16.

Estudio pormenorizado de
algunas proteínas
 Hemoproteínas:
Hemoglobina y Mioglobina
Hemoproteínas

Son proteínas conjugadas cuyo grupo prostético es una porfirina

coordinada a un ion metálico. Suelen estar relacionadas con todos los
aspectos del metabolismo aeróbico

- Transportadores de oxígeno como la hemoglobina y la mioglobina

- Clorofilas: porfirinas coordinadas a un ion Mg++
- Transportadores electrónicos como los citocromos
- Enzimas relacionadas con el transporte electrónico como la
citocromo oxidasa
- Enzimas relacionadas con el stress oxidativo, como las peroxidasas
- Coenzimas cobamídicas o corrinoides (vit. B12)
 CH2
H3C CH

N
CH3

HO N Fe++ N

CH3 CH2 CH2 COO-

N

Hemo a: O C CH2
citocromo oxidasa H CH2
COO-
 H3C CH2 CH2 S Cys 17

N
Cys 14 S CH2 CH2 CH3

N Fe++ N

CH3 CH2 CH2 COO-

N

H3C CH2
Hemo c: CH2
citocromo c COO-
Citocromo c
 Met 80

Fe

Cys 14

Cys 17
Hemo c
His 18

Entorno del grupo hemo

en el citocromo c
 CH2
H3C CH

CH3 en clorofila a
R:
CHO en clorofila b N
R

N Fe++ N
Mg++
O
CH2 CH3
N
O

CH3 O C
C
O CH3
O

Clorofilas
Bacterioclorofila
 Transporte en sangre de O2

1 L de sangre arterial desprende 200 mL de O2 STP. Dada su poca

solubilidad, es de suponer que la mayoría circula en forma de alguna
combinación química.

En efecto, el oxígeno circula en combinación con la hemoglobina,

presente a la concentración de 145 g/L en sangre, toda ella en el
interior del hematíe (eritrocito, góbulo rojo), a su vez en cantidad
de unos 5 x 106 por ml.

El peso molecular de la hemoglobina es de 64000 (2.2 mmoles.L-1);

los 200 mL de O2 suponen 8.8 mmoles.L-1; por tanto, el transporte
se hace en razón de 8.8/2.2 = 4 moles de oxígeno por mol de hemo-
globina.
Teniendo en cuenta que en la molécula de hemoglobina hay cuatro
átomos de hierro, podemos decir que el transporte tiene lugar en
una proporción de un mol de oxígeno por mol de hierro.

La sangre arterial está equilibrada con una presión parcial de

oxígeno de aproximadamente 95-100 mm Hg. La sangre venosa
está equilibrada con una presión parcial de oxígeno de
aproximadamente 40 mm Hg.

La sangre arterial está saturada prácticamente a 100 %; la venosa,

un 70 %. Por tanto, el paso por los tejidos periféricos desprende un
30 % del oxígeno combinado con la hemoglobina.
Hemoglobina: proteína globular, conjugada y oligomérica

- Grupo prostético: hemo

hemo: protoporfirina IX + ion ferroso Fe2+

- Cuatro subunidades, iguales dos a dos:

Hemoglobina A1 (HbA1): a2b2
Hemoglobina A2 (HbA2): a2d2

Hemoglobina fetal (HbF): a2g2

Hemoglobina Gower 1: z2e2
Hemoglobina Gower 2: a2e2
Hemoglobina Portland: z2g2

- Se conoce, además, un gran número de hemoglobinas

mutantes.
 CH2
H3C CH

N
H2C CH CH3

N Fe++ N

CH3 CH2 CH2 COO-

N

H3C CH2
CH2
COO- Grupo Hemo b:
Protoporfirina IX + Fe
Hélice F Entorno del
Fe++ grupo hemo
en la
mioglobina

His 93

Hélice E
 Tanto en la hemoglobina como en la mioglobina,
el hierro siempre está en estado ferroso, Fe ++

