PRÁCTICA No.

3: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, MEDIOS

SELECTIVOS Y DIFERENCIALES
Autores y códigos: Fecha:
De los medios de cultivo suministrados por su tutor, registre la información solicitada y prepare el medio de cultivo.

Nombre del medio de cultivo:

PDA__________________________________________________________________________________________________
Forma de preparación: _________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________________________________________
Cálculos:
Composición (g/L):
1 CAJA Extracto de patata 4,0 g
15 ml
Dextrosa 20,0 g
2 CAJAS X ml X=30 ml Agar - Agar 15,0 g
(formula por litro)

39 gramos 1000 ml pH final: 5,5 ± 0,2

X= 1,17
gramos
X 30 ml

Nombre del medio de cultivo: CITRATO DE

SIMMONS__________________________________________________________________________________
Forma de preparación: __________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________________________________________
Cálculos:
Composición (g/L):
Fosfato de amonio dihidrogenado 1,0 g
1 TUBO 5 ml
X= 15 ml Fosfato dipotasico 1,0 g
3 TUBOS X Cloruro sodico 5,0 g
Citrato sodico 2,0 g
Sulfato magnesico 0,2 g
22 gramos 1000 ml X= 0,33 gramos Agar 15,0 g
Azul de bromotimol 0,08 g
X gramos 15 ml
Formula aproximada por litro de agua
pH final: 6,9 ± 0,2 a 25ºC
Nombre del medio de cultivo: AGAR NUTRITIVO_____________________________________________________________________________________
Forma de preparación: __________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________________________________________
Cálculos: Composición (g/L):
1 CAJA 15 ml Agar 15,0 g
X= 30 ml Extracto de carne de res 3,0 g
2 CAJAS X ml Peptona de gelatina 5,0 g
pH 6,8 ± 0,2

28 gramos 1000 ml
X= 0,84 gramos
X gramos 30 ml
DISCUSIÓN:
El conocimiento de la nutrición microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el Laboratorio. Un medio de cultivo es una
solución acuosa (bien como tal o, bien incorporada a un coloide en estado de gel), en las que están presentes todas las sustancias
necesarias para el crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). [1]
Mediante la realización de esta práctica se aprendieron varios factores que son importantes para la preparación de un medio de cultivo y la
condiciones necesarias que se deben tener en el momento de la realización del mismo, obteniendo así un muy buen resultado, como se
puede apreciar en la tabla anterior la cantidad adecuada para la realización de un PDA se requieren 30 mL de agua destilada para 2 cajas
de petri y 1,17 gramos del medio en este caso el agar de papa y dextrosa. Siguiendo en el orden de la tabla se aprecia que el citrato de
simmons requiere de 15 mL. de agua y 0,33 gramos del medio y por último el agar nutritivo requiere de 30 mL de agua y 0,84 gramos del
medio, donde cada uno de ellos tiene una composición muy variada y permite el crecimiento de microorganismos específicos.
CONSULTA:

