FUNDAMENTOS DE AGLUTINACIÓN Y

PRECIPITACIÓN

Rosero Rendón Angie Marcela 1644141

Tapiero Joven Danna Valentina 1674452
Tascón Rodríguez Juan Pablo 1646816
DIFERENCIA PRECIPITACIÓN Y AGLUTINACIÓN

RETÍCULO AMONTONAMIENTO
PRECIPITACIÓN
 ANTECEDENTES
● La precipitación de los complejos antígeno-
anticuerpo en solución, ha sido utilizada desde
1920 para la cuantificación de Ag y Ac.
● Las reacciones en gel (agar) fueron utilizadas
para estudios inmunoquímicos en 1946,
cuando Jacques Oudin introdujo la
inmunodifusión “simple”.
● Örjan Ouchterlony, médico sueco desarrolló
en su tesis un nuevo método analítico para
inmunodifusión, el cual se llama ouchterlony o
inmunodifusión doble

Jacques Oudin
 Un antígeno soluble, al ser puesto en
CONCEPTO contacto con su anticuerpo específico,
forma complejos inmunes que al
encontrarse en proporciones óptimas, se
insolubilizar dando una reaccion de
precipitacion.

Son las reacciones más simples de

antígeno/anticuerpo, la formación de este
complejo es el primer paso en la remoción
de agentes infecciosos del cuerpo por el
sistema inmune.
CAMPANA DE GAUSS-FENÓMENO DE PROZONA
● Inmunoprecipitación en medio líquido
○ Precipitación en tubo CLASIFICACIÓN
➢ Floculación
○ Turbidimetría
○ Nefelometría
○ Precipitación de complejos inmunes
solubles
● Inmunoprecipitación en medio sólido
➢ Inmunodifusión radial
➢ Inmunodifusión doble
➢ Inmunoelectroforesis
○ Inmunofijación
○ Contra inmunoelectroforesis
○ “Rocket” inmunoelectroforesis
○ Inmunoelectroforesis cruzada o
bidimensional de Laurell
FLOCULACIÓN - VDRL
Solicitud de Exámen
Preparación del Paciente
Toma de muestra
Etiquetar las muestras con el del nombre paciente correcto, que
la muestras no esté diluida, hemoconcentrada, coagulada,
insuficiente o hemolizada y que tenga el aditivo o anticoagulante
adecuado, en este caso se usa el tubo de tapa roja, que es
seco, sin aditivo para poder obtener suero
FUNDAMENTO
Está basada en la capacidad de los anticuerpos reagínicos
de reaccionar con un fosfolípido llamado cardiolipina. El
procedimiento se basa en colocar el suero del paciente en
contacto con el sustrato antigénico VDRL, sirve para
determinación de sífilis (infección por Treponema Pallidum)

Si los anticuerpos están presentes en el suero, éstos se unen al sustrato

antigénico produciendo la floculación del mismo. Si el suero evaluado no
contiene anticuerpos no se producirá la floculación.
Metodología
Ag: Cantidades
constante

R R R R R Rd
Control
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS TÉCNICA CUANTITATIVA DE VDRL EN SUERO
Falso positivo, debido a que existen múltiples enfermedades que pueden
generar un resultado positivo en este examen sin la presencia de Sífilis
 INMUNODIFUSIÓN RADIAL
Solicitud del examen

Por lo general tanto la IgA como

la IgG y la IgM se miden
simultáneamente. brindan
información importante sobre el
funcionamiento del sistema
inmunológico, especialmente en
lo relacionado con las
infecciones y las enfermedades
autoinmunes, también utilizan
este análisis de inmunoglobulina
para ayudarlos a hacer un
diagnóstico de las
inmunodeficiencias.
 FUNDAMENTO
- Basada en la precipitación en gel de
un sistema antígeno-anticuerpo
monoespecífico.

- Para cuantificar un antígeno dado, se

incorpora en el gel una cierta cantidad
de los anticuerpos correspondientes,
con lo que al aplicar una muestra en
un hoyo y dejarla difundir libremente,
se forma un precipitado circular. De
aquí se deriva el nombre de esta
técnica, ya que la difusión de la
muestra y su precipitación ocurren en
forma radial.
 Metodología
- Para esta técnica se trabaja
con el suero de la sangre
por tanto se deben utilizar el
2. Una vez gelificadas las placas, estabilizar
tubo:
1. Fundir agarosa al 1,5% (p/v) en PBS y
enfriarlas a ~60°, manteniéndola en un
baño calibrado. Adicionar el antisuero
deseado.
el gel a 4°C por 60 min, en cámara
húmeda. Posteriormente, abrir los hoyos
para muestras,(entre 2-3 mm)
MATERIALES:
-Suero problema.
-Suero control.
-Placa de agarosa.
-Micropipetas.
-Cámara húmeda.
-Regla de lectura o lupa graduada.
-Tabla de referencia (viene con la placa del
agar)
 3. cargar las muestras y los estándares en
los hoyos, con una micropipeta de precisión ,
preferiblemente por duplicado. El volumen de
las muestras debe ser constante y
estandarizado.

