• Fungicidas nueva generación para control de

enfermedades en frutales •

Selección preliminar y evaluación de fungicidas

y compuestos naturales para control de
antracnosis del olivo causada por
Colletotrichum spp.

Equipo 7
•Martínez Méndez Yadira
 Introducción
 La antracnosis del olivo (Olea europaea subsp. Europaea L.)
es la enfermedad frutal más importante de este cultivo a
nivel mundial.

 En España la antracnosis del

 olivo causa más de

 $100 millones en pérdidas

 Económicas.
 Introducción

La antracnosis del olivo es causada por al menos 13 especies

de Colletotrichum, entre ellas C. acutatum, C. gloeosporioides,
C. godetiae
 Introducción
El patógeno infecta principalmente las frutas en la etapa de madurez,
causando la pudrición.

La estrategia de control más útil es la aplicación de fungicidas protectores

no solubles en grasa al comienzo de la caída, como fungicidas a base de
cobre
 Objetivo

Evaluar las alternativas a los

fungicidas a base de cobre y los
diferentes compuestos de cobre (o
mezclas) que requieren una menor
cantidad de cobre metálico para
controlar la antracnosis de manera
efectiva.
 Objetivos específicos
Objetivos específicos

1. Evaluar la eficacia in vitro de varios compuestos contra aislados

de dos especies de Colletotrichum spp

2. Determinar la eficacia del fungicida y el extracto de plantas

contra C. godetiae utilizando frutos de oliva separados,

3. Evaluar el efecto de los fungicidas a base de cobre en la

gravedad de la enfermedad utilizando plantas de olivo en maceta
 Desarrollo
Aislamientos utilizados:

Colletotrichum nymphaeae: Colletotrichum godetiae:

Col-116 Col-09, Col-30, Col-68 y Col-104
 Desarrollo

Almacenar
a 5° C Los aislamientos (Col-09, Col-30, Col-68 y Col-
(oscuridad 104), fueron altamente virulentos (valor de
) escala de calificación = 5, Fruto
completamente podrido) mostrando su alta
Tubos, 50 patogenicidad.
ml. PDA y
ac. de
parafina
estéril.

Incubar 7
dias.
 Desarrollo

Compuestos
antifúngicos

 45 compuestos
comerciales
 Sales inorgánicas

 Sustancias naturales
 Productos orgánicos
 Extractos de plantas

 Compuestos
experimentales
Tabla 1. Compuestos evaluados
Tabla 1. Compuestos evaluados
 Desarrollo
Extractos de plantas

 Hojas de olivo 'Lechín de Sevilla' - susceptible,

 ´´ de olivo 'Picual' - resistente

 ´´ de olivo 'Frantoio' - altamente resistente

 Hojas de Inula viscosa L.

 Cáscara de limón.
 Extractos de plantas
Secar
hojas (7 Cascara de
dias) a 20 limón a 65°C
– 25° C.

Material
seco se
trituró
Polvo fino
a 5 °C
hasta la
extracción
Extracción Rotavapor R-210 de Büchi
: 50 g
polvo y 50
ml
acetona.
Aceite se
concentró
por
evaporaci Se filtra y
ón. se
mantiene 5°C
Método de destilación utilizando un en
equipo Soxhlet. recipiente
oscuro
 Evaluación in vitro

 Cuatro experimentos para evaluar el efecto de 16 fungicidas y 4

sales inorgánicas sobre la inhibición del crecimiento micelial y la
germinación conidial de aislados de Colletotrichum spp.
Ensayo de crecimiento micelial

Calcular tasa
Agregar de
Medir el
fungicida a crecimiento
diámetro
PDA (45 °C) mm/día

Tomar el 3
Incubar las
tapón de repeticiones
placas 14
micelio por cada
días
(8mm) tratamiento

Colocar en
Agregar
nueva caja
compuesto a
Petri con
evaluar
PDA
 Experimento 1

Compuestos de
Protectores Sistémicos
cobre

* Kocide® 2000 * Captazel

* Benomilo 50
* Curenox® 50 * Belpron M 50
* Score 25
* Cobre Sandoz * Belpron 80
* Nustar 40
* Caldo Bordelés * Belpron F50

Aislamientos de C. godetiae Col-09 y Col-30.

Dosis entre 0 (control) y 500 μgml −1
 Resultados
 Evaluación in vitro

 Experimento 1. Ensayo de crecimiento micelial

Colletotrichu
80% m godetiae

50%

Poca
inhibición
 Experimento 2
• Merk Lab C. godetiae y C. nymphaeae
Col-104 y Col-116
• Stroby
Fungicidas
• Folicur 25
• Flint

C. Godetiae
Col - 104

• Carbonato de Ca
Compuestos de Ca
• Cloruro de Ca
• Propionato de Ca
• Silicato de Ca

Dosis:
Ca: 0 a 1200 μg ml − 1
Fung: 0 a 1000 μg ml − 1
- Folicur® 25 de 0 a 0.5 μg ml −1
 Resultados
Experimento 2.

Col -104
Col -116

Inhibición total

Cloruro de Ca y el Silicato
de Ca promovieron el
crecimiento del micelio.
Ensayo de germinación conidial

5 μl de suspensión
Incubar 24 hrs. en
conidial + 5 μl de
cajas Petri con AA
fungicida en
(Cámara húmeda)
cubreobjetos

Retirar cubres y
teñir con ácido % Germinación =
fucsina en 50 conidios al azar
lactofenol

Tres repeticiones/
combinación
 Experimento 3

 11 fungicidas comerciales

 Todos se evaluaron en C. godetiae, aislamiento Col-

09.
 4 de cobre y ftalimidas también en C. godetiae,
Col-30.

