinmunidad,
PID trastornos autoinflamación o
monogenéticos del SI neoplasias.

Recuento sanguíneo Evaluación de la función de

completo neutrófilos y componentes del
complemento
Niveles de
Títulos de anticuerpo
Iinmunoglubulina
Aplicación de la citometría de flujo en el dx de las
enfermedades de la inmunodeficiencia primaria
-Evaluar la población y subpoblación celular específica

ENFERMEDAD PRUEBA
XLA Ausencia de cel B
SCID Cel T ausentes y número variable de cel
B y NK(dependiendo del defecto)
XLP1 Las cel Inkt marcadamente reducidas
ALPS Aumento de cel T (CD4/8) doble
negativas TCR-alfa/beta+
HIES Y CMCD Disminución de cel Th17
-Evaluar la proteína de la superficie celular específica

ENFERMEDAD PRUEBA
CVID CD19 en cel B
BAFF-R en cel B
ICOS en cel T activadas
HIGM ligada al X CD40L en cel T activadas
HIGM autosómica recesiva CD40 en cel B
MSMD IFN-yR1 en monocitos
IL-12Rbeta1 en cel T activadas
LAD1 CD18 en granulocitos
X-SCID CD132 en linfocitos
CGD deficiencia en gp9-phox y p22- Citocromo b558 en los granulocitos y
phox las cel B
Deficiencia de IL-17RA IL-17RA en linfocitos y monocitos
-Evaluar la proteína intracelular específica

ENFERMEDAD PRUEBA
XLA BTK en monocitos y plaquetas
Síndrome de Wisjott-Akdrich y WASp en linfocitos y células mieloides
trombocitopenia ligada al cromosoma X
XLP1 SAP en células T CD8+ y cel NK
XPL2 XIAP en linfocitos
FHL2 Perforina en cel T CD8+ y cel NK
FHL3 Munc13-4 en plaquetas
Deficiencia de ZAP70 ZAP70 en cel T
CGD deficientes en p47-phox y p67- P47-phox y p67-phox en granulocitos
phox
Deficiencia de DOCK8 DOCK8 en linfocitos
Haploinsuficiencia de CTLA4 y CTLA4 en cel TCD4 y FOXP3
decifiencia de LRBA
-Evaluar la proteína nuclear específica

ENFERMEDAD PRUEBA
IPEX FOXP3 en cel TCD4+ CD25+

-Evaluar los efectos biológicos

ENFERMEDAD PRUEBA
CVID Disminución de las cel B de memoria
conmutada
Síndrome de Omenn e hipomorfismo Diversidad oligoclonal de TCD
SCID
HIGM ligada al X Disminución de cel B de memoria y cel
T CD4+ de memoria
-Evaluar la función
ENFERMEDAD PRUEBA
MSMD STAT1 fosforilación en monocitos en respuesta
a IFN-y
CMCD(ganancia de función STAT1) STAT1 fosforilación en monocitos en respuesta
a IFN-y
FHL3/4/5, Sindrome de Chediak-Higashi y Expresión de CD107a en cel NK y CTLs
síndrome de Griscelli
XLP2 TNF-alfa en monocitos en respuesta a
dipéptidos de muramilo
CGD DHR123 en granulocitos, monocitos y cel B
X-SCID SCAD deficientes en JAK3 STAT fosforilación en linfocitos en respuesta a
la estimulación de citoquinas
HIGM ligada al X No se observo unión
Deficiencia de IRAK4 y mMyD88 TNF-alfa en monocitos en respuesta de LPS
Deficiencia de IL-10R STAT3 fosforilación en los linfocitos en
respuesta a IL10
Enfermedad autoinmune multisistémica de Aumento de fosforilación STAT3
inicio infantil 1(mutación GOF heterozigótica
en STAT3)
 clasificarse
Tecnología biofísica basada en la
utilización de luz láser, empleada
Inmunodeficiencia en el recuento y clasificación de
combinada severa células según sus características
morfológicas, presencia de
biomarcadores, y en la ingeniería
de proteínas.

• Formas más graves de inmunodeficiencias

primarias
• Ausencia total de inmunidad mediada por
células T y la función de las células B
alterada

T - B - NK - SCID T - B - NK + SCID T−B+NK− T−B+NK+ SCID

• Mutaciones afectan los

• Disgenesia reticular • Deficiencias de IL-
genes activadores de • Deficiencia de X-
• Deficiencia de 7Rα, CD3δ, CD3ε y
recombinación RAG SCID y JAK3
adenosina CD3ζ. En X-SCID
1 y RAG2 , Artemis,
desaminasa
ADN ligasa IV y
Cernunnos
 Fosforilación de las Evalúan mediante
X-SCID Inmunodeficiencia STAT citometría de flujo
combinada severa ligada
deterioro STAT5 y STAT3
al X en respuesta a la
estimulación con IL-2 e
IL-21
 1/2 de todos los pacientes con
SCID
 Células T y NK están ausentes
Interactúa con la cadena γ
 Recuento de células B es normal o Deficiencia de JAK3
común.
alto

Expresión en las células T

Deficiencia de ZAP70
IL2RG

También forma parte

de los receptores de • codifica la cadena
IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e γ común (CD132)
IL-21

transductores de señales y activadores

de la transcripción
PACIENTE CON INMUNODEFICIENCIA COMBINADA SEVERA
LIGADA AL X

 Las células T (CD3 + ), las células B (CD19 + ) y las células NK

(CD16 + CD56 + ) separadas en función de la puerta de los
linfocitos. Las células T y NK están ausentes, y el número de
células B aumenta.

