Fitohemaglutinina

(Lectinas)
Robinson Barreto Vega
Karla Fernanda Collazos Londoño
Toxicología Alimentaria
Julio 2019
Definición. lectina deriva del
latín legere:
escoger, elegir

Las Lectinas son

proteínas que se
unen a azúcares
con una elevada
especificidad
para aglutinarse
Antecedentes.
• Hacia finales del siglo XIX, se
encontró la presencia en la
naturaleza de proteínas que
tenían la capacidad de aglutinar
eritrocitos. Estas proteínas fueron
llamadas hemaglutininas o
fitohemaglutininas, porque fueron
encontradas naturalmente en
extractos de plantas
• En 1954, Boyd fue el primero en
plantear el término lectina (del latín
legere=escoger/elegir), al observar
que algunas aglutininas obtenidas
de semillas de plantas podían
reconocer a un grupo sanguíneo
específico y aglutinarlo
• En la década de 1960, Peter C. Nowel
encontró que la lectina obtenida del
frijol rojo (Phaseolus vulgaris) conocida
con el nombre de Fitohemaglutinina al
igual que otras lectinas como la
obtenida del frijol Canavalia
El primer informe sobre
lectinas fue en 1888 por
StillmarkS. La semilla del
ricino (Ricinus
communis);
extremadamente tóxica,
una proteína capaz de
aglutinar la sangre.
DL50 de 0.05 mg/Kg en
ratón por vía
intraperitoneal.
Importancia principal radica
en sus propiedades
biológicas, en la aglutinación
de eritrocitos y otras células. Y
en la inducción de mitosis y
efectos citotóxicos sobre los
linfocitos y aglutinación de
virus.
 Anguila Electrophorus Orígenes de las
electricus
Lectinas.
 Pollos (músculo de
embrión) Lectinas de
 Crustáceos origen animal.
 almeja Saxidomus como en vertebrados como el
giganteus cerdo principalmente, que
 salmón Salmo salar están contenidas en los
órganos sexuales.
 trucha arco iris Salmo
iride
Lectinas de origen microbianos.

• Se localizan en la superficie
de microorganismos
Streptococcus
• bacterias, virus, hongos y pyogenes,
parásitos. Fusobacterium
• Son denominados nucleatum
adhesinas Actinomyces viscosus
• debido a que accionan Escherichia coli,
como patógenos de estos Vibrio choleraí,
microorganismos al actuar Klebsiella pneumoniaí,
y colonizar mucosas Salmonella
typhimurium
produciendo lesiones
tisulares.
 Lectinas de origen vegetal.

 Lalectina de la  Laingesta de estas

lenteja (Lens toxinas inhiben el
culinaria) transporte y
absorción de
nutrientes, además
provoca la muertes
de las células del
epitelio intestinal
 FITOHEMATOGLUTININA.
 Es una lectina ampliamente distribuida en
amplia variedad de plantas y en diferente
parte de ellas.
 Se conocen por su propiedad de aglutinar los
eritrocitos de la sangre
 La primera descripción de una hemaglutinina
fue utilizando semillas de ricino
 Posterior mente se detecto que esta se podía
inactivar térmicamente
HERRAMIENTAS BIOQUÌMICAS
 biològica celular
 gènetica
 inmunologìa
 biomedicina
 diagnòstico y terapia en càncer
 Propiedades biológicas
 *Capacidad HEMOAGLUTINANTE de linfocitos,
eritrocitos, espermatozoides, plaquetas, bacterias
y células tumorales
 BIOMARCADORES EN LA DETECCIÒN TEMPRANA
DEL CANCER
 AGENTES ANTI CANCERìGENOS
 Previene la metástasis
 Inducción de mitosis en el linfocito y efectos
citòxicos sobre los linfocitos
 Utilización de LECTINAS para la inmunización
contra virus productores de INMUNODEFICIENCIA
y algunos tumores
 Propiedades fisiológicas
 Defensa mecánica contra el ataque de
microorganismos
 Almacenamiento de proteínas
 Transporte de carbohidratos
 Estimulación mitogènica
 Reconocimiento de las bacterias fijadoras
de nitrógeno del gènero Rhizobium
Algunas Lectinas
Lectina del muèrdago europeo
 Inmunomodulador
 Induce a la apoptosis de células
cancerígenas, èsta lectina inhibe la
síntesis de ADN, ARN y células malignas,
más no en las normales.
Lectina del muérdago de Corea
 Efectos antitumorales sobre melanoma,
carnoma de colon y linfoma.
 Efecto profilàctico de metàstasis
pulmonar inducida
 Galectina
 Juegan un importante papel en diferentes
procesos relacionados con la respuesta
inmunitaria
 Lectina de la semilla de
Bauhinia variegata,
habichuela, caraota.
 Inhibe la proliferaciòn de cèlulas
cancerìgenas de mama y de hepatoma.
 Inhibe la actividad de la transcriptasa
inversa del VIH-1.
 Lectina del frijol
tèpari(Phaseolus acutifolius)
 Efectocitotòxico diferencial sobre las
cèlulas normales y cancerìgenas.
 La abrina es
una toxoalbúmina muy
tóxica
 Actividad antiprolifera
selectiva en varias líneas
celulares sin presentar
ningún efecto citotóxico
sobre células normales