4.Medir los diámetros de los anillos de

precipitado, preferiblemente con un visor de
5.Construir una curva de referencia
precisión, graduado a divisiones de 0,1 mm.
para cada corrida de muestras, con al
menos tres estándares de
concentración conocida. Graficar en
papel milimétrico el diámetro elevado al
cuadrado (d2 ) en el eje Y, contra mg/dl
de los estándares.

6.Interpolar las incógnitas.

- Dispensar 5 microlitros de suero control
cada uno de los pocillos y de las muestras. Tecnica:
Se depositan las muestras en los
El anticuerpo se pocillos
- Tener cuidado de no tocar los bordes de embebe en el gel

los pocillos al retirar la pipeta.

- Tapar la placa e incubar de forma invertida.

- Incubar en cámara húmeda, evitando los

cambios bruscos de temperatura. *para la toma del diámetro se utiliza una
regla de lectura o una lupa graduada.
 El diámetro del círculo o anillo de precipitado guarda una proporción
con la cantidad de antígeno en la muestra. De esta forma, se puede
establecer una curva de referencia con cantidades conocidas del
antígeno (estándares o patrones de referencia) y así interpolar los
valores de muestras desconocidas.

*Cuanto mayor sea la cantidad del

antígeno, mayor será el diámetro de la
banda.

*para la toma del diámetro se utiliza una

regla de lectura o una lupa graduada.
 INMUNODIFUSIÓN DOBLE EN PLACA
Solicitud de examen.
Útil en el diagnóstico serológico de
algunas entidades micóticas
sistémicas como Histoplasmosis,
Coccidioidomicosis y
Paracoccidioidomicosis, entre otros

Principalmente se puede diferenciar antígenos

que son muy parecidos entre sí. Por ejemplo
puede emplearse para el diagnóstico de una
histoplasmosis, una infección respiratoria
producida por un hongo, y determinar si se
trata de una infección aguda o crónica
 Metodología

1.Preparar agarosa al 1% (p/v) y verterla

sobren platos de Petri de plástico de 10
cm de diámetro, como en la radial.

2 Abrir hoyos con el sacabocados de 4-

5mm de diámetro y una distancia de
5mm.

3.Llenar con las muestras (25-30 μl)

4. Dejar difundir las placas en una
cámara húmeda (una caja tapada, con
papel humedecido) a temperatura
ambiente, durante al menos 24 hr. Leer
los resultados.

5.Si se requiere, los resultados pueden

fotografiarse frente a un fondo negro, con
iluminación oblicua, para que los
precipitados se observan de color blanco
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

IDENTIDAD NO IDENTIDAD IDENTIDAD PARCIAL

 EJEMPLOS

SH: Suero humano

ASH: albúmina sérica
humana
GGH:Gamaglobulina
humana
 ● Mediante la técnica de ouchterlony podemos
determinar la existencia o no de determinantes
comunes entre Ag. Según las características de las
bandas formadas
INMUNOELECTROFORESIS
Solicitud del examen
En el campo clínico, es útil para
determinar la presencia y tipo de
paraproteínas (por ejemplo, en
mieloma múltiple, macroglobulinemia
de Waldenström, gamapatías
monoclonales benignas, etc.).
También permite evidenciar la
ausencia o disminuciones
sustanciales de algunos componentes
séricos tales como IgG, IgA e IgM, o
el factor C3 del complemento.
 ● Los diferentes antígenos difunden en
Fundamento forma radial, mientras el antisuero difunde
en forma perpendicular al canal. Cuando
La inmunoelectroforesis, descrita antígenos y anticuerpos se encuentran, se
por Grabar y Williams en 1953, es la forman precipitados en forma de arco.
combinación de una electroforesis
con una inmunodifusión en gel.

● La electroforesis se realiza en agar, en el

cual se abren uno o más pocillos
circulares para las muestras, luego se
abre un canal largo, paralelo a la
dirección de la corrida. El canal se llena
con el antisuero correspondiente y la
placa se deja en cámara húmeda por 24
hr.
Metodología
-Preparar placa de agarosa, aplicar
muestra y suero control según
plantilla.
- Se separan electroforeticamente los
antígenos de una muestra.
- Se abre un canal a lo largo de la
placa para colocar el antisuero MATERIALES:
deseado.
-Tampón barbital-HCl 0.1 M;pH 8.6, diluído 1/2 para
- Después de 24 hr de difusión, se corrida.
evidencian los distintos sistemas -Agarosa al 1 % en tampón barbital-HCl 0,1 M; pH 8.6;
diluido 1/3.
antígeno-anticuerpo que precipitaron, -Antisueros polivalentes y monoespecíficos.
formando arcos Suero control: suero humano normal teñido con azul
de bromofenol.
Interpretación de Resultados
Los resultados de la prueba de IEF
sérica proporciona dos datos
médicos importantes. Primero, la
prueba indica si hay presencia de
Igs anómalas Si no hay Igs
anómalas y los niveles de Igs
comunes son normales, es posible
que no tenga que someterse a
análisis adicionales.