Cuando el ion ferroso, Fe++ se oxida a férrico, Fe +++,

la hemoglobina se convierte en metahemoglobina, que
no es funcional

Conviene no confundir metahemoglobina con

oxihemoglobina, que es la forma oxigenada (pero no
oxidada) de la hemoglobina

Desoxihemoglobina + 4O2 Oxihemoglobina

 Homología de secuencia a - b - Mioglobina

Cadena a V-LSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHF-DLSH-----GSA 53
Cadena b VHLTPEEKSAVTALWGKV--NVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSTPDAVMGNP 58
Mioglobina -GLSDGEWQLVLNVWGKVEADIPGHGQEVLIRLFKGHPETLEKFDKFKHLKSEDEMKASE 59
*: : * **** . * *.* *:: .* * * * .*. ..

Cadena a QVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHL 113

Cadena b KVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHF 118
Mioglobina DLKKHGATVLTALGGILKKKGHHEAEIKPLAQSHATKHKIPVKYLEFISECIIQVLQSKH 119
.:* ** .* *: . : : .. : .*:: *. * :: :.::.. :: .* :

Cadena a PAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR------ 141

Cadena b GKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH------ 146
Mioglobina PGDFGADAQGAMNKALELFRKDMASNYKELGFQG 153
:* . .:.: :* : . . :: :*:
 Hélice C

C Hélice D

Hélice B

N
 Subunidad b

Subunidad a

Mioglobina
Situación del
grupo hemo
 a1

b1
b2

Hemoglobina A1
(forma T, desoxi-)
a2
 a1

b2 b1

Hemoglobina A1
(forma R, oxi-)
a2
 Hélice F Entorno del
grupo hemo en la
desoxihemoglobina

His 87 (a)
His 92 (b)
Hélice E
 Entorno del
grupo hemo en la
oxihemoglobina

O2

Hélice F

His 87 (a)
Hélice E
His 92 (b)
 Saturación de O2 en Mioglobina y Hemoglobina

100

Mioglobina
80
Saturación de O2, %

60

40
Hemoglobina
20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 100

Vol., Mb
80
Saturación de O2, %

60 Vol., Hb

40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 Concepto de P50
100

80
Saturación de O2, %

60

40

20

0
0 20 40 60 80 100

P50 Mb P50 Hb PO2, mmHg

 Efecto del pH sobre la saturación de la hemoglobina
(Efecto Bohr)
100

80
pH 7.0
pH 7.4
Saturación de O2, %

60

pH 6.6
40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 Efecto de la presión parcial de CO2

100

80
60 mmHg
Saturación de O2, %

60
40 mmHg
80 mmHg
40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mm Hg
 Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturación de la hemoglobina

100

80
Saturación de O2, %

0
60 0.1 mM
1 mM

40

20

0
0 20 40 60 80 100

PO2, mmHg
 Modelo MWC
Forma R, oxi-

s s s s s s s
s s s

i i i
i i i i i i i

Forma T, desoxi-
 Contacto a-a, desoxihemoglobina

a
H2N
C NH2+ -
OOC CH2 C Asp 126
Arg 141
(CH2)3 NH
C
COO- +
H3N (CH2)4 C Lys 127

+
H3N C Val 1 a
 Contacto a-a

Arg 141 (C-t)

Asp 126

a2
Arg 141 (C-t)

a2

a1 Asp 126

Lys 127 Lys 127

a1

Oxi-
Desoxi-
 Contacto a-b, desoxihemoglobina

a
H2N
Arg 92 C NH2+
(CH2)3 NH -
OOC CH2 CH2 C Glu 43
C

Lys 40 C (CH2)4 NH3+ - +

b
OOC HN
CH CH2
NH
His 146 (C-t)
 Contacto a-b

His 146 (C-t)

His 146 (C-t)

