UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES

Facultad de Medicina Humana

CATEDRÁTICO:
Mg. Lorenzo Castro Germana

CÁTEDRA:
Microbiología

INTEGRANTES:
 Aliaga Garcia, Leydi
 Julcapari Martinez, Hellen
 Marchena Martinez, Tisziana
 Montes Ramos, Nickol
 Nájera Barzola, Lisset
 Frente a un cuadro clínico
DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO sospechoso de micosis

ESTUDIO SUSCETIBILIDAD SCEDOSPORIUM

ANTIFÚNGICA “INVITRO”

MÉTODO GENOTÍPICO
INFORMACIÓN
EPIDEMIOLÓGICA
Diferenciación
intraespecies MÉTODO FENÓTIPICO

 Sospecha clínica
 Toma y transporte de muestra s clínicas
 EXÁMEN MICOLÓGICO

ETAPAS
Examen microscópico directo
 Cultivo----dentificación
 Inmunodiagnostico
 Histopatología
 PREPARACÍÓN DEL PACIENTE
Suspender los medicamentos sistémicos o tópicos con
acción antimicótica 15 días antes de la toma de la
RECOMENDACIÓN AL PACIENTE
muestra .
Cinco días antes debe evitarse la aplicación de cremas
o polvos sobre la piel a estudiar.
En el caso de tomar material de uñas se
recomienda no cortarlas en la semana
anterior a la obtención ni usar esmalte.

Si la muestra que se va a tomar es de los pies se

debe recomendar al paciente el uso de
calzado cerrado. Estas medidas aumentan el porcentaje de exámenes
directos y cultivos positivos, reducen la contaminación
y evitan partículas que impiden la visualización de las
estructuras
MORALES RESTREPO, Nathalie y CARDONA-CASTRO, Nora. Métodos de diagnóstico en micología. CES Med. [online]. 2018, vol.32, n.1 [citado 2019-06-22], pp.41-52. Disponible en:
<http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-87052018000100041&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0120-8705. http://dx.doi.org/10.21615/cesmedicina.32.1.5.
 TOMA DE MUESTRA
Eliminar bacterias,
Antes de realizar la recogida para
exudación o residuos
de la muestra deben
de tratamientos
limpiarse con etanol al 70 %
tópicos los que
la piel, pelos o uñas
dificultan el examen
afectados.
directo y el cultivo

Tomar la muestra utilizando contenedores estériles y enviarla antes de dos horas al laboratorio
1 y proceder a estudiarlas rápidamente.

Cuando se sospechan dermatofitos la muestra debe recogerse antes de iniciar el tratamiento y

2 siempre de la parte activa de la lesión.

3 Las muestras de lesiones abscedadas deben ser aspiradas con jeringa y colocadas en tubo
estéril.
4 La toma de muestra debe realizarse de acuerdo al sitio y tipo de lesión
 SUPERFICIALES
Hay una
EN CASO DE UNA técnica alternativa
DESCAMACIÓN
consiste La aplicación de la zona
pegante de una cinta sobre
papel sello la zona afectada, se
presiona sobre la piel, se
despega y se coloca sobre
un portaobjetos
Usado en

diagnóstico de la
pitiriasis
versicolor.

MORALES RESTREPO, Nathalie y CARDONA-CASTRO, Nora. Métodos de diagnóstico en micología. CES Med. [online]. 2018, vol.32, n.1 [citado 2019-06-22], pp.41-52. Disponible en:
<http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-87052018000100041&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0120-8705. http://dx.doi.org/10.21615/cesmedicina.32.1.5.
EN EL PELO
depende del tipo de
lesión

En caso de piedra blanco o negra se localiza

en la vaina del pelo, por lo que debe cortarse la
porción supra folicular de los pelos afectados

En los casos de o del cuero cabelludo los

pelos deben ser arrancados con la raíz intacta

donde

evidenciará el ataque ectotrix o

Trichophyton endotrix de la vaina del pelo

En la tiña favosa la muestra debe ser tomada

con asa para las lesiones exudativas foliculares
y con cucharilla para las escútulas
 EN La muestra se toma
LAS depende del sitio de del material más
EN LA
ONICOMICOSIS lesión
PARONIQUIA
cercano a la cutícula,
raspando con el
Si es en el borde distal y lateral CRÓNICA bisturí en el surco
subungueal periungueal y con
un aplicador estéril
se obtiene el material
Se debe
exudativo.

