Chary Esteban Quinche González

INTRODUCCION
Tobamovirus
Virus del mosaico del
tabaco (TMV)
Virus del mosaico del
tomate (ToMV)

Infección Infección
Nicotiana sylvestris
N. tabacum cv. sistémica localizada
White Burley

PCR MULTIPLEX
Diferenciar virus
estrechamente
relacionados
Reacción cruzada entre los
antisueros de ToMV y TMV
Jacobi et al, 1998 3’UTR, PROTEINA DE MOVIMIENTO Y GEN DE LA
• Proteínas de 126 y 183 kDa para la
GEN REPLICASA
replicación del virus
ToMV PROTEINA DE CUBIERTA -> ToMV
• Proteína de movimiento de 30kDa
TMV GEN DE LA PROTEINA DE CUBIERTA -> TMV • Proteína de cubierta
 OBJETIVO

• Desarrollar un protocolo altamente sensible y rápido para la detección y diferenciación

simultáneas del virus del mosaico del tabaco (TMV) y del virus del mosaico del tomate
(ToMV) en pimiento y tomate. En este estudio, utilizaron la técnica de PCR multiplex para
detectar la infección dual de estos dos virus.
 MATERIALES Y METODOS
AISLAMIENTO Y FUENTE DEL VIRUS PCR PRIMERS
PRIMERS
Isolate DAB TMV-1 - TMV
F: 5’-CGACATCAGCCGATGCAGC-3’ (630-648)
Isolate DAB ToMV-1 R: 5’-ACCGTTTTCGAACCGAGACT-3’ (1491-1510)

- ToMV
F: 5’-CGAGAGGGGCAACAAACAT-3’ (527-546)
R: 5’-ACCTGTCTCCATCTCTTTGG-3’ (825-843)

Extraccion de savia en PRODUCTO FINAL : 318 pb

100 mmol/l de BUFFER
fosfato (1:50 w/v)

PCR MULTIPLEX A PARTIR DE SEMILLAS SENSIBILIDAD RT-PCR

Primers específicos: TMV y ToMV
EXTRACCION DE RNA
Kit Rneasy Plant Mini (Qiagen) RNA EXTRAIDO
10 – 10x-6
DETECCION MULTIPLE RT - PCR: single VIRUS
cDNA -> SEMILLAS
INDIVIDUALES

100 mg RT - PCR: Multiplex

50 µl RNA TOTAL
 RESULTADOS
SINTOMAS DE PLANTAS INFECTADAS DETECCION DE TMV y ToMV A PARTIR
DE MUESTRAS DE HOJAS INFECTADAS
Y SEMILLAS ToMV: 318 pb TMV: 880 pb

Mosaico foliar
Rizado foliar
Crecimiento atrofiado

N. tabacum cv. Samsun

Mosaico sistémico
 RESULTADOS
SENSIBILIDAD DE LA PRUEBA

TMV ToMV TMV y ToMV

 CONCLUSION
• El ensayo de PCR multiplex fue una técnica de diagnóstico rápido y rentable, que ayudó a diferenciar
con precisión el TMV y el ToMV.

• Importancia e impacto del estudio: El análisis multiplex de PCR descrito en este estudio es una
herramienta valiosa para la patología de las plantas y los estudios de investigación básica.

• Este método puede facilitar un mejor reconocimiento y distinción de TMV y ToMV tanto en pimiento como
en tomate.