Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Microbiología
Laboratorio de Bioquímica Microbiana

PRÁCTICA 2. BALANCE DE FERMENTACIÓN

Grupo: 5IM2 Sección: 2

Equipo: 7

Integrantes:
❑ Guerrero de los Santos Brenda Sofía
❑ Hernández Juan Salvador
❑ Ramos Rodríguez Raymundo
❑ Solano Valeriano Deniss
Respiración aerobia
● Proceso metabólico por el cual distintos
organismos obtienen energía a partir de
moléculas orgánicas que son oxidadas hasta
CO2
C6H12O6 + 6O2 → 6CO2 + 6H2O + energía (ATP)

● Se caracteriza por tener al oxígeno como

aceptor de electrones de una cadena
transportadora de electrones produciendo
agua al final de la reacción.
Respiración Anaerobia
✔ Proceso metabólico que consiste en la
oxidorreducción de diferentes compuestos.
✔ Los electrones liberados son aceptados por
moléculas diferentes del oxígeno.
✔ Es llevada a cabo por células procariotas y
algunas levaduras y en el ser humano puede
realizarse en el músculo cuando tiene una
demanda elevada de energía (fermentación
láctica)
 Proceso generador de ATP en el que los
Fermentación compuestos orgánicos sirven tanto como
donantes de electrones (oxidándose) y como
aceptores de electrones.

Proceso catabólico de
oxidación incompleta,
totalmente anaeróbico donde
el producto final es un
compuesto orgánico aceptor
de electrones del NADH
producido durante la glucólisis.
 Los Las
El ATP se Las reacciones fermentaciones
carbohidratos
produce solo de llevan el nombre
son los
por fermentación de los
principales
fosforilación a ocurren en el principales
nivel sustrato.. sustratos de citosol. productos que
fermentación. generan.
CONSIDERACIONES: Baterías que llevan a
1) El NADH es oxidado cabo fermentación:
a NAD+ anaerobios facultativos.
2) El aceptor de
electrones es
piruvato o un
Enterobacterias
derivado de este

Presencia de Condiciones
oxígeno anaeróbicas

Crecen como
Metabolismo
heterótrofos
fermentativo
aeróbicos
Las fermentaciones pueden ser lineales o ramificadas:
 1) Alcohólica

2) Homoláctica

3) Ácido Mixta
Tipos de fermentaciones
4) Butanodiol
Existen muchas clases de
fermentación, que a menudo son 5) Propiónica
características de grupos
microbianos específicos. 6) Butírica I

7) Butírica II
Fermentación
alcohólica
EFECTO PASTEUR Fermentación alcohólica

●
Louis Pasteur

●Fue el primero en comprobar que, si se

suministra suficiente oxígeno, la levadura
crece sobre glucosa sin producir alcohol.
●Sigue el proceso respiratorio:
 EFECTO PASTEUR

Nivel de Oxígeno Nivel de oxígeno

Se lleva a cabo el Se lleva a cabo

proceso fermentación.
respiratorio,
debido a la
demanda de ATP
por parte de la
celula.
EFECTO CRABTREE Fermentación alcohólica

Corresponde a la inhibición de la respiración por concentración de glucosa.

El efecto se explica:

1. Competencia entre la glucólisis y la respiración, por el ADP y Pi.

2. Cambio de pH intracelular, cambio en la permeabilidad de la membrana
mitocondrial, regulación de las enzimas específicas de la glucólisis.
3. Estos fenómenos ocurren en células tumorales o de alta velocidad glucolítica
 Microorganismos
Fermentación Productos que la lleva a Ganancia de Enzimas clave
cabo ATP

Algunos hongos 2 ATP o 1 ATP

Alcohólica Alcohol etílico (en especial /GLUCOSA Alcohol
y CO2 algunas deshidrogenasa
levaduras)
IMPORTANCIA INDUSTRIAL DE LOS PRODUCTOS
Fermentación utilizada en la fabricación de bebidas alcoholicas y alcohol
comercial:
1. Cerveza: formación de alcohol etílico (Saccharomyces cerevisiae)
2. Vino: formación en frutas (Saccaromyces ellipsoideus)
 Fermentación
ácido- Mixta
Algunas bacterias Gram – facultativas fermentan
glucosa produciendo lactato, acetato,
succinato, formiato, CO2 y H2 .