Dosis:
De 0 a 500 μg ml −1
 Resultados
Experimento 3. Germinación de conidios
 Experimento 4

Efecto del sulfato de cobre y kresoxim-metil sobre la germinación

de conidios de C. godetiae Col-104 y C. nymphaeae Col-116 para
identificar la sensibilidad a ambos fungicidas.

Ingrediente Germinación de
Nombre común
activo conidios/Dosis

- Sulfato de cobre 0.5; 2; 8; 32 μg ml

−1

Stroby Kresoxim-metil 0.1; 1; 10; 100 μg

ml −1
 Resultados

Experimento 4. Sulfato de cobre vs Stroby® (kresoxim-

metil).

 Colletotrichum Godetiae (Col-104) mas susceptible a Stroby

(esporas).

 Col-116 y Col-104 sensibilidades similares al Sulfato de cobre

-Germinación de conidias (1.52 μgml− 1 vs. 7.70 μg ml− 1)

-Formación del apresorio (1.41 μgml − 1 vs. 2.53 μg ml − 1 ).
 Evaluación en fruta
Experimento 5. Frutos maduros (negros)
A las 12 C.
Lavar y Enjuaga Sumergi
hrs. godetia
esteriliz r (agua r en la
rociar e Col-9
ar estéril) solución
los y Col-
(Cl) y secar y secar conidios 30

Nombre común Ingrediente activo Dosis - μg ml −1

Curenox® 50 Oxicloruro de cobre 1000

Nordox® Super 75 Óxido cuproso 1000
Merk Sulfato de cobre 1000
AA1 Oxicloruro de 180 / 100 / 100
cobre/Maneb/Zineb
AA2 Hidroxido de 100 / 100
cobre/Folpet
AA3 Oxicloruro de cobre 1000
AA4 Folpet 100
 Experimento 5.

 Las frutas se incubaron en cámaras de humedad

(recipientes de plástico) durante un mes.

 Diseño completamente al azar con dos repeticiones por

tratamiento y 20 frutas en cada cámara.
 Resultados

Evaluación en fruta

Solo AA2 (hidróxido de cobre / Folpet) mostró una reducción

significativa (P <0.05) en la gravedad de los síntomas con
respecto al control no tratado.
 Experimento 6
Nombre Ingrediente
Dosis - μg ml −1
común activo
oxicloruro de
Cuprosan® PRO 800/600
cobre / propineb
Fungicidas
comerciales Folicur® 25 Tebuconazol 600
Flint® Trifloxistrobina 100
Antracol® Propineb 900
Ivy leaves Hedera helix 50000
Ginkgo biloba Ginkgo biloba 50000
Elder flower Sambucus nigra 50000
Extractos de Juglans nigra Walnut leave 50000
plantas
Belladona
Atropa belladona 50000
leaves Se inocularon
Salvia extract Salvia officinalis 50000 con una
suspensión
Anhydrous citric
C6H8O7 50000 conidial de C.
Ácido cítrico acid
Godetiae
Propolis EC Propóleo 30000 aislado col-104
Propóleo
 Resultados
Experimento VI. Frutos de color púrpura rojizo

Reducción en la severidad
de los síntomas con
respecto a las frutas de
olivo no tratadas.
 Experimento 7

 Once fungicidas (cinco a base de cobre, tres sistémicos y tres

orgánicos) y cinco extractos de plantas, utilizando frutas de
color verde-amarillento.

Tratamientos, la inoculación y la
incubación igual que en el experimento
anterior.
Se utilizó un diseño completamente al azar
con dos repeticiones (cámaras húmedas)
por tratamiento y 16 frutos por cámara.
 Experimento 7

 Escala de calificación de 0 a 6 (semanal)

0 = no hay síntomas visibles,

1 = síntomas visibles que afectan a menos del 25% de la superficie de la
fruta,
2 = síntomas visibles que afectan al 25–50% de la superficie,
3 = síntomas visibles que afectan al 50–75% de la superficie,
4 = síntomas visibles que afectan al 75–100% de la superficie, y
5 = fruta completamente podrida.
 Resultados

Experimento 7. Frutas de color verde-amarillento

Redujeron 40
veces
la severidad
 Evaluación en plantas

Plantas de 3 Lavar, secar y

años Inocular con C.
rociar con godetiae Col-
Amarillo- Curenox® 50 a 68
verdoso 2000 μgml− 1

Colocar a 25 –
Al azar, 4
Testigo sólo 30 °C en
plantas, 2
agua destilada invernadero al
repeticiones
azar

La gravedad de los síntomas se evaluó periódicamente como

se describió para los experimentos de inoculación de frutas
 Resultados
Presencia de síntomas:

La muerte de las ramas se

detectó por primera vez en las
plantas no tratadas, pero
también 3 semanas más tarde
en las plantas tratadas con
oxicloruro de cobre.
 Conclusión

 Benomil, Difenoconazol y Flusilazol, mayor eficacia para

inhibir el crecimiento del micelio.

 Captan, Folpet y algunos compuestos de cobre, mas

eficientes para inhibir la germinación de conidias.

 La formulación de Hidróxido de cobre / Folpet (AA2) mostró

alta eficacia.
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