Lys 40

b b
b
Lys 40

Glu 43
a Glu 43

Arg 92
a
Arg 92
Desoxi- Oxi-
 Contacto a-b
b
b
Asp 99 Asp 99

Tyr 42 a
a
Tyr 42

Forma T, desoxi- Forma R, oxi-

 Contacto b-b, desoxihemoglobina

b
Asp 94
- + NH
C CH2 COO HN
CH2 C
b
His 146
 Contacto b-b
His 2
His 2

His 143 Val 1

Val 1
His 143
Lys 82
Lys 82
Lys 82
Lys 82
His 143
Val 1 His 143
Val 1
His 2
2,3-BPG His 2

Forma T, desoxi- Forma R, oxi-

Forma T, desoxiHb Movimiento del
ion Fe++ en la
oxigenación de la
hemoglobina

Forma R, oxiHb
Inmunoglobulinas
Todos los organismos vivientes tienen mecanismos
para distinguir lo propio de lo extraño

- Hongos y plantas, por ejemplo, mediante la producción de

metabolitos secundarios potencialmente tóxicos para otros
organismos: antibióticos, alcaloides, etc.

- Bacterias, mediante el sistema de restricción de DNA: DNAs

extraños son degradados específicamente por las enzimas de
restricción

- Vertebrados, mediante el sistema inmune.

El sistema inmune consta de dos tipos de respuesta:

- La inmunidad celular, mediante la cual células inmunocompe-

tentes ( linfocitos T) eliminan células extrañas introducidas en
el organismo (p.e. un injerto, un tumor, una célula transforma-
da por un virus, etc.)

- La inmunidad humoral, en la que otras células inmunocom-

petentes (linfocitos B) producen proteínas específicas dirigidas
contra lo extraño, llamadas anticuerpos.

- Todos los anticuerpos pertenecen a una superfamilia de proteínas

conocidas como inmunoglobulinas
Llamamos antígeno a la molécula que, introducida en un orga-
nismo, produce una respuesta inmune, sea humoral o celular.

En la inmunidad humoral, el antígeno se une específicamente a

un linfocito B que produce un anticuerpo complementario. Este
linfocito se multiplica (clon celular) y se transforma en célula
plasmática o plasmocito, que es la célula encargada de la
producción de anticuerpos.

Cada linfocito B produce un solo y único tipo de anticuerpo. Por

esa razón, los anticuerpos obtenidos de un único clon de
linfocitos B reciben el nombre de anticuerpos monoclonales.
El estudio de las inmunoglobulinas se vio facilitado por la
naturaleza de los mielomas, tumores malignos de células
plasmáticas, que producen un solo tipo de anticuerpo (anti-
cuerpo monoclonal).

En algunos mielomas humanos se produce la llamada proteína

de Bence-Jones, que es excretada en la orina, a partir de la que
se puede purificar.

Es fácil inducir mielomas en ratón.

A partir de todas estas circunstancias se pueden obtener anti-

cuerpos químicamente puros (monoclonales) lo cual facilita
el estudio químico de las inmunoglobulinas
Porter, 1959:

El tratamiento con papaína escinde la molécula de

inmunoglobulina (Ig) en tres fragmentos, dos de ellos
idénticos: dos Fab y un Fc
Fab: Antigen Binding (fijador de antígeno)
Fc: Crystallizable (cristalizable)

Edelman, 1959:

El tratamiento con mercaptoetanol y guanidina 8M, seguido

de cromatografía, disocia la Ig en dos componentes de pesos
moleculares 50 kDa (H, de heavy, pesado) y 25 kDa (L, de
light, ligero). Como el peso molecular de la Ig nativa es de
150 kDa, se deduce que su estructura es H2L2
Por estudios inmunológicos, se detectan los siguientes isotipos:

- Cadena ligera: k, l
- Cadena pesada: g, a, m, d, e

En los dominios constantes puede haber una ligera variabilidad

en cada cadena (afecta a uno o dos aminoácidos) dando lugar a
las variantes conocidas como alotipos