Glucólisis
LDH
Piruvato formiato – Liasa
Formiato hidrogenoliasa
Acetaldehído deshidrogenasa ENZIMAS
Alcohol deshidrogenasa
Fosfotransacetilasa
Acetato cinasa
PEP carboxilasa
Enzimas del CAT.
 Se transfieren
5 mL del
cultivo a un
tubo

Prueba rojo
Se observa el
de Metilo Añadir 5 gotas
resultado. del indicador

Negativo
Positivo
 Microorganismos
Fermentación Productos que la lleva a cabo Ganancia de Enzimas clave
ATP

Piruvato-
Ácido- Mixta Acetato, Etanol E. coli, Salmonella 3 ATP/ formiato- liasa
y Succinato y GLUCOSA Formiato
Shiguella hidrógeno liasa (E.
coli)
 Fermentación butanodiólica
Se caracteriza por la producción de 2,3-
butanodiol y acetoína.
Se presenta en algunas enterobacterias como
Klebsiella, Serratia y Erwinia.
La producción de butanodiol se ve favorecida en
condiciones ligeramente ácidas.

Enzimas
A diferencia de la fermentación ácido
mixta, en la fermentación de butanodiol
se producen grandes cantidades de 2,3-
butanodiol, más CO2, etanol y menos
ácido.
PRUEBA DE VOGES PROSKAUER

Se realiza para determinar la

capacidad de un microorganismo para
fermentar glucosa con producción de
acetoína por la vía butanodiólica.
Reactivos:
- Alfa naftol al 5% en etanol
- KOH al 40%

Prueba positiva: aparición de un color

rosado o rojo.
 Fermentación propiónica
Las especies de los géneros
Propionibacterium, Clostridium
propionicum y Megasphaera elsdenii
fermentan carbohidratos o lactato en
propionato, acetato y CO2.

Esta fermentación puede proceder por vía del

Succinato o del Acrilato.
VÍA DEL SUCCINATO
La lactato deshidrogenasa con flavina oxida el lactato a piruvato. Dos
moléculas de piruvato se reducen a propionato como aceptor de electrones,
mientras que un piruvato de oxida a acetato a través de acetil-CoA que
sintetiza 1 ATP.
VÍA DEL SUCCINATO
VÍA DEL ACRILATO
Fermentación Productos Microorganismo que Ganancia Enzimas clave
la lleva a cabo de ATP

BUTANODIÓLICA 2, 3- Klebsiella, Serratia y 2 ATP/ 2, 3- butanodiol

butanodiol, Erwinia glucosa deshidrogenasa
lactato, 2-aceto lactato
etanol, CO2 y sintasa
H2

PROPIÓNICA Ácido Propionibacterium 3 ATP/1.5 -Metil-malonil-CoA-

propiónico, glucosa piruvato
ácido acético, transcarboxilasa
ácido -Fumarato reductasa
succínico, -Metil -malonil-CoA
CO2. mutasa
Serratia. Erwinia. Propionibacterium.
IMPORTANCIA INDUSTRIAL

- 2, 3- Butanodiol
- Precursor para la fabricación de 1,3- butadieno.
- Producción de metiletilcetona , mediante deshidratación que
puede ser utilizada como disolvente y aditivo para combustibles
líquidos.

- Ácido propiónico
- Agente conservante ya que inhibe el crecimiento de moho y
algunas bacterias
Los alimentos en que puede utilizarse son:
quesos, panes, pasteles, tortillas de trigo y
productos cárnicos.
Fermentación Homoláctica
El Lactato es producto de fermentación en
muchos anaerobios obligados y
facultativos, bacterias lácticas (LAB).
El proceso fermentativo tiene como
objetivo recuperar coenzimas oxidadas
(NAD+).
Consiste en la transformación de piruvato
en lactato en una sola etapa.

Enzimas utilizadas:
Lactato deshidrogenasa
 Fermentación Butírica I (ácidos)
Ruta fermentativa clásica del género clostridium
1 en dónde los productos principales de la ruta
metabólica son el ácido butírico y el ácido
acético. 9
8 7
2 Enzimas utilizadas:
1. Piruvato ferredoxina oxidorreductasa
2. Acetil coA-acetiltransferasa (tiolasa)
3 3. L-β-Hidroxiacil-CoA deshidrogenasa
4. Hidroxiacil CoA hidroliasa (crotonasa)
4 5. Butiril CoA deshidrogenasa
6. Butirato cinasa
5 7. Fosfotransacetilasa
8. Acetato Cinasa
6 7
 Fermentación Butírica II
(Disolventes)
Continuación de la ruta fermentativa clásica del
género clostridium, en donde los productos
principales de la ruta son etanol, acetona,
1 isopropanol y butanol. En la primera guerra
mundial fue el principal método de obtención
de acetona.
6 7 Enzimas utilizadas:
2 1. Piruvato ferredoxina oxidorreductasa
2. Acetil coA-acetiltransferasa (tiolasa)
3. L-β-Hidroxiacil-CoA deshidrogenasa
10 4. Hidroxiacil CoA hidroliasa (crotonasa)
11
3 5. Butiril CoA deshidrogenasa
12 6. Acetaldehído deshidrogenasa
7. Alcohol deshidrogenasa
4 NAD(P)(+) 8. Butiraldehído deshidrogenasa
Isopropanol 9. Butanol deshidrogenasa
10. Acetato CoA-transferasa
11. Acetoacetato descarboxilasa
5 12. Isopropanol Deshidrogenasa

