Biofizica

Curs 5

GUTU MIHAI MD. PhD.

Metode in functie de principiul biofizic
• 10. Microscopia electronica. Microanaliza
• 11. Metode spectroscopice
• Spectoscopie gamma
• Spectroscopie raze X
• Spectroscopie in UV/vizibil-
• Spectroscopie in infrarosu si Ramman
• Spectroscopie prin Rezonanta Magnetica Nucleara
 Fizica clasica vs Mecanica cuantica

Modelul Bhor

Mecanica cuantica
 Radiatii electromagnetice

Caracter dual Unda/Particula (Cuanta/Foton)

E =h ν
h- constanta lui Planck
ν- frecventa
Ecuatia lui Planck
E =h ν
h- constanta lui Planck
ν- frecventa
Notiuni elementare de fizica cuanatica
Numar cuantic principal- stratul electronic - n
Numar cuantic azimutal- geometria orbitalior- l
Numar cuantic magnetic-pozitionare spatiala a
orbitalilor ml

Numar de spin (ms) – sensul de rotatie in

jurul axei sale

https://www.slideshare.net/devishatatineni/nuclear-
magnetic-resonance-spectroscopy-59592003
Numar cuantic principal- stratul electronic - n
Numar cuantic azimutal- geometria orbitalior-l
Numar cuantic magnetic-pozitionare spatiala a
orbitalilor ml
Numar de spin (ms) – sensul de rotatie in jurul
axei sale
Clasificarea spectrelor:
Forma:
- de emisie
- de absorbtie
Dupa origine:
-nucleara (Raze gamma)
-electronice profunde (Raze X)
-electronice periferice( UV,Visibil)
-modificari sterometrice
moleculare/atomice (IR, RES, SRM)
Cum apar:
-sub forma de linii
-sub forma de banda
-continuu
In functie de lungimea de unda:
- spectru de raze gamma
- spectru de raze X
- spectru de raze UV
- spectru de raze/unde luminoase
- spectru de raze/unde infrarosii
- spectru de microunde
- spectru de unde radio
Spectroscopie gamma

http://www.rpe.org.in/article.asp?issn=0972-
0464;year=2014;volume=37;issue=1;spage=38;
epage=41;aulast=Baburajan
 Spectroscopie gamma
• Medicina nucleara- analiza emisiilor nucleare prin selectarea
anumitor frecvente de energie (ferestre energetice) permit
detectarea prezentei anumitor radioizotopi- in scop imagistic, in
radiobiologie.

Nodul tiroidian discordant

Spectroscopie raze X
Analiza calitativa- spectroscopie radiatii
X caracteristice-;microanaliza-

legea lui Moesley

nkn = R(Z-s)2 (n-2 - k-2)

Frecventa radiatiei X emise de un atom depinde de:
Numărul atomic Z al elementului
Numerele cuantice principale ale nivelelor între care are
loc tranziţia (n,k)
2 constante (Ryedberg - R, o constantă de ecran - s)
Spectroscopie raze X Analiza cantitativa- spectroscopie radiati X-
spectru continuu- Cristalografie, Radiologie,
Securitate
Spectroscopie in UV/vizibil
Analiza cantitativa
Spectroscopie in UV/vizibil
Spectrosopia in vizibil /UV se utilizeaza in scopul
identificarii unor compusi in stare pura sau in probe
biologice prin realizarea unor grafice de absorbtie-
absorbtia unui compus pentru anumite valori poate
oferi informatii despre prezanta acestuia.
interval(nm) Structura sau tip de compus
220 to 280nm Hidrocarburi alifatice sau cilcice
Compusi cu legaturi duble sau cicluri
220 to 250 nm
benzenice
250 to 330 nm Prezenta a mai mult de 2 legaturi duble
Prezenta beta carotenului ( precusor de
450 to 500nm
vitamina A)-

250 to 330 nm
Vitamina K1 (structura de naftichinona)
(249nm; 260nm
and 325nm)
Spectroscopie Infraroşu si Ramman

• Miscari de vibratie
• vibraţii fundamentale,
proprii
• Vibraţii de valenţă sau de
alungire ( se modifică cu
distanţa interatomică în
direcţia legăturii)
• vibraţii de deformare
unghiulară ( la care se
modifică unghiul de legătură).
 Spectroscopie în Infraroşu

• Principiile spectrometriei
bazate pe Transformata
Fourier (FTIR)
• interferometru Michelson
• Transformarea achiziţiei
temporale în domeniul
frecvenţelor reprezintă
transformarea Fourier (FT)
 Aplicatii
• Analiza lichidelor biologice

a. spectru al lichidului sinovial

sănătos
b. spectrul achiziţionat în cazul
unui lichid sinovial artritic
c. substracţia spectrului normal
din cel achiziţionat.