Lectina de Abrus precatorius

 BanLec
 lectina de los plátanos
 Colectinas
 Son un grupo de moléculas proteicas que
juegan un importante papel en el sistema
inmune innato de los animales.
Pertenecen al grupo de las lectinas y
actúan sobre agentes microbianos,
uniéndose a determinados azúcares que
se encuentran en la superficie
de bacterias y virus, favoreciendo
su fagocitosis y destrucción.
Lectina Concanavalina A
 Efecto
antiproliferativo sobre cèlulas
cancerìgenas
 Lectina de las semillas de
Phaseolus vulgaris
 Efectos
antiproliferativos sobre células de
Cáncer de Hígado y de
màma,dependiendo de la dosis usada
Lectina Typhonium divaricatum

 Actividad
antiproliferativa
de células
cancerígenas
Lectina de las
semillas de la
Efecto inhibidor
alcaparra

sobre el VIH-1-
(Capparis spinosa) Induce apoptosis
de lpineas células
cancerígenas de
hígado y màma.
 Lectina
purificada a
partir de los
 Actividad
rizomas de
antiproliferativa in
vitro en líneas
(Aspidistra
celulares elatior Blume)
cancerígenas
 Riproximina
 es una sustancia que pertenece a la
familia de las proteínas inactivadoras de
ribosomas bloqueando la síntesis
proteica, lo cual causa la muerte celular
o apoptosis
 fue descubierta en Tanzania
Algunas Lectinas como la ricina y el
guisante del rosario son potentes
venenos.
 Síntomas.
 Intensa inflamación de la mucosa
intestinal
 Destrucción del epitelio
 Edema
 Hemorragia del tejido linfático
 Nauseas y vomito
 Como se desnaturalizan
 Laslectinas, por su carácter proteico, se
desnaturalizan al aplicar calor húmedo,
perdiendo su efecto tóxico en los
alimentos así cocinados.
 Algunas aplicaciones
 Esclerosis
 Rinitis alèrgica
 Control biològico de nematodes fitopatògenos
 Tratamiento de tumores del tracto digestivo
 Inhiben el desarrollo de cèlulas tumorales
 LECTINAS COMO INMUNOTOXINAS PARA TRATAMIENTO
DEL CÀNCER
 Detección de transformaciones malignas en las células
 Sus propiedades mitogénicas permiten la realización de
estudios en base a la proliferación de linfocitos, tales
como: evaluación de producción de citoquinas,
caracterización de algunos aspectos relacionados con
la respuesta inmune y fenómenos asociados con ellas
como la inmunosupresión.
 Interacción, susceptibilidad y resistencia entre virus de
inmunodeficiencia (VIH) y el de la hepatitis B
Gracias
 Vicia faba agglutinin, the lectin present
in broad beans, stimulates diVerentiation
of undiVerentiated colon cancer cells

M Jordinson, I El-Hariry, D Calnan, J Calam, M Pignatell

División de Ciencia investigativa, Colegio Imperial de

Tecnología científica, y medicina, Hospital Hammersmith,
Londres
Antecedentes:
 las lectinas dietéticas pueden alterar La
proliferación de células colónicas. La
diferenciación está regulada por
moléculas de adhesión. que, al estar
glicosilados, son dianas para
encuadernación de lectina.
Objetivos:
 examinar los efectos de la dieta. lectinas
sobre diferenciación, adherencia y
Proliferación de células de cáncer
colorrectal.
Métodos:
se evaluó la diferenciación en Geles
tridimensionales, adhesión por ensayo de
agregación y proliferación.
Incorporación de timidina. El papel del
Molécula de adhesión de células epiteliales
(epCAM) se estudió utilizando un específico
Anticuerpos monoclonales en estudios de
bloqueo y Western blots. Las líneas celulares de
cáncer de colon humano LS174T, SW1222 y
HT29 fueron estudiados.
 Son abundantes en la dieta, resisten la digestión,
permanecen activos en el colon y, en particular,
afectan la función gastrointestinal.

El cáncer colorrectal es la segunda causa más
común de muerte por cáncer en Gran Bretaña
y, por lo tanto, se están buscando factores que
puedan prevenirlo o tratarlo. Las lectinas son
proteínas vegetales que se unen a motivos
específicos de carbohidratos.