8 9
Fermentación Productos Microorganismo que la lleva a Ganancia Enzimas clave
cabo de ATP

BUTÍRICA I Butirato ● Clostridium 0-2 ATP/ ● Butiril CoA

(Ac. Butírico) saccharobutyricum mol Glc deshidrogenasa
Acetato ● Butyrivibrio hungatei
(Ac. Acético)

BUTÍRICA II Etanol ● Clostridium 0-2 ATP/ ● L-β-Hidroxiacil-CoA

Isopropanol acetobutyricum mol Glc deshidrogenasa
2-Propanona ● Clostridium beijerinckii ● Butiraldehído
Butanol deshidrogenasa
● Isopropanol
deshidrogenasa

Clostridium acetobutyricum
Butyrivibrio hungatei
Importancia Industrial
● Butanol: Se utiliza como un biocombustible de alta energía ya que produce
mucha más energía que el etanol, casi tanto como la gasolina convencional.
También se utiliza como solvente y como precursor para distintos reactivos
en la síntesis orgánica.
● 2-Propanona: Se utiliza frecuentemente como un solvente, al igual que como
intermediario en la síntesis orgánica.
● Etanol: Se utiliza en la producción de bebidas alcohólicas, como solvente,
como precursor del dietil éter y como combustible.
● Isopropanol: Se utiliza como desinfectante, como fase móvil para métodos
de análisis, como agente precipitante de ADN y como solvente.
 Balance de ● Es la expresión de un balance

fermentación químico que se lleva a cabo con

datos experimentales obtenidos
por la cuantificación del sustrato
usado y de productos convertidos
por el proceso fermentativo
● Establecer un balance correcto de Carbono, de Óxido–
Reducción y de moléculas de un solo átomo de carbono
(CO2 y Ácido fórmico) ¿QUÉ
● Los balances de fermentación contienen información INFORMACIÓN
importante con respecto a las reacciones químicas que PROPORCIONA?
están teniendo lugar.
 Consideraciones

La cantidad de
La cantidad de
Glucosa se considera carbono inicial es muy
productos oxidados
como un compuesto cercana a la cantidad
debe ser muy cercana
totalmente neutro ( de carbon de
a los productos
valor de oxidación =0) productos
reducidos (O/R= 1)
fermentados (>95%)
 ÍNDICE O/R

Proporciona una indicación de si los productos formados se equilibran

con respecto a sus estados oxidados a reducidos.

Si la relación de productos oxidados a productos reducidos es cercana a

1, proporciona una indicación de equilibrio.
 MÉTODO DEL HIDRÓGENO DISPONIBLE

EJEMPLOS:
Etanol: C2H6O
Tiene una relación H/O= 6/1, para tener una
Consideraciones: relación de 2 le sobran 4H.
1) Analizar las fórmulas en base a Entonces su O/R es de -2
la relación H/O=2
Acetato: C2H4O2
2) Cada 2H en exceso= -1 y 2H Tiene una relación 4H/2O=2
faltantes= +1 Entonces su O/R es 0

Dióxido de carbono: CO2

Tiene una relación 0H/2O
Para tener una relación de 2, le faltan 4H, por lo
que su O/R es +2
% de Carbono recuperado

Se calculan los milimoles de C en el

sustrato y en los productos finales. La
suma de los milimoles de C de los
productos obtenidos, divididos por
los del sustrato utilizado por 100.

En las determinaciones analíticas se

puede considerar +5 o -5
EJEMPLO
Referencias bibliográficas

- Gottschalk Gerhard (1985). Bacterial Metabolism. Second edition.

Germany: Springer. Pages: 210-249.
- B. H. Kim and G. M. Gadd (2008). Bacterial Physiology and
Metabolism. United States of America. Pages: 272-280.
- Parés, Ramón (2012). Bioquímica de los microorganismos.
Barcelona: Reverté. Páginas: 73-89.
- Hamilton, W. A. 1988. Energy transduction in anaerobic bacteria, pp.
83–149. In: Bacterial Energy Transduction. C. Anthony (Ed.).
Academic Press, New York. Pages: 25-30
- G. N. Cohen (2011). Microbial Biochemistry. Second Edition. London:
Springer. Páginas: 101-107.