Aislamiento y

Purificación de la Enzima
de restricción EcoRI

Equipo: 2
Soriano Rivero Aranza Isabel
Muñoz Tecocoatzi Maria Fernanda
Olivares Retana Mariana
Bazan Perez Jessica Vianey

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2
 Características de la enzima
La composición de aminoácidos de Eco-RI es
Name: type-2 restriction enzyme EcoRI
de casi 20% de láminas plegadas con β , menos
RefSeq Selected Product:WP_001565219.1,
del 10% de hélices 3/10 y más del 50% de
277 amino acids
hélices α .
Taxonomic Group:enterobacteria
Assembly Accessions:43
Protein Accessions:38
CDS Regions:50
Total Rows:61
El peso molecular de Eco-RI es 29,135.17 Da
Punto isoeléctrico (pI) es 6.23.

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 Se ha demostrado que Eco-RI
Es una enzima de restricción bien conocida
restringe secuencias que difieren
que reconoce la secuencia simétrica de
ligeramente de la secuencia normal
hexanucleótido GAATTC en el ADN dúplex y
en soluciones de pH alto o
las corta
concentración iónica alta, lo que
proporciona un mayor uso de la
Se utilizan en la preparación de moléculas
recombinantes, y proporcionan un sistema proteína en ingeniería genética.
para el análisis de secuencias específicas de
interacciones ADN-proteína

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 ¿Cómo aislamos la proteína?
Las enzimas de restricción de la
Las ventajas de la cromatografía de
familia del tipo II pueden ser
afinidad son la velocidad de
purificados mediante procedimientos
purificación y, con frecuencia, la
cromatográficos. Después de que los
protección de las enzimas frente a la
extractos han sido liberados de los
desnaturalización durante el
ácidos nucleicos celulares se utiliza
fraccionamiento.
una matriz de intercambio iónico a un
pH casi neutro para la separación. En
esta etapa de la purificación, hay
ensayos rápidos que hacen posible
visualizar las fracciones que
contienen enzimas de restricción
obtenidos. 5
 Descongelar Cromatografía de Electroforesis en gel
muestra y suspender Hidroxiapatita por de SDS-PAGE.
en buffer de Fosfato lotes (Afinidad
de K. inespecifica)

Muestra 2 4

1 3

Primera Segunda
Cromatografía en cromatografía en
columna de columna de
fosfocelulosa fosfocelulosa
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 Bibliografía

● Chirikjian, JG (Ed.). (1981). Especificidades de secuencia relajada de la endonucleasa y metilasa

EcoRI: mecanismos, posibles aplicaciones prácticas y usos en la definición de mecanismos de
reconocimiento de proteínas y ácidos nucleicos. En Gene Amplification and Analysis (págs. 182-
185). Nueva York, NY: Elsevier North Holland, Inc.
● “Un procedimiento rápido para la purificación de la endonucleasa EcoRI” Consultado 07/09/2019
en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0006291X77916709?via%3Dihub
● “A Comparative Study on the Recovery of EcoRI Endonuclease”. Consultado en
https://pdfs.semanticscholar.org/b42c/7e45bfbe290c2d5a32497b9c3d3e4eb19342.pdf