En los dominios variables hay muy poca homología de secuencia;

cada anticuerpo es único hacia su antígeno: los idiotipos

En cualquier caso, en cada anticuerpo las dos cadenas ligeras y las

dos pesadas son iguales entre sí.
Cadena pesada o H: g, a, m, d, e

Cadena ligera o L: k, l

H C CH3 CH2

H C CH3 CH2

Puente disulfuro

Inmunoglobulinas
Cadenas ligeras

212 aminoácidos
2 dominios:
VL, N-t (108aa)
CL, C-t (104 aa)

Cadenas pesadas

Variable; 450 aminoácidos en IgG

Cuatro o cinco dominios:
VH, N-t (108 aa)
CH1, CH2, CH3 (y CH4)

En los dominios constantes hay posibilidad de

variaciones alotípicas (uno o dos aminoácidos solamente)
Regiones hipervariables (CDR) en el dominio
variable de las cadenas H y L en las Ig

N C L
1 30 50 93

N
35
C H
60 87 105
 Dominio de
Inmunoglobulina
 Cadena ligera, L

N
CL

VL
 VH
Cadena pesada, H
N

C
CH1

CH3

Oligosacárido
CH2
 L

Cys H128

Cys L 214 (C-t)

Puente disulfuro entre cadenas pesada y ligera

 Fab
Inmunoglobulina G

H1
H2
Oligosacárido
L1
Fab
L2

Fc
Inmunoglobulina G g2k2 , g2l2

- Constituye el 70-80 % de las Ig séricas

- Contingente mayoritario de la respuesta inmune secundaria
- Cuatro tipos distintos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
- Monomérica
- Bajo contenido en carbohidrato (2-3 %)
Inmunoglobulina A (a2k2)2 , (a2l2)2

- Constituye el 10-20 % de las Ig séricas

- Es la Ig propia de las secreciones (jugo gástrico, saliva, leche)
- Dos tipos: IgA1, IgA2
- Normalmente dimérica: unión covalente por el péptido J
- Alto contenido en carbohidrato (7-12 %)
Inmunoglobulina M (m2k2)5 , (m2l2)5

- Constituye el 5-10 % de las Ig séricas

- Es la respuesta inmune primaria
- Cinco dominios en la cadena pesada
- Elevada proporción de carbohidrato (12 %)
- Pentámero unido por disulfuros y un péptido J
 d2k2 , d2l2
Inmunoglobulina D

- Muy baja concentración en suero (1 %)

- Posiblemente relacionada con el receptor de antígeno
- Alto contenido en carbohidrato (9-14 %)
 e2k2 , e2l2
Inmunoglobulina E

- La más minoritaria
- Cinco dominios en la cadena H
- Membrana de mastocitos y basófilos
- Relacionada con inmunidad a parásitos helmínticos
- Relacionada con fenómenos de hipersensibilidad
(alergia) inmediata: fiebre del heno, asma.
- Alto contenido en carbohidrato
Colágeno
Proteína fibrosa, constituída por empaquetamiento de
moléculas de tropocolágeno o monómero de colágeno

Tropocolágeno: tres helicoides entrecruzados, cada uno

de peso molecular en torno a los 300 kDa, alrededor de 1000
aminoácidos, con una gran cantidad de residuos de Gly, así
como de Pro, normal o hidroxilada.

Los residuos de Lys pueden aparecer asimismo modificados,

bien como 5-hidroxilisina, o como lisina aldehídica (Al-lisina).

