MÉTODOS DE ANÁLISIS

DE PROTEÍNAS
 CARACTERÍSTICAS

• Proteínas x célula : 10.000

• Separación x características físicas o

químicas

• Entre + diferencias, + fácil separarlas

 CENTRIFUGACIÓN

• Principio: Dos proteínas con diferentes

masas o δ se precipitan al fondo del tubo
a velocidades diferentes.
– Masa : peso en gramos
– δ : gr / litro (1.37 g/m3)
– 150.000 rpm
– K de sedimentación: Svedbergs 1s= 10-13 seg
 TIPOS

• Diferencial: Proteínas vs. detritos celulares

• Velocidad zonal: gradientes de

concentración, usualmente glucosa
 ELECTROFORÉSIS

• Principio: separación con base en tamaño

por movilidad en campo eléctrico.
 TIPOS

• En gel de poliacrilamida (SDS): para

moléculas con cargas = y diferente
tamaño
Gel: polimerización de acrilamida con
cadenas de poliacrilamida, la cantidad
define tamaño de poros.
• Bidimensional: complementa separación x
tamaños con separación x cargas

I.E.F seguida de SDS-PAGE

 CROMATOGRAFÍA

• Principio: proteínas se ligan y separan de

una matriz sólida, la naturaleza de la
matriz define la interacción.
 TIPOS

• Filtración en gel: perlas porosas de

poliacrilamida, dextrán o agarosa. Se
eluye con volumen de líquido
inversamente proporcional a la cantidad
de proteínas pequeñas en la mezcla
 TIPOS

• Intercambio iónico: perlas con carga

positiva (NH3+) a pH 7. Se eluye con
aumento en concentración de sales NaCl
o KCl.
 TIPOS

• Afinidad: perlas con ligandos adheridos

covalentemente. Elución con exceso de
ligando, cambio de concentración de sales
o pH.
 CONFIGURACIÓN 3D

• Cristalografía de rayos X: Max Perutz y

John Kendrew en 1.952.
• Proteína encerrada en cristales, luz de
0.1-0.2nm, los átomos desvían la luz y se
graba en placa fotográfica.
• Se modifica la proteína para determinar
estructura.