 tomarse del material

subungueal
 zona más proximal de la
lámina ungueal

Esta ultima es la más

fiable por la menor
probabilidad de
contaminación, así mismo
presenta elementos fúngicos
MORALES RESTREPO, Nathalie y CARDONA-CASTRO, Nora. Métodos de diagnóstico en micología. CES Med. [online]. 2018, vol.32, n.1 [citado 2019-06-22], pp.41-52. Disponible en:
viables
<http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-87052018000100041&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0120-8705. http://dx.doi.org/10.21615/cesmedicina.32.1.5.
 SUBCUTANE
AS

 Escarificaciones
EN LAS  Biopsia quirurgíca
CROMOMICOSIS
 Frasco con solución fisiologica.
Transporte:
 Otro con formol.

EN LAS  Raspado
ESPOSROTRICOSIS  Pus
 Biopsia quirurgico
CUTÁNEA

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam
Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.
 • Aumento de volumen y deformidad del
miembro afectado.
EN LA MICETOMA TRIADA • Presencia de fístulas.
• Emisión de granos “ Formación in vivo de
colonias de los agentes causales”.

Biopsia obtención de granos

quirurgica

Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en

Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.
 PROFUNDAS O PARA INVESTIGACION DE KOCH
SISTEMICAS y/u HONGOS: el paciente deberá tomar
3 muestras de esputo durante 3 dias
 ESPUTO consecutivos (una por dia), siguiendo los
 Lavado broncoalveolar pasos de la indicación anterior.
 Sangre
HISTOPLAMOSIS  Biopsia pulmonar PARA INVESTIGACION
GERMENES COMUNES: deberá
DE
 Exudados de lesiones mucosas y cutáneas
tomar solamente 1 muestra.
 Material de ganglios linfáticos,
 LCR y otros líquidos corporales

MATERIAL:
• 3 frascos estériles para investigación de Koch o búsqueda de hongos
• 1 frasco estéril para investigación de gérmenes comunes

 El paciente expectorará en el frasco estéril, después de un esfuerzo de tos (no deberá recolectar saliva).
Se sugiere la muestra por la mañana antes que el paciente se levante.
 Cerrar bien el frasco y enviarlo inmediatamente al laboratorio, si no fuese posible deberá refrigerarse.

IMPORTANTE:

1. El frasco estéril deberá abrirse solamente en el momento de tomar la muestra para evitar su contaminación.
2. No deberá suspender ninguna medicación sin consultar con el médico.
 OPORTUNISTAS

Se usa para diagnosticar infecciones más graves y, a

 Orina veces, para diagnosticar una infección vaginal por
 Sangre hongos
CANDIDIASIS  secreciones
INVASORAS vaginales Se usa para detectar la presencia de hongos en la sangre.
 Secreción Los análisis de sangre a menudo se usan para
respiratoria diagnosticar infecciones por hongos más graves.
 LCR.
  Escamas
 detrito subungueal
 esputos
ASPERGILOSIS  LAVADO BRONCOALVEOLAR
 Material purulento o necrótico
 Biopsias
 Hemocultivos (raramente positivos) La técnica

Consiste en la instilación de
suero salino en bolos de 20-
50 ml hasta el volumen
total deseado a través del Después de cada
canal interno del instilación, se aspira
broncofibroscopio, tras con la misma jeringa
encajarlo en el bronquio con la presión
elegido. adecuada para no
colapsar las paredes
bronquiales.
Flandes Aldeyturriaga. El lavado broncoalveolar: un procedimiento sencillo que aporta mucha información.Revista de patologia Respiratoria. [online]. 2011, vol.14,
n.2 [citado 2019-06-22], pp.41-65. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista-revista-patologia-respiratoria-318-articulo-el-lavado-broncoalveolar-un-
procedimiento-X1576989511206784
EXÁMENES MICROSCÓPICOS DIRECTOS
Se efectúan en fresco, con sustancias que favorecen la disgregación de la queratina y facilitan la visualización de
estructuras fúngicas.