Es muy abundante en todos los tejidos de origen mesodérmico,

particularmente en tendones, dermis, fascias y hueso.
 Tropocolágeno

Disposición de los monómeros

de colágeno en la microfibrilla,
que da lugar a un patrón
estriado al microscopio electrónico
Las cadenas de tropocolágeno aparecen unidas unas a otras
en la microfibrilla mediante:

- Cadena lateral de al-lisina unida a cadena lateral de lisina no

modificada a través de base de Schiff y posterior reducción

- Cadena lateral de al-lisina unida a otra al-lisina a través de

condensación aldólica

- Enlaces de hidrógeno entre el grupo -C=O de la prolina y el

-N-H de la glicina, siempre intercatenarios
MFSFVDLRLLLLLAATALLTHGQEEGQVEGQDEDIPPITCVQNGLRYHDR 50
Señal
DVWKPEPCRICVCDNGKVLCDDVICDETKNCPGAEVPEGECCPVCPDGSE 100 Propéptido
SPTDQETTGVEGPKGDTGPRGPRGPAGPPGRDGIPGQPGLPGPPGPPGPP 150
GPPGLGGNFAPQLSYGYDEKSTGGISVPGPMGPSGPRGLPGPPGAPGPQG 200 N-terminal
FQGPPGEPGEPGASGPMGPRGPPGPPGKNGDDGEAGKPGRPGERGPPGPQ 250
GARGLPGTAGLPGMKGHRGFSGLDGAKGDAGPAGPKGEPGSPGENGAPGQ 300
MGPRGLPGERGRPGAPGPAGARGNDGATGAAGPPGPTGPAGPPGFPGAVG 350
AKGEAGPQGPRGSEGPQGVRGEPGPPGPAGAAGPAGNPGADGQPGAKGAN 400
GAPGIAGAPGFPGARGPSGPQGPGGPPGPKGNSGEPGAPGSKGDTGAKGE 450
PGPVGVQGPPGPAGEEGKRGARGEPGPTGLPGPPGERGGPGSRGFPGADG 500
VAGPKGPAGERGSPGPAGPKGSPGEAGRPGEAGLPGAKGLTGSPGSPGPD 550
GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVMGFPGPKGAAGEPGKAGERGV 600
PGPPGAVGPAGKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSPGFQGLPGPAG 650
PPGEAGKPGEQGVPGDLGAPGPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN 700
GAPGNDGAKGDAGAPGAPGSQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGDRGDAGP 750
Helicoide
KGADGSPGKDGVRGLTGPIGPPGPAGAPGDKGESGPSGPAGPTGARGAPG 800
DRGEPGPPGPAGFAGPPGADGQPGAKGEPGDAGAKGDAGPPGPAGPAGPP 850
GPIGNVGAPGAKGARGSAGPPGATGFPGAAGRVGPPGPSGNAGPPGPPGP 900
AGKEGGKGPRGETGPAGRPGEVGPPGPPGPAGEKGSPGADGPAGAPGTPG 950
PQGIAGQRGVVGLPGQRGERGFPGLPGPSGEPGKQGPSGASGERGPPGPM 1000
GPPGLAGPPGESGREGAPGAEGSPGRDGSPGAKGDRGETGPAGPPGAPGA 1050
PGAPGPVGPAGKSGDRGETGPAGPAGPVGPAGARGPAGPQGPRGDKGETG 1100
EQGDRGIKGHRGFSGLQGPPGPPGSPGEQGPSGASGPAGPRGPPGSAGAP 1150
GKDGLNGLPGPIGPPGPRGRTGDAGPVGPPGPPGPPGPPGPPSAGFDFSF 1200
LPQPPQEKAHDGGRYYRADDANVVRDRDLEVDTTLKSLSQQIENIRSPEG 1250
SRKNPARTCRDLKMCHSDWKSGEYWIDPNQGCNLDAIKVFCNMETGETCV 1300
YPTQPSVAQKNWYISKNPKDKRHVWFGESMTDGFQFEYGGQGSDPADVAI 1350
Propéptido
QLTFLRLMSTEASQNITYHCKNSVAYMDQQTGNLKKALLLKGSNEIEIRA 1400 C-terminal
EGNSRFTYSVTVDGCTSHTGAWGKTVIEYKTTKTSRLPIIDVAPLDVGAP 1450
DQEFGFDVGPVCFL 1464
GKTGPPGPAGQDGRPGPPGPPGARGQAGVM
GFPGPKGAAGEPGKAGERGVPGPPGAVGPA
GKDGEAGAQGPPGPAGPAGERGEQGPAGSP
GFQGLPGPAGPPGEAGKPGEQGVPGDLGAP
GPSGARGERGFPGERGVQGPPGPAGPRGAN