 CD132 (cadena γ común) expresión por células B CD19 + . Las

células del paciente carecen de expresión de CD132. .

 Fosforilación de STAT5 después de la estimulación con IL-2. Las

células del paciente no responden.

 Fosforilación de STAT3 después de la estimulación con IL-21. Las

células del paciente no responden
 PACIENTE CON AGAMMAGLOBULINEMIA LIGADA AL X

CD19 + CD20 + células B se

reducen notablemente.
Agammaglobulinemia
ligada al X
La expresión BTK) está ausente
CARACTERISTICAS TIPICAS en los monocitos de los
pacientes

 Ausencia de células B circulantes

 Reducción severa de todas las
inmunoglobulinas

mutaciones en el gen BTK EVALUAR

obligatoriamente
 N° células B ausentes o en monocitos o
marcadamente reducidos plaquetas

Determinados citometría de
flujo en función de la falta
de células que expresan
CD19 y / o CD20
 PACIENTE CON SÍNDROME DE HIPER IGM LIGADO AL X

Las células son positivas para

CD69, lo que indica células T
activadas, pero solo las células
positivas para control CD69

Síndromes hiper IgM

Involucradas:
 Recombinación de cambio de
clase de células B
 Hipermutación somática CD154 expresión en
CD3 + CD8 - células T se
evaluó. Las células del
niveles bajos de paciente no pudieron expresar
IgM sérica normal o CD154
aumentada IgG e IgA

gen afectado importante papel expresión en células B,

con mayor en la función de las monocitos o células
frecuencia células T dendríticas.
es CD40L

herencia recesiva ligada al X

 Inmunodeficiencia
variable común
ICOS
 Producción defectuosa de
anticuerpos específicos  mayor Pequeño
complejos con CD21, CD81 y
susceptibilidad a infecciones subconjunto
recurrentes y crónicas  con de CVID CD19 CD225 que colaboran con el
receptor de células B
frecuencia a autoinmunidad,
trastornos linfoproliferativos  cáncer.
Se expresa de forma
BAFFR constitutiva en las
Número normal o bajo de células B
células B

memoria memoria basadas expresión

naive IgM conmutada en CD27 de IgD /
IgM
Reducido
 PACIENTE CON SÍNDROME DE WISKOTT-ALDRICH

Síndrome de Wiskott-
Aldrich y trombocitopenia La expresión de WASp
citoplásmica se redujo
ligada al X notablemente en pacientes
con células T CD3 + , células
B CD19 + y monocitos CD14
o Microtrombocitopenia persistente +
o Eccema
o Inmunodeficiencia celular y
humoral
o Mayor riesgo de enfermedad
autoinmune y neoplasia
hematológica

anticuerpos
mutaciones g monoclonales contra
en WAS WASp
 Sindrome linfoproliferativo ligado
al cromosoma x Citrometria de flujo
también útil para
identificar casos
Clasificación atípico : mosaicismo
XLP
Susceptibilidad a la infección Tipo 1 Tipo 2
por el virus Epstein-Barr (XLP1) (XLP2)

Causado por
Clínicamente: Linfohistiocitosis Causado por
mutaciones en el
hemofagocitica e mutaciones en
gen XIAP o BIRC4
hipogammaglobulina con o sin el gen SH2DA
Que codifica XIAP
linfoma Que codifica
SAP

Posen numero
Estas proteínas son importantes Poseen bajo
extremadamente
para identificar a los pacientes numero variable
reducido de
mediante citrometria de flujo de células iNKT
células iNKT
Debido a que XIAP desempeña juega un papel esencial Se encontró que la producción de TNF-a esta
señalización de la proteína del dominio de severamente disminuido en todos los pacientes
oligomerización de unión a nucleótidos (NOD) estudiados con XIAP
 linfohistiocitosis hemafagocitica familiar
asociados con la proliferación incontrolada de los linfocitos
FHL2
activados e histiocitos que secretan grandes cantidades de
citoquinas inflamatoria se puede evaluar mediante la
evaluación de la expresión de
Los defectos genéticos que afectan la citotoxicidad mediada perforinas en células CD56 +CD16+NK
por gránulo están asociados con FHL y células T CD8
Incluyendo perforina (FHL2)
Munc13-4 (fhl3) FHL3
Syntaxin 11 (FHL4)
Munc 18-2 (FHL5) puede detectarse mediante la
detección de la CD107
Sindrome de Griscelli expresión Munc13-4 en plaquetas

