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Las tinciones diferenciales se

utilizan ampliamente en
microbiología; consisten en la
aplicación de dos colorantes que
contrastan en su intensidad o color
y un paso intermedio

El colorante utilizado pone de


manifiesto diferencias entre células
bacterianas o entre partes de una
misma célula, estas técnicas
utilizan más de un colorante o bien Los colorantes más usados son: azul
ciertos reactivos complementarios de metileno, cristal violeta,
para la tinción safranina, estos son catiónicos y se
combinan fuertemente con
componentes celulares cargados
negativamente, como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos
TECNICA DE GRAM
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo
de tinción diferencial empleado en bacteriología para la
visualización de bacterias, sobre todo en muestras
clínicas

Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian


Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884

Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como


para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color
morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella.

Esta tinción pone de manifiesto la afinidad tintorial de la


pared, la cual depende de su composición para que el
microorganismo sea considerado gram+ o gram-.
Técnica
1. Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio.
2. Hacer el extendido con un palillo de madera
3. Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero
4. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres
veces aproximadamente).
5. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un
minuto.
6. Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
7. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
8. Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la
concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se
decoloran, las gram + no)
9. Lavar de nuevo con agua destilada para retirar los restos de alcohol/acetona
10. Teñir la preparación con safranina durante 1 minuto.
Procedimiento Gram + Gram - Observación

Paso 1. Colorante fundamental: cristal Las bacterias gram positivas y gran


violeta durante 1 minuto. negativas se tiñen de violeta.

Las bacterias gram positivas y gran


negativas se tiñen de violeta.
Paso 2. Mordiente, solución de yodo y
ioduro potásico, 1 minuto.

Las bacterias gram positivas


Paso 3. Decoloración, lavado con mantienen el color violeta, las gram
etanol, 30 segundos. negativas pierden el colorante.

Las bacterias gram negativas se tiñende


Paso 4. Colorante de contraste, rojo, las gram positivas mantienen su
safranina 1 minuto. color violeta.
TINCION ALCOHOL ÁCIDO
RESISTENTE (ZIEHL-NEELSEN)

Su finalidad es la de identificar
Es una tinción diferencial mycobacterias (fuertemente
ideada por dos médicos ácido-alcohol resistentes),
alemanes, Franz Ziehl, un nocardias (débilmente AAR),
bacteriólogo, y Friedrich actinomices (débilmente AAR)
Neelsen, un patólogo. o parásitos como
cryptosporidium.

Una vez teñidas tienen la


Las bacterias ácido-alcohol capacidad de resistir la
resistentes no pueden ser decoloración de una
clasificados según la tinción de combinación de alcohol/ácido,
Gram, la técnica más común en el decolorante más común en
la microbiología actual los protocolos de tinción de
bacterias.
TECNICA
RESULTADOS
TINCION DE BACTERIAS
ESPORULADAS
Esta tinción permite poner de
manifiesto la endospora bacteriana,
una forma de resistencia producida
Se conocen como endosporas
por algunos géneros de bacterias
bacterianas porque se originan en
gram positivas. Las endosporas
el interior de los microorganismos.
aseguran la supervivencia de estas
bacterias en condiciones
desfavorables (altas temperaturas

El método más
empleado es el
de Schaeffer Varios géneros son capaces
Fulton donde la de producir estas
suspensión de estructuras: Clostridium,
microorganism Bacillus, Sporosarcina, entre
os se tiñe en otros
caliente con el
colorante verde
malaquita
TECNICA
1. Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequeña porción
de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estéril.
2. Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el
portaobjetos con el asa de siembra.
3. Dejar secar.
4. Fijar la preparación, pasando a través de la llama del mechero el
portaobjetos.
5. Cubrir con unas gotas de verde malaquita y aplicar calor con un
hisopo de lana de vidrio, mantener 5 minutos desde el comienzo de
la emisión de vapores
6. Lavar el exceso de colorante con agua.
7. Cubrir con el colorante de contraste, safranina durante 1 minuto.
8. Lavar el exceso de colorante con agua.
9. Dejar secar al aire.
10. Añadir una gota de aceite de inmersión
RESULTADOS
TINCION CON TINTA CHINA
La tinción negativa de Para esta tinción se pueden
Tiñe el fondo de color
cápsulas es una tinción utilizar dos colorantes
negruzco y permite ver los
estructural, ya que pone de diferentes: nigrosina o tinta
microorganismos sin
manifiesto las cápsulas y no china. En la práctica se
colorear sobre dicho fondo.
tiñe los microorganismos utilizará la primera de ellas.

La nigrosina es un colorante
aniónico de color negro que es
repelido por las cápsulas, lo que
imposibilita su penetración
dentro de los microorganismos.
Permite la visualización de
cápsulas bacterianas y fúngicas.
TECNICA
Tomar una pequeña muestra del Mezclar con el
microorganismo sembrado en el Añadir al
asa de siembra
medio de cultivo (levadura) y portaobjetos una gota
estéril y
colocarlo en el centro del de nigrosina o de
realizar una
portaobjetos tinta china
extensión

Observar la Dejar secar la


preparación en el extensión a
microscopio temperatura
óptico. ambiente

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