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de biologia molecular
PROFA. ANA PAULA BARTH
O número de bases A
tem que ser igual ao de
T, enquanto o número
Relembrando... Pentose
de bases C será sempre
igual ao de G.
Dois anéis
interligados
Apenas um anel
Como a vida se perpetua ao longo do tempo?
Descreva o processo de replicação do DNA.
Descreva o processo de replicação do
DNA.
A produção de uma proteína.
Metodologias laboratoriais e moleculares
em genética
Métodos mais utilizados em Genética e que
possibilitam investigar a função de proteínas
individuais, bem como realizar análises de larga
escala em genomas
Técnicas de hibridização que permitem, por
exemplo, a identificação da expressão gênica do
genoma completo
Essas metodologias foram chamadas de tecnologia
do DNA recombinante, com as quais genes
específicos puderam ser isolados em quantidade,
modificados e reintroduzidos em células e até em
organismos.
Métodos de purificação de ácidos
nucleicos
A extração e purificação dos ácidos nucleicos são as
primeiras etapas a serem realizadas
independentemente do que se deseja analisar
A maioria das técnicas os extrai, ou separa do
restante da célula, tanto DNA quanto RNA, e,
dependendo do objetivo da análise, eles devem ser
separados entre si.
◦ A origem do material genético pode ser de
amostras de sangue, bulbo capilar, entre outros
Extração do DNA – 5 ETAPAS
1) Compreende a lise celular, ou seja, o rompimento da célula por
métodos químicos ou físicos para acessar o DNA.
2) Os lipídios, especialmente os de membrana, são removidos com
o uso de detergentes, como SDS, e por centrifugação
3) A remoção das proteínas do extrato celular é feita a partir de
desnaturação proteica, por ação de proteases, e separação por
centrifugação e/ou filtração.
4) Os ácidos nucleicos de interesse são extraídos com fenol,
precipitados por ultracentrifugação ou métodos cromatográficos
(troca iônica, filtração em gel), agregados e
5) Diluídos normalmente em etanol.
Extração do DNA
Reação em cadeia da polimerase (PCR)
o Permite a amplificação de segmentos da molécula
de DNA.
Componentes da análise:
◦ DNA com uma sequência-alvo para ser
amplificada,
◦ Uma DNApolimerase termoestável,
◦ dois oligonucleotídeos iniciadores (primers)
◦ desoxirribonucleotídeos conhecidos como dNTPs,
◦ tampão de reação e concentração adequada de
cloreto de magnésio (MgCl2).
Cada ciclo
dobram as
quantidades de
fragmentos,
então 25 ciclos
125
Eletroforese
A separação das moléculas de DNA e de RNA é
feita pela técnica de eletroforese em gel, em que
as moléculas lineares de DNA são separadas de
acordo com seu tamanho
DNA são submetidas a um campo elétrico, por
uma matriz de gel que é semelhante a uma
gelatina, porém porosa.
Quando o DNA é submetido a um campo
elétrico, suas moléculas que têm carga negativa
migram por meio do gel em direção ao polo
positivo.
Eletroforese
Essas moléculas de DNA são flexíveis e ocupam um
volume efetivo na matriz do gel, que atua como uma
peneira por onde passam tais moléculas.
Moléculas grandes de DNA possuem mais dificuldade de
passar através dos poros do gel e, por isso, migram mais
lentamente do que as moléculas menores de DNA.
Após o período de migração ou corrida do polo negativo
para o polo positivo pelo gel, as moléculas de tamanho
diferentes podem ser separadas, pois percorrem
diferentes distâncias.
Eletroforese
Para analisar os
resultados do
experimento de
eletroforese em
gel é preciso corar
o DNA no próprio
gel, a fim de que o
torne visível
Eletroforese
Atualmente, os laboratórios
utilizam corantes não
mutagênicos que coram o DNA
de verde ou azul, e alguns
deles não necessitam de luz
UV para serem visualizados; já
o brometo de etídio é um
poderoso e perigoso
mutagênico e sua radiação
pode causar queimaduras
severas.
Proteômica
O conjunto proteínas expressas por um genoma é chamado de proteoma,
Identificação completa de proteínas produzidas por uma célula ou tecido
que é conhecida como proteômica