UNIVERSITÉ AKLI MOUHAND OULHADJ, BOUIRA

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Licence Biochimie
Module immunologie moléculaire et cellulaire

Les hybridomes
et
les anticorps monoclonaux
• Diabetes mellitus is increasing in prevalence worldwide. The economic costs are considerable given the
• cardiovascular complications and co-morbidities that it may entail. Type 1 diabetes (T1D) is a chronic autoimmune
• disease characterized by the loss of insulin-producing pancreatic β-cells. The pathogenesis of T1D is complex and
• multifactorial and involves a genetic susceptibility that predisposes to abnormal immune responses in the
presence of
• ill-defined environmental insults to the pancreatic islets. Genetic background may affect the risk for autoimmune
• disease and patients with T1D exhibit an increased risk of other autoimmune disorders such as autoimmune
thyroid
• disease, Addison’s disease, autoimmune gastritis, coeliac disease and vitiligo. Approximately 20-25% of patients
• with T1D have thyroid antibodies, and up to 50% of such patients progress to clinical autoimmune thyroid disease.
• Approximately 0.5% of diabetic patients have concomitant Addison’s disease and 4% have coeliac disease. The
• prevalence of autoimmune gastritis and pernicious anemia is 5 to 10% and 2.6 to 4% respectively. Early detection
of
• antibodies and latent organ-specific dysfunction is advocated to alert physicians to take appropriate action in
order to
• prevent full-blown disease. Patients and family members should be educated to be able to recognize signs and
• symptoms of underlying disease.
 Les hybridomes
• Un hybridome est une cellule qui provient de l’hybridation entre
des cellules lymphoïdes normales de mammifères et des cellules
myélomateuses de tumeurs malignes du système immunitaire.

• L'intérêt est de cumuler les propriétés des deux cellules de départ :

production spécifique d'anticorps pour le lymphocyte et immortalité
pour la cellule cancéreuse.
• Les hybridomes donnent des lignées immortalisées stables
productrices d'anticorps monoclonaux.

• Les hybridomes servent à produire en grande quantité des anticorps

monoclonaux. Ceux-ci sont utilisés comme réactifs dans la recherche
et pour l'établissement d'un diagnostic.

• De nombreux médicaments actuellement commercialisés sont des

anticorps monoclonaux; ils sont utilisés en cancérologie (ex :
trastuzumab dans le cancer du sein) mais également dans d'autres
pathologies (infliximab dans la polyarthrite rhumatoïde et maladie de
Crohn) .
 Les anticorps monoclonaux
• La plupart des antigènes possèdent de nombreux
épitopes et par conséquent induisent la
prolifération et la différenciation de toute une série
de clone de cellules B.
• Les anticorps sériques résultant sont hétérogènes et
constitués d’un mélange d’anticorps (Chaque
spécifique d‘un épitope)
 Propriétés
Une réponse anticorps polyclonale:
• Elle facilite la phagocytose, la lyse médiée par
le complément.

• Les anticorps monoclonaux dérivent d’un

unique clone et donc spécifiques d’un seule
épitope.
• En 1975, Georges Kohler et Cesar Milstein
(prix Nobel) ont conçu une méthode pour
préparer un anticorps monoclonale.

• En fusionnant une cellule B productrice

d’anticorps normale activée et une cellule du
myélome (un plasmocyte cancéreux).
• Ils ont été capable de créer une cellule hybride
• Appelée Hybridome
 Propriété de l’hybridome

• Il possède l’immortalité de la cellule du

myélome et sécrète l’anticorps de la
cellule B
• Ils produisent de grandes quantité
d’anticorps
• Elles peuvent être cultivées indéfiniment
 La production des Acs monoclonaux
1- l’mmunisationL: Elle consiste en une inoculation , généralement par
Voie péritonéale d'un antigène ou d'un haptène à un animal de laboratoire,
( les plus courants étant la souris, le rat ou le lapin), ce qui a pour effet
de produire des plasmocytes libérant des anticorps contre cet antigène.

Des anticorps différents (polyclonaux) sont produits pour combattre

l'antigène. Il est possible d'obtenir des anticorps reconnaissant des
substances qui ne sont pas immunogéniques, en les conjuguant à
des protéines immunogéniques, comme la BSA, le DNP.

Plusieurs protocoles d'immunisation sont possibles en variant les doses, les

intervalles des injections, l'adjuvant utilisé et la durée du traitement.
L'adjuvant utilisé est principalement l'adjudant de Freund soit incomplet
(émulsion d’huiles, d’eau et d’émulsifiants (savons) qui piège l’Ag) soit
complet (complexe d’eau, d’huiles, d’émulsifiants et de morceaux de
bactéries tuées).
Cette injection a pour effet de produire des
plasmocytes libérant des anticorps polyclonaux
contre cet antigène.
Les adjuvants agissent selon 2 types d’actions
dans les préparations vaccinales. Le premier
favorise et prolonge la durée de l’interaction
entre l’antigène et le système immunitaire, par
exemple l’hydroxyde d’alumine.
Le second recrute et active les cellules de
l’immunité naturelle pour qu’elles induisent la
réponse adaptative.
 2-La Fusion
• l'animal est sacrifié et les cellules B sont isolées à
partir de la rate (2). Ne pouvant se multiplier mais
produisant les anticorps désirés, sont fusionnées avec
des myélomes (cellules cancéreuses, donc aptes à une
division cellulaire rapide et immortelles).
• Cette étape de fusion peut être effectuée en utilisant
l’ électroporation. Ces cellules sont ensuite mises
en culture.
• Les hybridomes ayant la propriété des cellules
cancéreuses, elles se multiplient rapidement et
indéfiniment.
 3-sélection et clonage
• La sélection des cellules fusionnées se fait avec
les composés chimiques
• Les cellules B non-fusionnées sont éliminées et
les hybridomes se développent en colonies
• Afin de favoriser la croissance de ces
hybridomes, plusieurs additifs peuvent être
ajoutés dans le milieu de culture ( FBS, facteur
de croissance, couche de cellules nourricières)
• Ces lignées d'hybridomes secrètent des
anticorps tous différents. Afin de sélectionner
notre anticorps d'intérêt, il faut d'abord isoler
chacun des clones.

• Une fois obtenu un clone d'hybridome

sécrétant un anticorps de spécificité voulue, il
sera caractérisé afin de connaître la classe des
chaînes d'immunoglobine, son affinité, ou
l'épitope reconnu
 Utilisation clinique des anticorps
monoclonaux
• Ils sont utilisé comme récatifs de diagnostic (la
détection de nombreux micro-organisme
pathogènes
• En thérapeutique