UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

BIOQUÍMICA CLÍNICA
MICROBIOLOGÍA GENEARAL

Tema:Metabolismo microbiano I. Pruebas bioquímicas en

bacterias Gram negativas
Integrantes:
• Alexis Albán
• Estefania Quiguri
• Melanie Romero
• Ivonne Ron
• Marilyn Ruales
• Marisol Toaquiza
• Luis Soria
OBJETIVOS

• Conocer el fundamento de las pruebas bioquímicas

utilizadas para la identificación de bacterias Gram
negativas por medio de un trabajo investigativo.
• Interpretar los resultados obtenidos en las diferentes
pruebas bioquímicas para una cepa asignada y así conocer
las características de estos microorganismos.
INTRODUCCIÓN

Hallazgos
• Conjunto de ensayos preliminares • Familia amplia de bacterias
químicos que se realizan a Gram negativas
los microorganismos • Patrón de tinción de Gram • Carecen de la enzima
• La finalidad es • Caracteres de crecimiento citocromo c oxidasa y por
identificarlos • Permiten asignar la ello son oxidasa negativos
bacteria a una categoría
particular.
Pruebas
Enterobacterias
bioquímicas
PRUEBA TSI
PRUEBA TSI (AGAR HIERRO TRIPLE AZÚCAR)

• Sirve para orientar la identificación inicial de bacilos Gram

negativos.
• Evidencia la fermentación de azúcares presentes.
• Evidencia la producción de sulfuro de hidrógeno y gas.
Derivados Proteicos Incapacidad de Fermentar glucos

• Extracto de Levadura
• De Carne Prueba para decidir la ruta de
• Peptona identificación de género y
especie
• Proteosa peptona
 • Equilibrado Categorías
pH 7,3
Fermentadores de
glucosa
• Rojo - amarillo
pH 6,8 • Ácidos por
fermentación No fermentadores
de lactosa

• naranja - rojo
Alcalinización Fermentadores de
lactosa/sacarosa

Glucosa Lactosa/ sacarosa

No fermentadores de glucosa
• K/K
• Fondo alcalino
• No enterobacteriaceae

No Fermentadores de lactosa/sacarosa
• K/A
• Amarillo - rojo
• Necesita oxígeno
• 18 – 24 horas

Fermentadores de lactosa/sacarosa
• A/A
• Amarillo.
• Utilización de glucosa
• Aerobia
• Anaerobia
 Se evidencia por la
Formación de
Producción de Gas presión que ejerce (+) / (-)
burbujas
dentro del agar.

K/A o A/A y
citocromo oxidasa
(+)
A/A o K/A y prueba
citocromo oxidasa (- • Cepas fermentadas no
pertenecientes a
)
K/K y prueba Enterobacteriaceae.
USOS citocromo (+) • Familia
Enterobacteriaceae
• Preuba para
identificación de Gram
(-)
 En la parte inferior
Colonias puras Sembrado en forma
Sembrado pueden existir cepas
aisladas de zigzag.
viables.

Falsos positivos de A/A

Limitaciones 18 – 24 horas

Falsa negativa de no
fermentador.
PRUEBA SIM
SIM: SULFURO INDOL MOVILIDAD

OBJETIVO Determinar si el microorganismos es móvil o inmóvil

Capaz de liberar H2S Color negro

Desdoblar Indol Molécula de Triptófano

PREPARACIÓN DEL MEDIO Disuelva 30 g del medio en un litro de agua

purificada.
Caliente con agitación frecuente para disolver
completamente el medio.
PRODUCCIÓN DE H2S Autoclave a 121°C durante 15 minutos.