Chalmers J M, PR. G . Handbook of Vibrational Spectroscopy. Volume 5 - Applications of Vibrational Spectroscopy in Life and Natural
. Sciences WILEY, 2001.
 Aplicatii
• Analiza celulară

A. Spectrul IR al limfocitelor normale;

B. Spectrul IR limfocite in leucemie cronică

Liu KZ, Schultz CP, Johnston JB, Beck FW, Al-Katib AM, Mohammad RM, Mantsch HH. Infrared spectroscopic study of bryostatin 1-induced membrane
alterations in a B-CLL cell line. Leukemia 13: 1273-1280, 1999
 Aplicatii
• Analiza tisulara
a. spectru în care cu asterisc sunt marcate zonele de absorbţie
caracteristice lipidelor
b. spectru în care cu asterisc sunt marcate zonele
corespunzătoare colagenului
c. spectru ţesut sân care are substras contribuţia lipidelor
(ţesutul adipos) şi contribuţia colagenului (a ţesutului
epitelial prezent la nivelul sânului)

Muller DM, Seim H, Kiess W, Loster H, Richter T. Effects of oral L-carnitine supplementation on in vivo long-chain fatty
acid oxidation in healthy adults. Metabolism 51: 1389-1391, 2002.
 Aplicatii

• Analiza modificarilor
conformationale
macromoleculare
• modificari calitative
in probe biologice-
induse de stresul
oxidativ

Modificari conformationale detectate in cazul hemoblobinei in cazul pacientielor tratati cu

chimioterapice- sesizabile prin modoficari in benzile de amida, dar nu numai
Exploratory infrared spectroscopy study of erythrocytes in cancer chemotherapy Mihai GUTU,
Mihaela AVADANEI, Mihai MARINCA and Cipriana STEFANESCU, Rev. Roum. Chim., 2017, 62(2),
181-190
 Spectroscopie prin rezonanta magnetica
nucleara (SNMR)
Frecventele de rezonanta ale protonilor sunt in domeniul undelor Radio.
Semnal electromagnetic generat de atomii cu numar de spin diferit de zero
(numar impar de protoni)

Ecuatia Larmor:
ω = γ0 B0
ω - FRECVENTA DE PRECESIE
γ0 – factorul giromagnetic
B0- intensitatea magnetica externa
Spectrometrul prin Reznanata Magnetica
nucleara(NMR S)
Spectroscopia prin RMN
• camp magnetic extern foarte mare 10 T- magneti
supraconductori- sisteme de racire pe baza de He
• magnetul in care este pusa proba se roteste cu o
frevneta mare 10 KHz- pentru inlaturarea
neomogenitatilor de camp

Analiza spcroscopica RMN

spectru RMN la rezoluţie mică (apa intr-un pahar de sticlă) la o
frecvenţă de 5MHz
• spectre cu banda largă, pentru care laţimea
liniilor spectrale maschează structura fină a
mediului înconjurător
• spectre de rezoluţie înaltă, in cazul unor
dispozitive care au posibilitatea realizării unor
câmpuri magnetice mari, pote detecta diferenţe
de frecvenţe (deplasări chimice) de până la
0,01ppm
• Deplasare chimica- shift – informatii despre mediul
molecular (unitate de masura ppm)

Spectre RMN de rezoluţie înaltă (etanol) la frecvenţă de 60 de

MHz, rezolutie de 10-6

Skoog, Hooler, Nieman, Principes D’Aanalyse instrumentale, traduction et révision scientifique de la 5e édition américane par
Claudine Buess-Herman et Freddy Dumont, De Boeck Diffusin S.A, 2003
Aplicatii in medicina
• Analiza spectroscopica a anumitor zone anatomice in
diferite patologii:
• cancer de prostata, cerebral, etc
• acumularea de diferite substante sau medicamente in diferite
teritorii

https://openi.nlm.nih.gov/detailedresult.php?img=PMC2770824_kjr-10-535-
g013&req=4
 Aplicatii in medicina

Pacient cu crize comitiale

aparute de novo, Spectrosopie
se remarca o crestere a
nivelului de colina si reducerea
NAA (N-acetyl aspartate)-
corespunzator unui glioblastom
cu grad scazut de diferentiere
Aplicatii in cecetarea fundamentala medicala
Prelucrare spectrosopica
prin corelarea
deplasarilor chimice
specifice H si N15

peste 10 % din
structurile proteice din
PDB sunt determinate
https://www.nature.com/horizon/proteinfolding/backgr prin rezonata magnetica
ound/figs/technology_f3.html
Metode in functie de principiul biofizic
• 12. Metode radioizotopice
• 13. Metode pentru studiul bioelectricitatii (metoda Patch-
clamp)
II. Metode in functie procedeu
• Metode de separare
• Metode analitice
Metode de separare
• amestecurile trebuiesc separate in componente-

- Metode electrokinetice
- Metode de Filtrare
- Centrifugare
- Cromatografie
Metode de filtrare

Microfiltrare
Ultrafiltrare
Osmoza inversa
Clarificarea
• este o metoda de filtrare prin
aplicarea unei presiuni negative de
partea opusa.

Suc de rosii –incolor= clarificari repetate!!

 Osmoza Inversa

• Osmoza inversa (RO) este un procedeu

de purificare a apei , utilizeaza o
membrana semipermeabilea , si
presupune indepartarea ionilor si a
particulelor mai mari din apa-
desalinizare!!.
 Metode analitice

• Analiza calitativa • Analiza cantitativa

- Spectrosopie:
- Spectrosopie:
- Visibil/UV/Infrarosu
- Visibil/UV/Infrarosu
- Rezonanta magnetica/electronica
- Rezonanta magnetica/electronica
- Spectrosopie de masa
- Spectrosopie de masa
- Microscopie:
- Metode electrokinetice
- Optica
- Electronica
- De forta atomica
III. Metode in functie de complexitatea
sistemelor analizate
- Spectrosopie:
• atomice, - Visibil/UV/SRMN/Spectroscopie de masa
• moleculare - Microscopie:
- De forta atomica
• celulare
• tisulare - Spectrosopie:
- Infrarosu/RES
• Sisteme complexe - Microscopie:
- optica ( fluorescenta)
- electronica
- Conductometrie
- Metode optice
- Microscopie:
- Optica