Microorganismo
Medio de cultivo Composición (g/L)
(s) objeto
Tiosulfato Sódico 40.70
Peptona de Carne 4.50
Carbonato Cálcico 25.00
Extracto Levadura 1.80
Caldo Tetrationato[2] Salmonella Bilis de Buey 4.75
Extracto Carne 0.90
Cloruro Sódico 4.50
Final pH 7.6 ± 0.2 a 25ºC
Peptona bacteriológica 10.00
Fosfato Disodico 4.00
Indicador bismuto sulfito 8.00
Sulfato Ferroso 0.30
Agar Bismuto Sulfito Salmonella Extracto de Carne 5.00
[3] typhi
Verde Brillante 0.025
Dextrosa 5.00
Agar Bacteriológico 20.00
Final pH 7.5 ± 0.2 a 25ºC
Bacto Tryptone 10,0 g
Bacto Beef Extract 5,0
Bacto Yeast Extract 1,0
Cloruro de litio 5,0
Agar Baird Parker [4] Staphylococcus Glicina 12,0
aureus Piruvato sódico 10,0
Telurito potásico 0,1
Agar 20,0, Emulsión de yema
de huevo 50,0 mL
Triptosa 5.0 g, Cloruro de
sodio 5,0 g, Sorbitol 1.0 g,
Triptofano 1.0 g, Fosfato di
hidrógeno di potasio 2.7 g,
Caldo LMX- Coliformes
fosfato di-hidrogeno potasio
Fluorocult.[5] totales y E.coli
2.0 g, Lauril sulfato de sodio
sal 0.1g, 5 Bromo 4 Cloro 3
indolyl Beta D-
galactopiranosida
Digerido enzimático de
Bacterias gelatina 5 g
Extracto de carne de res 3g
Agar Nutritivo.[6] Agar 15 g
pH final: 6.8 ± 0.2 a 25°C
Forma de preparación Interpretación del medio
Disolver 82g del medio en un
litro de agua destilada. Mezclar
bien. Calentar y enfriar Inhibición parcial de E.Colli
rápidamente. Queda un de coloracion rosada.
sedimento de carbonato Incoloras con producción
cálcico.Añadir asépticamente de SH2
20 ml de solución de yodo y
yoduro potásico, 10 ml de
solución al 0.1% de verde
brillante
Suspender 52,3 g del medio
en un litro de agua
destilada.Mezclar y calentar, Las colonias de S. typhi
agitando continuamente. son negras rodeadas por
una zona negra o
Hervir durante un minuto o
hasta que el medio se pardusca, con brillo
disuelva por completo. Dejar metálico
que el medio se enfríe a 45ºC
Suspender 60 g del medio en un
Crecimiento de bueno a
litro de agua purificada. Calentar
excelente; colonias
con agitación frecuente y hervir
brillantes, de tamaño
para disolver completamente el
mediano y color de gris
medio.Luego de enfriar a 45 –
oscuro a negro; halos
50°C, añada 50 mL del
transparentes alrededor de
suplemento de yema de huevo-
las colonias
telurito.
En caldo, suspender 17g en 1
litro de agua purificada, Fluorescencia azul bajo la
calentar a ebullición hasta luz UV, indica la presencia
que se disuelva de E.coli
completamente; en agua, se cambio de color de
suspenden 34 g en 1 litro de amarillo a azul verdoso
agua purificada,calentar a indica la presencia de
ebullición hasta que se coliformes
disuelva completamente
Suspender 23 g del medio en
un litro de agua purificada.
Calentar con agitación
frecuente y hervir durante un Colonias grandes ligeramente
minuto para disolver amarillas, brillantes y lisas
completamente el medio.
Autoclave a 121°C durante
15 minutos.
 Microorganismo
Medio de cultivo Composición (g/L) Forma de preparación Interpretación del medio
(s) objeto
Amplia variedad Infusión de cerebro y corazón 37g/L de agua purificada,
de de (sólidos) 8,0 g Digerido reposar 5 min, calentar, Colonias aisladas en áreas
microorganismos péptico de tejido animal 5,0, agitar y hervir para extendidas y crecimiento
Caldo BHI (Infusión incluidos Digerido pancreático de disolver, distribuir en tubos confluente en áreas de
Cerebro Corazón).[7] bacterias, caseína 16,0 Cloruro sódico de ensayo y esterilizar en inoculación densa
levaduras y 5,0. Glucosa 2,0. Fosfato autoclave a 121° C por 15
hongos disódico de hidrógeno 2,5 min.
filamentosos. Agar 13,5
Digerido pancreático de caseína 58,6 g7L de agua destilada, Diferenciación de colonias
10,0 g Disuelva, caliente hasta presuntivas de Salmonella
Enterobacteria Digerido péptico de tejido ebullición, reparta en tubos y de otras
ceae, animal 10,0 esterilice en autoclave por 15 Enterobacteriaceae;
Salmonella Cloruro sódico 5,0 minutos a 121ºC, dejar enfriar Salmonella producen
Agar TSI (Agar
Lactosa 10,0 en posición inclinada. colonias rosas con un
Hierro Tres
Sacarosa 10,0 centro negro en este
Azúcares).[8]
Glucosa 1,0 medio, mientras que las
Sulfato ferroso de amonio 0,2 colonias de otros
Tiosulfato sódico 0,2 organismos son de color
Rojo fenol 0,025 rojo o amarillo y no
Agar 13,0 muestran centros negros.
Peptona de caseína 5, Suspender 34,5 gr del polvo Prueba Positiva: Pico
Extracto de levadura 3, en 1 litro de agua destilada. violeta/fondo violeta.Prueba
Salmonella Glucosa 1, Citrato de Dejar 5 a 10 minutos a Negativa: Pico violeta/fondo
Agar LIA (Agar Lisina spp. hierro y amonio 0,50, L- temperatura ambiente. Llevar amarillo. Desaminación de
Hierro).[9] lisina 10, Tiosulfato de a ebullición agitando de vez la lisina. Pico rojizo / fondo
sodio 0,04, Purpurina de en cuando. Esterilizar 15 amarillo. Prueba positiva de
bromocresol 0,02, Agar 15 minutos a 121ºC. Dejar enfriar producción de H2S:
pH: 7,1 ± 0,2 a 25ºC en posición inclinada Ennegrecimiento del medio
Infusión de Papa (Potato Suspender 39 g del medio de
Infusion) a partir de 200 g Las levaduras crecerán
cultivo en un litro de agua
Cultivo de Dextrosa (Dextrose) 20 g como colonias desde un
purificada.Calentar agitando
hongos. Agar 15 g.(*4,0 g de extracto color crema a un color
Agar Papa Dextrosa frecuentemente y permitir que
de papa es equivalente a blanco. Los mohos
(PDA).[10] hierva por un minuto para
200 g de infusión de papas) crecerán como colonias
disolver completamente el
pH Final: 5,6 ± 0,2 a 25°C filamentosas de variados
medio.Autoclave a 121°C
colores.
durante 15 minutos.
Digerido pancreático de Rehidratar 36 g del medio en Crecimiento de bueno a
Aislamiento y
gelatina 10,0 un litro de agua destilada. excelente; colonias de color
la
Lactosa 5,0 Calentar agitando negro, azulado con brillo
Agar EMB (Eosina - diferenciación
Sacarosa 5,0 frecuentemente hasta el punto verde metálico. Sin inocular:
Azul de Metileno - de bacilos
Fosfato dipotásico 2,0 de ebullición durante 1 Púrpura con un tinte verdoso
Lactosa)[11] gram
Agar 13,5 minuto. Enfriar anaranjado, ligeramente
negativos
Eosina Y 0,4 aproximadamente a 45ºC. opalescente
entéricos
Azul de metileno 0,065
BIBLIOGRAFÍA