 Se usa en muestras de tejidos queratinizados (escamas de piel,

polvo de uñas, pelos)
 Una o dos gotas de solución de KOH al 10% sobre la muestra

Solución acuosa
de KOH al 10%  Al 10 %: de preferencia
Concentración

 Al 20% o 30%:
Hidróxido de potasio al 10%: es queratolítico, • para casos con mayor hiperqueratosis,
(digiere el material proteico), sin afectar la contenido de fibrina y lesiones verrugosas
morfología de los elementos fúngicos . • mayor degradación de queratina
KOH-Glicerol: previene la degradación de los • cuidado porque las estructuras micológicas
elementos fúngicos, evita la deshidratación de la también sufrirán la degradación.
preparación.
KOH-Dimetilsulfóxido (DMS): acelera la
clarificación.
 AZUL DE
METILENO
• Se prepara añadiendo una parte de tinta a
KOH- Colorante dos partes de la solución de KOH
• Para mejorar la visualización de los hongos
TINTA AZUL-NEGRA
QUINK PARKER

 Se usa para dar contraste a estas estructuras

fúngicas
Lugol  Conserva las estructuras por unos cuantos minutos

 Granos de actinomicetomas (Nocardia sp.,

Visualización Actinomadura madurae)
 Eumicetomas (de granos blancos)
 Reactivos  Aclarante DMS al 10%
 Colorante negro de clorazol

Negro de  Permite observar mejor las estructuras

clorazol micóticas (filamentos, seudohifas,
levaduras y otros)

VENTAJAS  Tiñe de color verde-claro a verde-

oscuro(hace resaltar más los elementos
micóticos)

 Muy útil para observadores inexpertos

TINCIONES
Las tinciones a utilizar deben preservar la integridad de las estructuras fúngicas con una alta calidad y
contraste. Para la identificación de hongos de interés clínico, pero para poder diferenciar a los hongos se
necesitan cultivos.
 Solución de cristal violeta
Reactivos  Solución de yodo (lugol)
 Contra colorante Safranina

Tinción Gram  Blastoconidias y pseudomicelios

Para de Cándida spp, Malassezia spp y
visualizar Cryptococcus spp (Gram +)
Habitualmente, los hongos se  Granos de actinomicetos
comportan como Gram +

Poco sensible
DESVENTAJAS
Poco específica, se debe
confirmar por cultivo
  Facilita la observación de hongos
intracelulares (Histoplasma capsulatum)
Tinción de
Giemsa, tinción
de Wright En los extendidos o frotis de
médula ósea, sangre y pus

 Solución de fucsina fenicada

Reactivos  Solución de ácido sulfúrico
 Contra colorante azul de metileno
Ziehl-Neelsen
(ZN)  Nocardia spp (ácido-alcohol
Para
resistentes parciales) de otros
diferenciar actinomicetos spp aerobios
Tinciones de rutina para realizar la histopatología  Permite la apreciación de
estructuras según su contenido
de polisacáridos

Ácido peryódico Principales  Permite distinguir hifas y

de Schiff (PAS) usos blastoconidias del tejido.

Las estructuras fúngicas se  También permite observar

tiñen de morado claro con la estructuras fúngicas intracelulares
tinción de PAS
 Tejido junto al hongo se observa
VENTAJA
mejor

 No es posible diferenciar los

DESVENTAJA dermatofitos y otros mohos

Aspergillus fumigatus (teñido con PAS) en un

paciente con enfermedad granulomatosa crónica.
 Oxida las paredes celulares de los
Ácido crómico
hongos (ricas en polisacáridos)
Metenamina de plata
(Gomori-Grocott)
se convierten en aldehídos
Nitrato-plata

los hongos se tiñen de café a

• De elección para el negro
diagnóstico de la
neumocistosis, a partir de
LBA (lavado brocoalveolar)
• Útil en los casos de
paracoccidioidomicosis y
mucormicosis.
 La melanina reduce el Nitrato de
Fontana-Masson Nitrato de plata
plata, esto da una coloración negra

 Útil para detectar pigmento

melánico en la pared de los
hongos como los dematiáceos
(como en feohifomicosis y
eumicetoma ), C. neoformans .
  Estructuras micóticas que presentan
Mucicarmín de Para cápsulas polisacarídicas (Cryptococcus
visualizar neoformans, C. gattii y Rhodotorula spp)
Meyer
En el material biológico
Colorea la cápsula LCR, otros fluidos, biopsias.
de rojo rosáceo.