Si se detectan Igs anómalas, podría

significar que hay alguna afección de
la salud.
 Ejemplo

Distorsión de un arco inmunoelectroforético causado por una paraproteína

monoclonal (ej. en mieloma múltiple).

Si un determinado clon de células

plasmáticas sufre transformación
neoplásica, se producirá una gran
cantidad de una inmunoglobulina
monoclonal, que distorsionara la
continuidad del arco correspondiente
(abajo).
AGLUTINACIÓN
 ANTECEDENTES

En 1901 Karl Landsteiner

analizó la sangre de 27
personas y la suya propia, y
llegó a la conclusión de que
existen tres tipos distintos de
hematíes en la sangre, A, B y
O, que dan lugar a reacciones
de aglutinación.
 En las pruebas de aglutinación, una partícula se acopla con un reactivo

CONCEPTO antigénico. La partícula compleja formada se mezcla con la muestra; si el

anticuerpo o el antígeno buscados están presentes en la muestra, producirán
el entrecruzamiento de las partículas, lo que se observa como una
aglutinación.

La reacción de aglutinación se utiliza

ampliamente en clínica:
● Tipificación de eritrocitos
● Diagnóstico de enfermedades
hemolíticas
● Tests para el factor reumatoide
● Test confirmatorio para sífilis La aglutinación es considerada más sensible que la
● Test látex de embarazo precipitación para detectar anticuerpos, debido básicamente
a que grandes partículas cubiertas con Ag sirven para
amplificar la reacción.
CLASIFICACIÓN Aglutinación Directa Aglutinación Indirecta

● Aglutinación Directa

● Aglutinación Indirecta

● Inhibición de la aglutinación

● Hemaglutinacion Viral
Inhibición de la Aglutinación
● Hemaglutinación Directa

● Hemaglutinación Indirecta (pasiva)

● Inhibición Hemaglutinación
 Grupos ABO ● Instrucciones para la preparación del paciente, igual que
en las pruebas anteriores
● Toma de muestra, igual que en las pruebas anteriores
Solicitud de Exámen
Se hace para determinar el tipo de sangre
de una persona. Los médicos necesitan
conocerlo cuando van a hacer una
transfusión o un trasplante. Para realizar
una donación de sangre, se debe
determinar qué tipo se recibe para
suministrarlo a una persona compatible.

Durante el embarazo, es necesario

saber el tipo de sangre de los
padres para prever la posibilidad de
que el feto no sea incompatible con
la madre y ésta reaccione ante él
como si fuese un agente extraño
 EJERCICIO
AB

O
B

A
METODOLOGÍA FUNDAMENTO
La determinación de
grupos sanguíneos del
sistema ABO se efectúa
enfrentando los glóbulos
rojos del paciente con
anticuerpos monoclonales
Anti-A, Anti-B o Anti-AB.
La aglutinación o no de
los hematíes ensayados
frente a cada uno de los
reactivos indica la
presencia o ausencia de
los correspondientes
antígenos.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Bibliografía
http://www.kerwa.ucr.ac.cr/bitstream/handle/10669/9244/2007_Manual_Metodos_Inmunologicos_completo_web.pdf?sequence=1

https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&ved=0ahUKEwj9t8vBtJLWAhUFSyYKHZdYDSMQFgg9MAM
&url=http%3A%2F%2Fwww.fbioyf.unr.edu.ar%2Fevirtual%2Fpluginfile.php%2F131645%2Fmod_folder%2Fcontent%2F0%2Fgrupo%2
520y%2520factor.pdf%3Fforcedownload%3D1&usg=AFQjCNHHN8cP1A6lHX2yXhtcDqDGWrcvH

Manual de practicas de inmunologia, adriana garibay Escobar, edicion 2006

http://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/vdrl_test_c_controles_sp.pdf

http://www.ispch.cl/sites/default/files/PROCEDIMIENTO-TECNICO-PARA-EL-DIAGNOSTICO-SEROLOGICO-DE-SIFILIS.pdf

http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/guia01.pdf

http://www.inmunologiaenlinea.es/index.php/caapss/73-03
¡GRACIAS!