- [1] Rojas Triviño A. (2011). Conceptos y Prácticas de Microbiología General . Manual de laboratorio , 0.0, 33.

- [2]Anonimo (2010). Base de caldo tetrationado segun Mueller - Kauffmann, tomado el 01/09/2018 de
https://www.condalab.com/uploads/media/1130_BASE_DE_CALDO_TETRATIONATO_SG_MUELLER-
KAUFMAN_REv_0_Mayo_2010.pdf

- [3]Anonimo (2010). Agar Bismuto Sulfito, tomado el 02/09/2018 de

https://www.condalab.com/uploads/media/1011__AGAR_BISMUTO_SULFITO_REv_0_Abril_2010_01.pdf
- [4]Anonimo (2006). BD Baird-Parker Agar, tomado el 01/09/2018 de
https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-255084.pdf

- [5]Montoya, O. & Pineda, B. (2000). Manual de Procedimientos Microbiológicos para el Análisis de Muestras de Alimentos.
tomado el 01/09/2018 de http://bdigital.unal.edu.co/12228/2/olgainesmontoyacampuzano.2014_Parte2.pdf

- [6] Anonimo (s.f). Agar nutritivo, tomado el 01/09/2018 de https://foodsafety.neogen.com/sp/nutrient-agar

- [7] Anonimo (2013). BD Brain Heart Infusion (BHI) Agar, tomado el 01709/2018: https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8800

- [8]Anonimo (2003). BD Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar), tomado el 01/09/2018 de
https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-254458.pdf

- [9] Anonimo (s.f). Lisina Hierro Agar, tomado el 01/09/2019 de http://www.brizuela-lab.com.ar/manuales/Lisina%20hierro.pdf

- [10]Anonimo (2015). agar papa dextrosa - potato dextrose agar (7149), tomado el 01/09/2018 de
https://foodsafety.neogen.com/pdf/acumedia_pi/7149_sp_pi.pdf

- [11]Anonimo (2013). BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified. tomado el 02/0972018 de
https://www.bd.com/resource.aspx?idx=8765