La cápsula aparece como un

Los polisacáridos capsulares
halo claro y nítido en torno a
Tinta china rechazan la tinta china
una levadura redonda
(tinción negativa)
Para
Cryptococcus neoformans
Suspensión de visualizar
partículas de
carbono coloidal
 En los medios de cultivo micológicos, los
El objetivo fundamental de la utilización
antimicrobianos se utilizan tanto para
de los medios de cultivo es optimizar el
inhibir el crecimiento bacteriano como el
crecimiento de los microorganismos.
de otros hongos ambientales.

Agar glucosado de
Característico y clásico
Sabouraud (AGS)
Generales
Descripción de la
Utilizado morfología de la mayoría
de hongos
 Para la recuperación de la
Utilizado Micosis sistémicas endémicas fase levaduriforme

Se encuentra Agar cerebro-corazón con sangre (BHI)

Enriquecidos
Ejemplos Histoplasmosis y Blastomicosis

Cloranfenicol
Para inhibir microrganismos no
deseados Gentamicina

Selectivos Utilizado Se utiliza como agentes Penicilina

selectivos los antibacterianos
Estreptomicina

Micosis sistémicas
endémicas Cutáneas
Inhibidor de Muestras
Cicloheximida
hongos Respiratorias
 Identificación del hongo
Utilizado basada en la apariencia
del cultivo.
Diferenciales
Se le adhiere Sustancias cromógenas
componentes
Indicadores de pH

Contienen Ácido Destinado a aislar un C. neoformans

componentes cafeico agente concreto

Favorecer la
identificación de ciertas El medio de Czapeck
Selectivos especies
Agar
patatazanahoria
Obtener estructuras de
reproducción sexual
Agar acetato
 Agar glucosado de
Agar Czapek Dox Agar Dixon Modificado Saboraud modificado por Agar Urea de Christensen
Emmons

• Utilizado en cultivo de • Utilizado en el cultivo • Utilizado para • Utilizado para algunos

hongos saprofítos. de Malassezia. aislamiento, dermatofitos.
espurolación y
conservación de • Especialmente usados para
• Frecuentemente • Puede modificarse T. Rubrum y T.
hongos.
utilizado en Aspergillus añadiendo Mentagrophytes.
spp. Y Penicillum spp. Cloranfenicol y
cicloheximida. • Su pH y glucosa
• También se utiliza para
favorecen la
• Útil para la formación algunas levaduras como C.
esporulación. neoformans.
de clamidoesporas en
la especie Candida
Albicans. • Color rosado es urea
positiva.

• Color amarillo urea

negativa.
 Agar de patata glucosa Agar harina de maíz
(APG) con/sin Tween 80

Utilizado Utilizada en el cultivo y

diferenciación de especies de
Candida.
Características
morfológicas
Se basa en las características
Estimulación de miceliales.
Estimulación de la
formación de conidias producción de
pigmentos
Preparación de
inóculos de hongos El Tween 80 se incorpora para
miceliales demostrar la formación de
clamidoconidias.
Rojo en Trichosporum rubrum
Se añade glucosa para
Rosa salmón en Microsporum diferenciar T. rubrum y T.
audouinii mentagrophytes por su
pigmento.
Amarillo en Microsporum canis
 Se utiliza como
medio enriquecido Dermatophyte test medium
para el C.
neoformas

La cicloheximida que
facilita el aislamiento Se utiliza para EN
de Histoplasma
capsulatum y
muestras estériles
Blastomyces Agar infusión de LCR
dermatitidis
de Utilizado
aislamiento de
Muestras
contaminadas
cerebro corazón dermatofitos

Se pueden añadir Mantiene la fase

antibacterianos de levaduriforme Producen
(cloranfenicol y/o de micosis alcalinización
gentamicina). sistémica (amarillo a rojo)
Se puede
agregar
cicloheximida.
 PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
Estas técnicas se basan en la detección de anticuerpos (Acs)
contra el hongo producidos por el hospedero o de antígenos
específicos del microorganismo.

PRUEBA DE Es una prueba inmunológica que busca detectar y medir la

Fijación de presencia de Anticuerpos fijadores de complemento
específicos contra el hongo, presentes en el suero o en el
complemento líquido cefalorraquídeo de los individuos infectados.

LA FORMA DE MICELIO Los títulos de Acs entre 1:8 y 1: 16

Para realizar esta son considerados sugestivos de un
prueba se utilizan posible contacto con el hongo;
antígenos obtenidos mientras que títulos de Acs mayores
LA LEVADURA a 1:32 se consideran indicativos de
una histoplasmosis activa.
 PRUEBAS INMUNOLÓGICAS
Prueba de Permite identificar dos bandas de precipitado, denominadas
Inmunodifusión H y M, que corresponden al reconocimiento de Acs
específicos contra tales antígenos presentes en el suero de
en gel-agar pacientes con histoplasmosis.