Bacteria reacciona Na2S2O3 Sulfito y sulfato

Gas incoloro H2S Citrato férrico de amonio ↓ negro insoluble FeSO4

 PRODUCCIÓN DE INDOL HIDRATOS DE C

Triptófano Oxidado Indol, escatol e indolacético

MOVILIDAD La movilidad turbidez del medio

observa crecimiento estría negativo

PRUEBA CITRATO
 SIMMONS CITRATO AGAR
SE UTILIZA
ES UN MEDIO PRESENTE EN
COMO ÚNICA
DE CULTIVO
FUENTE DE
EL CITRATO ÚNICA ÚNICA
DIFERENCIAL SÓDICO
CARBONO FUENTE DE N FUENTE DE C

FORMAN
COFACTOR
SISTEMA
ENZIMÁTICO
BUFFER

BALANCE AGENTE
OSMÓTICO SOLIDIFICANTE
 Preparación Disolver 24,2g de cultivo en 1 litro de agua.
Calentar a ebullición por 2min. Esterilizar
del medio autoclave 121°C durante 15min

RESULTADOS

POSITIVO NEGATIVO

EL
NO SE OBSERVA
MICROORGANISMO
CRECIMIENTO
CRECE

CAMBIO DE
COLORACIÓN DE PERMANECE VERDE
VERDE A AZUL
PRUEBA UREA
 Fuente de N2
Ureasa bacteriana
UREA CO2 + NH3 pH

Indicador

Preparación
Enfriar a 50º C y
Disolver 29 g del agregar la base
polvo en 100 ml de de urea, mezclar
H2O . Autoclavar y dispensar en
los tubos
 • Ureasa • Ureasa
negativo positivo
(6,8) (8,4)

3 – 5 días
Resultados válidos en las 2 -6
horas después de incubación

Utilización de peptonas

Falso positivo
Hidrolisis de proteínas V de hidrolisis de urea
PRUEBA OF-LACTOSA
OF – LACTOSA El metabolismo de un glúcido puede seguir la vía
oxidativa o fermentativa.

OXIDATIVA: PROCESO AEROBIO FERMENTATIVA: PROCESO ANAEROBIO

• Agar
• Peptona
El medio es de color verde (pH 7,1)
• Azul de bromotimol
vira a amarillo cuando el medio se acidifica
como indicador de
pH.

Klebsiella
E. coli
RESULTADOS

Klebsiella E. coli
CONCLUSIONES

• Se comprendió el fundamento de las pruebas utilizadas para la identificación

de bacterias Gram negativas como son Citrato, SIM, TSI, Urea, Of Lactosa por
medio de una consulta bibliográfica en la que se hablo sobre como están
compuestos los medios, su coloración después de la prueba, las razones de
porque el medio es recto o en pico de flauta además se presentaron los
resultados para E. coli y Klebsiella con su respectiva interpretación por lo que
las pruebas bioquímicas son muy útiles el en laboratorio de microbiología ya
que nos permite identificar el género y la especia de una cepa de algún
microorganismo causantes de infecciones o conocer sus implicaciones
patológicas en el hombre.
• Por medio de estas pruebas de pudo identificar que la cepa de E. coli es negativo para
Citrato lo que indica que puede usar otras fuentes de carbono, negativo para SIM lo
que indica que no tiene movilidad pero esta prueba fue realizada de forma incorrecta
por lo que no se puede afirmar que no tenga movilidad, en TSI se tuvo un A/A con
producción de gas lo que indica esta bacteria fermenta carbohidratos, negativo para
Urea con un color amarillo lo que indica que no hidroliza la urea y en Of Lactosa
negativo lo que demuestra que no puede fermentar lactosa.
• Y para la cepa de Klebsiella es positivo en Citrato indicando que puede utilizar el
citrato cono única fuente de carbono, una turbidez en SIM lo que indica movilidad, en
TSI no existió producción de gas indicando que no fermenta carbohidratos, positivo en
Urea con un color rosado lo que nos dice que hidroliza la urea con la enzima ureasa y
en Of Lactosa positivo es decir que fermenta lactosa.
 BIBLIOGRAFÍA

Gurrola, S. (10 de abril de 2014). Pruebas bioquímicas. Obtenido de https://es.slideshare.net/SusanaGG/pruebas-

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Gil, M. (10 de Febrero de 2019). lifeder. Obtenido de https://www.lifeder.com/agar-tsi/

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