Fragmento de secuencia del colágeno aI(1)

(Muchos residuos de Pro aparecen hidroxilados)

Helicoide de poliprolina
Cada helicoide es levógiro,
pero se entrelazan en
forma dextrógira

Helicoide triple del

tropocolágeno
(fragmento, 14 aa/helicoide)
 Tropocolágeno
(fragmento)

Vista lateral
Vista frontal
Glicina cada
tres residuos

Enlaces H a otras cadenas

(grupo -C=O peptídico)

Helicoide aislado del tropocolágeno

Residuos de Gly
en tropocolágeno
 Hidroxilación de prolina
HO OH
O O
C C
N N
C O C O

4-Hidroxiprolina 3-Hidroxiprolina
(mayoritario) (minoritario)
Enzima: procolágeno:prolina monooxigenasa
(prolil hidroxilasa), requiere ácido ascórbico

La hidroxilación de prolina favorece la formación de enlaces H

entre las cadenas
 Hidroxilación de lisina
NH3+
CH2
HC OH Enzima: Procolágeno:lisina monooxigenasa
CH2 (lisil hidroxilasa), requiere ácido ascórbico
CH2
CH
N C La lisina hidroxilada es el punto de unión
H O de oligosacáridos al colágeno

5-Hidroxilisina
 Al-Lisina
CHO
CH2 Enzima: lisil aminooxidasa

CH2
CH2 Forma enlaces cruzados
(entrecruzamientos) covalentes
CH entre los helicoides del colágeno
N C
H O

Al-Lisina
(Lisina aldehídica)
 H O H O H O
Lisina
N C N C N C

(CH2)4 (CH2)4 (CH2)4

NH3+ N NH
C CH2
CHO
(CH2)3 (CH2)3
(CH2)3
C C
C N C N C
N C
Al-lisina H O H O
H O
Base de Schiff Entrecruzamiento
(lisil norleucina)

Formación de entrecruzamiento covalente entre cadenas de

colágeno a través de lisina y al-lisina, (vía base de Schiff)
 Al-lisina H O H O
N C N C

(CH2)3 (CH2)3
CHO O CH
C C
CHO H (CH2)2
(CH2)3
C
C N C
N C
Al-lisina H O
H O
Entrecruzamiento
aldólico

Formación de entrecruzamiento covalente entre cadenas de

colágeno a través de dos al-lisinas, (vía condensación aldólica)
 Tipos de colágeno

Tipo I [a1(I)]2a2(I) Mayoritario (huesos, piel, tendones)

Tipo II [a1(II)]3 Cartílago, vítreo

Tipo III [a1(III)]3 Vasos sanguíneos, cicatrices

Tipo IV [a1(IV)]3 Membrana basal, cristalino

[a2(IV)]3
Tipo V [a1(V)]2a2(V) Superficies celulares
[a1(V)]3
[a1(V)][a2(V)][a3(V)]

Tipo VI Íntima de la aorta

Elastina:
Tramos sin estructura definida entrecruzados
por desmosina
 H O
H O H O N C
N C N C
(CH2)4
Lys (CH2)4 Lys (CH2)4 +
N
NH3+ NH3+
O C C O
(CH2)2 (CH2)2
NH3+ NH3+ H N N H
(CH2)3
Lys Lys (CH )
(CH2)4 2 4
N C
N C Desmosina
N C H O
H O H O

Formación de entrecruzamiento covalente entre cadenas de

elastina a través de cuatro lisinas, (vía formación de desmosina)