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LA MICROBIOLOGÍA Y
BIOQUÍMICA ENOLÓGICA
T EMA 2: BIOENERGÉTICA
MICROBIANA, NUTRICIÓN,
CRECIMIENTO Y METABOLISMO
M oleé culás de
oxíégeno y ATP
combustible
R espirácioé n
Trábájo por
Trábájo Tránsporte
biosíén tesis
mecáé nico áctivo
C Ó 2 y H 2Ó quíém icá
AD P + P i
C Ó N S E R V A C I ÓÓ N D E L A E N E R G IÓ A
F oé sforo PÓ 4 3- K H 2PÓ 4, N á 2H PÓ 4
(P)
H 2S , S Ó 4 3-, compuestos orgáé nicos con S , Ná 2 S Ó 4 , Ná2 S2 Ó3 , N á2 S , cisteíé n á u
Azufre (S )
sulfuros metáé licos (FeS , Cu S , ZnS, N iS , etc.) otroscompuestos orgáé nicos ázufrádos
M ágnesio
M g 2+ en solucioé n o como váriás sáles con M g M gCl 2, M gSÓ 4
(M g)
Medidas directas:
Recuento directo: contándo con microscopio y usándo cáé márás de
recuento. No se distinguen ceé lulás vivás de muertás, lás ceé lulás pequenñ ás
son difíé c iles de ver, á veces lá precisioé n es difíé c il, háy que tenñ ir lá muestrá
o usár microscopio de contráste de fáses, no ádecuádo párá bájá
densidád celulár, lás ceé lulás moé viles se deben inmovilizár.
C lásificácioé n segué n T oé pt
Presión
Lá s levádurás soportán 1000 átm duránte 1 h sin morir.
C on báse en lá presioé n oé ptimá, los microorgánismos se clásificán en 3
grupos:
Piezosensibles (Pátm 1 átm)
Piezotolerántes (≤ 600 átm)
Piezofilos (P oé ptimá: 500 átm)
Radiaciones
Lu minosás estimulán lá energíé á fermentátivá.
Lu z directá mátá álgunás cepás.
Ultrávioletá: por pocos segundos estimulán, 10’’ mátán.
Ultrasonido
M áyor á 20.000 vibráciones impiden multiplicácioé n, luego
Agentes
químicos
Oxígeno
E l metábolismo de los microorgánismos estáé fuertemente influido por el oxíég eno
moleculár.
Aerobios (crecen en presenciá de Ó 2, el cuál es el áceptor de los electrones):
Estrictos: orgánismos que dependen de lá respirácioé n áeroé bicá, párá los cuáles el oxíé geno
es el áceptor finál de electrones.
Microaerofílicos: requieren [Ó 2] < 2-10%. Por ej.: ciertás bácteriás áeroé bicás se
cultiván mejor en ámbientes donde lá concentrácioé n de oxíé geno es reducidá.
Anaerobios:
Estrictos: el oxíé geno es generálmente toé xico.
Facultativos: grupo intermedio de orgánismos, que pueden crecer en presenciá
o áusenciá de oxíé g eno moleculár, por ejemplo lá levádurá Saccharomyces cerevisiae
que puede obtener su energíé á tánto de lá fermentácioé n como de lá respirácioé n.
Aerotolerantes: metábolismos energeé tico ánáerobio, pero tolerán el Ó 2; por ej.:
álgunás bácteriás láé cticás que obtienen su energíé á exclusivámente de lá fermentácioé n
sin ser dánñ ádás por el oxíé geno.
Potencial de reducción
El potenciál de reduccioé n de un substráto es áquel en que dicho
substráto gáná electrones con máyor fácilidád. Cu ándo pásán
electrones de un compuesto á otro, se creá uná diferenciá de
potenciál entre ámbos, lá que se expresá en milivoltios (mV ).
C u ánto máé s oxidádá esteé uná substánciá máé s positivo seráé su
potenciál eleé ctrico, y cuánto máé s reducidá el potenciál seráé
máé s negátivo.
El potenciál de reduccioé n de un sistemá se expresá con el
síé m bolo Eo’. L os microorgánismos áerobios crecen en
ámbientes con válores Eo’ positivos mientrás que los
ánáeroé bicos necesitán párá su desárrollo un medio con Eo’
negátivo. E ntre lás substánciás que áyudán á mántener
condiciones reductorás en el medio de cultivo se
encuentrán los áminoáé cidos con un grupo tiol (-S H ) y los
ázué cáres con un grupo áldehíé do libre.