Todos los cuales tienen en común

defectos en las vías citotoxicas mediadas
por granuos
 Síndrome linfoproliferativo autoinmune
aumento de la
incidencia de enfermedades malignas linfoides.
Trastorno de la
homeostasis de linfoproliferación crónicano maligna
linfocitos caracterizado
manifestaciones autoinmunes
(citopenia principalmente autoinmune)

Características inmunológicas

Aumento del nivel de células T CD4CD8 ´TCR-

ALPS a/b +circulantes denominadas células DNT
(células T dobles negativas)
Presentan mutaciones
en los genes que
regulan la ruta de Celulas T del paciente
muerte celular Celula T de control sufren una apoptosis ALPS no lo hace
programada mediada robusta como se muestra por células anexinas
por Fas después de la estimulación con anticuerpos FAS
FAS, FASLG y CASP10
 Síndrome IPEX
Transtorno autoinmune raro
asociado a X
Causado por mutaciones en
el ge FOXP3
Este gen tiene un papel
critico en el desarrollo y la
función de células T reg CD4
CD25

Características
Características
inmunológicas
Pacientes con IPEX carecen o tiene CD25 y STAT5 afectan al desarrollo y
Enteropatía grave la función de Treg las mutaciones
endocrinopatías (diabetes /tiroides) un numero reducido de células Treg
CD4 CD25 FOXP3 o CD4 CD25 en ellos presentan un tipo de IPEX
Dermatitis escematosa pero en numero reducido
CD127 low
 Haploinsuficiencia CTLA4 y deficiencia de
LRBA Pacientes con CVID con
fenotipo tipo IPEX
CTlA4 molécula estimuladora expresada por
Mutaciones de perdida de función heterocigótica
células T activadas , similar a la molécula co-
estimuladora CD28 de células T que se une a CD80
y CD86
Características
CTLA4 inmunológicas
transmite una
señal inhibidora Expresion reducida en células T CD4
a las células T FOXP3 activadas

CD28 transmite Existe similitud fenotípica entre las

una señal deficiencias LRBA y CTLA4 puede
estimuladora explicarse por el defecto commun
de CTLA4
Susceptibilidad mendeliana
a la enfermedad
micobacteriana
MSMD se caracteriza
por la vulnerabilidad a
la infección por mico
bacterias débilmente
virulentas y salmonella
Pacientes afectados tiene
mutaciones en los genes implicados
en la vía IL-12/23 IFN-y
Pacientes con deficiencia de
IL12RB1 e IFNyR1examinados
mediante citometria de flujo
Candidiasis
mucocutanea
Se caracteriza por
infecciones recurrentes en
piel ,uñas membrana
mucosa
Autosómico dominante
Presentan
Características
Mutaciones de STAT3 heterocigótica
inmunológicas
Deficiencia de IL-12p40
Deficiencia de IL-12Rb1
A menudo niveles bajos de células Poliendocrinopatia autoinmune ,
th17 (Al igual que HIES) candidiasis , distrofia ectodérmica
APECED
Causa mas común de
CMCD son las mutaciones
de ganancia de función Pueden desarrollar anticuerpo
heterocigótica en STAT1 neutralizantes contra IL 17-A
IL-17F y/o ILL22
 Enfermedades granulomatosa crónica
Afecta a la función bactericida de los
fagocitos
y se caracteriza por infecciones
bacterianas y fúngicas recurrentes.

CGD es causada por defectos en

el complejo NADPH oxidasa,que es responsable ráfaga Se realiza mediante la medición de la producción
respiratoria de fagocitos conduce a de superoxido y se evalúa mediante citrometria de
la generación de superóxido y otras especies reactivas de flujo utilizando la oxidación DHR123
oxígeno
Los subtipos de CGD puede determinarse por análisis
genético y citometria de flujo Esto permite observar la distinción entre CGD ligada
P47 y p67 indentificados con
tinción intracelular usando al x y la forma autosómica resesiva
Forma ligada al x y anticuerpos monoclonales
autosómica recesiva
El anticuerpo mAb 7D5 reconoce componentes superficiales de
Mutaciones en cinco componentes gp91, NADPH oxidasa y puede diagnosticar pacientes con deficiencia
p22, p47 ,p67,p40 del complejo NADPH de gp9phox y p22phox
CONCLUSIONES
Herramienta fundamental para la evaluación y diagnóstico de
los
PID.
Proporciona resultados rápidos y, a menudo sugiere el
diagnóstico correcto.

Citometría juega un papel importante en los pacientes

evaluación costo-efectiva de los pacientes con sopecha de PID

Análisis genético : proporciona un diagnostico definitivo