ANTÍGENO H ANTÍGENO M

El antígeno H tiene homología con

El antígeno M tiene homología con una
una β-glucosidasa y; se detecta
catalasa y se identifica en el suero de
hasta en el 10% de los casos y
aproximadamente 80% de los pacientes
cuando está presente indica una
infección activa.

La ID no permite diferenciar una infección reciente de una

pasada, dado que los Acs contra este antígeno pueden persistir
por meses y, hasta años, después de la primo-infección.
COMPARACIÓN DE AMBAS PRUEBAS

LA INMUNODIFUSIÓN
ES MÁS ESPECÍFICO

1) Requerimiento de dos a seis semanas para que un individuo produzca

Ambas técnicas Acs después de haber estado expuesto al hongo.
presentan algunas
limitaciones, entre 2) En pacientes inmunosuprimidos, especialmente aquellos con SIDA, se
las que se presentan niveles de sensibilidad muy bajos debido a la disminución en
mencionan: la producción de Acs .

3) Resultados positivos pueden deberse a infecciones anteriores y

sugerir, incorrectamente, una histoplasmosis activa.
 Con esta técnica se ha logrado identificar la localización de los
Inmunoelectroforesis: antígenos específicos de la mayoría de los hongos patógenos.

Es un procedimiento en el cual la Es precedida Por la separación electroforética de diferentes

difusión de los reactivos inmunológicos componentes proteicos del preparado antigénico.

Aglutinación con Es una prueba sencilla y rápida, que se basa en la detección de

partículas de Látex antígenos circulantes, utilizando partículas de látex
sensibilizadas con anticuerpos contra dichos antígenos.
(A.L.):
En esta prueba se usa el antígeno capsular soluble del hongo,
presente en suero, L.C.R. u orina y es aglutinado por las partículas
de látex que están recubiertas con anticuerpos antipolisacáridos

POSITIVO: NEGATIVO:

El L.C.R. diluido y sin diluir mostraron signos de Ni el L.C.R. diluido como el sin diluir mostraron
aglutinación con el suero. aglutinamiento con el suero.
PRUEBAS ESPECIALES
LUZ DE WOOD
Permite observar
LAMPARA ULTRAVIOLETA fluorescencia de algunas
(UV 435NM) estructuras micoticas o sus
metabolismo
TIÑAS MICROSPORICAS DE LA CABEZA
• Generan diversos tipos de
fluorescencia
PITIRIASIS VERSICOLOR
• Fluorescencia amarillo-verdosa
ERITRASMA
• Fluorescencia rojo- coral

C. albicans Emite fluorescencia

PERMITE DIFERENCIAR
C. dubliniensis No emite fluorescencia
DERMATOSCOPIA
Es una técnica no invasiva, sencilla y muy practica para observar y limitar
algunas micosis.
Observación de mancha
TIÑA NEGRA hipercromica, con pigmento
no melanocítico

Observación de pelos
TIÑAS SECAS parasitados, que son cortos,
DE LA CABEZA enroscados, en forma de
“coma”

Observación de los limites de

ONICOMICOSIS parasitación del hongo y son
particularmente útiles en los casos
de melanoniquia.

Sirve para distinguir los de nevos o hematomas subungueales

INOCULACIÓN EN ANIMALES
 Comprobación del dimorfismo de algunos hongos
patógenos primarios
 estudio del comportamiento de algunos hongos oportunistas

Dermatofitosis, pitiriasis versicolor, dermatitis

ESTUDIO DE seborreica, tiña negra, esporotricosis,
DIVERSAS MICOSIS cromoblastomicosis, actinomicetoma,
histoplasmosis, coccidioidomicosis, blastomicosis,
paracoccidioidomicosis, candidosis, criptococosis y
aspergilosis.
Otros aspectos importantes a considerar son la vía de
inoculación; si son necesarios, se usaran
inmunosupresores y adyuvantes, de los cuales los mas
utilizados son los de tipo completo e incompleto de
Freund; se debe considerar además la pureza de las cepas
de microorganismos, la cantidad del inoculo y los
esquemas de inoculación.