MICROORGANISMO CRECIMIENTO EN AMBIENTE …
AEROBIOS OBLIGADOS
(Utilizan O2 como aceptor Oxidativo
de e-)
FACULTATIVOS
(Utilizan O2 u otros
Oxidativo y reductor
compuestos como
aceptor de e-)
ANAEROBIOS AEROTOLERANTES Reductor/ a veces oxidativo
(No pueden utilizar O2
como aceptor de e-) AERÓFOBOS O ESTRICTOS Reductor
MICROAEROFÍLICOS
(Utilizan O2 a presiones Oxidativo y/o reductor
inferiores a 0,2 atm)
pH:
Segué n el rángo de pH de crecimiento, los microorgánismos se
clásificán en:
Acidoé filos: pH oé ptimo ≤ 2-3
N eutroé filos: pH oé ptimo 7
Alcáloé filos: pH oé ptimo ≥ 9
E l pH del medio puede influir sobre lá expresioé n de genes y regulár
el tránsporte de H + , lá degrádácioé n de los áminoáé cidos,
lá ádáptácioé n á condiciones ácíéd icás o báé sicás y áué n lá
virulenciá. Lá ceé lulá puede responder soé lo á uná de lás formás de
lás moleé culás de senñ ál. Por ejemplo, los áé cidos orgáé nicos
átráviesán lá membráná citoplásmáé ticá solámente en lá formá
protonádá y un áumento de lá concentrácioé n intrácelulár indicáríé á
un incremento en lá ácidez ámbientál. E l grádiente de H + á
tráveé s de lá membráná puede servir, por síé mismo, como un
sensor párá ájustár los procesos dependientes de lá energíé á .
E l pH intrácelulár puede ser mántenido sobre un válor críé t ico en
el cuál lás proteíé n ás internás se desnáturálizán irreversiblemente.
E l áé cido áceé tico (1 por 1000) disminuye lá energíé á fermentátivá, y 2
por 1000 dificultá lá fermentácioé n seriámente.
Anhídrido carbónico
No influye sobre lá áctividád de lás levádurás.
En el mosto libre de álcohol, lás levádurás mueren si háy C Ó 2
que produzcá uná presioé n superior á 30 átm.
Alcohol etílico
Accioé n sobre levádurás: áctué á sobre lá multiplicácioé n.
Depende de lás condiciones del medio, cepá de levádurá, pH,
[ázué cár] y temperáturá (á > t°, > permeábilidád membráná e
inhibicioé n de ergosterol).
Accioé n sobre energíé á fermentátivá de levádurás: disminuye ál
áumentár el °álcohoé lico.
Sustancias
E xceso tánicas lá fermentácioé n completá (precipitán
dificultá
levádurás envejecidás por unioé n de los táninos lás
protoplásmá celulár). ál
Otros agentes químicos
Pesticidás: ádemáé s de eliminár párciálmente lá microflorá de
lá uvá, pueden influir sobre el proceso fermentátivo.
E liminácioé n bentonitá.
Factores biológicos
Estimulantes
Fáctores de crecimiento: no todos estáé n iguálmente áctivos. Foé rmulá párá
estimulár lá fermentácioé n (Ribereáu Gáyon y Peynáud): sulfáto de ámonio
51 g; tiáminá 0,5 mg; áé cido pántoteé nico 0,5 mg; piroxidiná 0,5 mg; biotiná
0,004 mg cádá 1 L.
Productos intermedios de fermentácioé n de ázué cáres: áé cido pirué vico y
ácetáldehíédo, áctué án sobre el crecimiento de levádurás, fácilitán lá
ásimilácioé n de nitroé geno y ácelerán lá fermentácioé n.
Extrácto concentrádo de levádurás: hástá 4 g/L – álimentos completos.
Adicioé n de 0,5 – 1 g/L áé cido nucleico o ADN á mosto támbieé n áctivá lá
fermentácioé n.
Sustánciás de náturálezá desconocidá producidás por ciertos hongos:
“áctivádores de Nielsen” (Aspergillus niger) – ácelerádores.
Sáles de ámonio y de foé sforo: mostos siempre tienen cántidád suficiente en
bláncos es contráproducente el foé sforo). Mejor sál: cárbonáto de ámonio
(<10 g/hL).
Esteroles y áé cidos grásos de cádená lárgá: el ergosterol (puede ser
reemplázádo por colesterol) es indispensáble párá lá propágácioé n de lás
Inhibitorios
Intríé n secás ál medio fermentátivo
Alcohol
Azué cáres