AISLAMIENTO Y CULTIVO DE BRUCELLA SSP

Los medios para el cultivo de Brucella contienen: peptonas, triptonas, a

las que se le adiciona extracto de levaduras, suero o sangre y se desarrolla
al cabo de 4-5 días / crecimiento tardío de 6 semanas

Tipo de muestras: sangre, medula ósea / (+) 70 a 90%/ LCR

Medios de cultivo: (hemocultivo, mielocultivo)
 Agar Brucella
 TSA (Agar tripcasa-soja)
 Maximiliano Ruiz Castañeda / subcultivo en agar chocolate y sangre.
 Incubación de 35-37°C en posición vertical / 48 horas si no se
observa crecimiento se inclina/ Se incuba / se observa cada 4-5 días
hasta el día 30/ realizando cultivos ciegos
Isolator / sistema de lisis-centrifugación en el mismo tubo. Se que es
lisada por acción de detergentes / centrifuga hasta concentrar / el
sedimento se siembra en medio sólido.
NO HEMOLISIS
 AISLAMIENTO Y CULTIVO DE BRUCELLA SSP
 TSA
Las cepas lisas (S) producen colonias circulares,
convexas con bordes regulares, translúcidas y coloración
ámbar. A la luz reflejada son brillantes, ligeramente
opalescentes y de color gris azulado.

Las cepas rugosas (R), el TSA, producen colonias

semejantes en la forma pero varían considerablemente
en tamaño, color, consistencia y textura.

Se procede a aglutinar a
las colonias sospechosas
con suero polivalente
anti-Brucella para
identificación de las fases.
 IDENTIFICACIÓN DE
ESPECIES BRUCELLA
 Requerimiento de CO2 para su desarrollo
 Producción de H2S y ureasa
 Catalasa y oxidasa
 Desarrollo en presencia de tionina y fucsina básica
 Aglutinación en antisuero
“posible especie de Brucella”

 Aislamiento de cocobacilo diminuto de tinción débil y

desarrollo lento en cultivos de sangre, chocolate o
médula ósea.
 No se desarrolla en los medios de McConkey, EMB o
medios entéricos.
 IDENTIFICACIÓN DE LA ESPECIE Y EL BIOVAR POR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS ESPECIALES:
 Medio de Kligler
Ausencia de ácido y gas a partir de glucosa y lactosa.

 Medio de urea de Christensen (Ureasa)

Se basa en el tiempo en que vira el medio a rojo-fucsia, debido a la producción de
ureasa. Brucella suis produce la mayor cantidad de ureasa y un tiempo muy corto
comparada con las demás especies que producen menor cantidad.

 Tubo inclinado con agar soya tripticasa

Con una tira de papel filtro impregnado con acetato de plomo sujetado por la
contratapa o el tapón de algodón para observar la aparición de H2S por el VARIABLE
ennegrecimiento de la tira de papel filtro

 Citrato de Simmons
No emplea este substrato como fuente de carbono, por lo que no lo alcaliniza el
azul de bromotimol y no modifica el color verde.
 IDENTIFICACIÓN DE LA ESPECIE Y EL BIOVAR POR
PRUEBAS BIOQUÍMICAS ESPECIALES:
 Medio de SIM
Observar la inmovilidad de las brucellas y la ausencia de indol y H2S en este medio.

 Crecimiento en presencia de colorantes

Se siembra en dos colorantes: tionina y fucsina básica como se muestran en la imagen

INHIBICIÓN POR FUCSINA INHIBICIÓN POR TIONINA

 PRUEBAS ESPÉCIALES DE IDENTIFICACIÓN
 Susceptibilidad a bacteriófagos
Sobre una capa de Brucella sembrada en forma
masiva, se coloca una gota pequeña de cada uno de
los bacteriófagos Tbilisi (Tb), Weybridge (Wy) y
Berkeley (Bk), se observa la existencia de lisis en los
sitios en donde se colocaron las gotas.
Cultivo de brucella
siembra masiva
Placas líticas por
brucellafagos
 Aglutinaciones:
 Rosa de Bengala, detecta Acs para el
LPS/ Brucellas suspendidas en tampón
lactato con rosa de bengala.
 2-Mercaptoetanol, se usa solución
salina al 0,85% con 0,1M de 2-
mercaptoetanol, cuantifica la IgG.
 Elisa, mide IgG, IgM e IgA
 PCR, determina la especie infectante
 biovares 1,2 y 4 de B. abortus
 Tres biovares de B.melitensis
 Biovar 1 de B. suis
 Todas las biovariedades de B. ovis
TABLA DE PRUEBAS PARA BRUCELLA SSP