 Las lectinas dietéticas pueden alterar la

proliferación de células colónicas. La
diferenciación está regulada por moléculas de
adhesión que, al estar glicosiladas, son dianas
para la unión a la lectina.
materiales y métodos
 materiales y métodos Todas las lectinas y productos
químicos fueron comprados de Sigma Chemical Co
(Dorset, Reino Unido) SBA, PNA, ABL, VFA y WGA
fueron probados. Adenocarcinoma colorrectal
líneas celulares derivadas LS174T, SW1222, y HT29 se
mantuvieron en Dulbecco modificado.
 Medio de águila (DMEM) que contiene 10% fetal
suero de ternera (FCS) a los 37 ° C en 90% O 2 y 10%
CO 2. Los anticuerpos monoclonales AUA1 a
epCAM. y PR3B10 a CEA fueron amablemente
donados por Sir Walter Bodmer. Anticuerpo HECD-1
a E cadherin fue amablemente donado por M.
Takeichi (Kyoto, Japón)
ADHESION CELULAR
 Las células confluentes se separaron con 2 mM. EDTA,
lavado en DMEM, y suspendido en DMEM / 0,8% FCS.
Células (5 × 10 4 celulas / ml) se dejaron agregar durante
una hora a las 37 ° do en presencia de lectinas (10 µg /
ml) en un agitador giratorio; las células individuales
restantes eran contado utilizando un contador de
Coulter (Coulter Electronics, Inc.). Los resultados fueron
divididos por Recuento de una sola célula inicial para
dar una agregación índice. En algunos estudios los
azúcares hapénicos (50 Se añadieron mM), en otros
monoclonales. Se añadieron anticuerpos (50 µg / ml) a
las células 30. Minutos antes de iniciar el ensayo, y en
otros, el DMEM se reemplazó con calcio libre. PBS. El
grado de inhibición se expresó como porcentaje de
inhibición del cambio en el índice de agregación
producido por la lectina.
 BLOTTES OCCIDENTALES
 Las células se cultivaron en presencia de PNA, SBA, ABL,
WGA y VFA (10 µg / ml) durante 48 horas En platos de
140 mm.
 Las células se lavaron en solución salina tamponada con
fosfato enfriada con hielo (PBS) que contenía los
azúcares haptenicos y se rasparon en 1 ml de tampón
de muestra (dodecilsulfato de sodio al 2% (SDS), glicerol
al 10%, 5% de 2-mercaptoetanol, 60 mM Tris-HCl, pH 6.8),
y calor durante 10 minutos.
Las muestras se clarificaron por centrifugación a 13 000 g
durante 10 minutos a 4 ° C, y la concentración de
proteína total se cuantificó utilizando el kit de ensayo de
proteínas Bio-rad.
 Luego se cargaron cantidades iguales de proteína (30
μg) en gel de poliacrilamida al 8%
 Las proteínas resueltas se transfirieron mediante
electrotransferencia a membranas de nitrocelulosa.
 PROLIFERACIÓN CELULAR
 Las células cosechadas se colocaron en placas de
96 pocillos. a una densidad inicial de 2 × 10 4 celdas
/ pozo en DMEM / 10% FCS o 2% para ABL debido a
La fetuina está presente en el FCS. Las celulas fueron
Se permite adjuntar durante la noche y luego fueron
Incubado durante 24 horas en suero fresco libre.
medio. Medio contenido completo en lectina. a
una concentración final de 1, 10 o 100 µg / ml.
 En los estudios de competición la e Vectos de lo
específico. azúcar haptenica (50 mM) -BA (
Nacetylgalactosamine), PNA (galactosa); ABL
(fetuin), WGA (N, Ní, Níí-triacetylchitotriose), y VFA
(manosa) - para cada lectina fue Probado en
presencia y ausencia de la lectina.
INCORPORACIÓN AMINOÁCIDA
 El protocolo era el mismo que el anterior,
excepto que que 1 mCi 3 Los aminoácidos H
(Amersham) eran añadido en lugar de 3
Timidina h. Despues de las ocho horas, las
células se lavaron tres veces con 200 µl de
solución salina equilibrada de Hanks (HBSS),
seguido de 200 µl de ácido tricloroacético al
10% y 200 µl de metanol. La placa era
entonces Se deja secar a temperatura
ambiente. Las celulas fueron Se lisaron en 200
µl de KOH 1 M y se contó la radioactividad
beta.
DIFERENCIACIÓN
 Se estudió la diferenciación por cultivo en geles de colágeno
tridimensionales.
 En resumen, las suspensiones de células individuales se dejó
gelificar durante una hora, luego se añadió DMEM con o sin 2% de
FCS a los geles durante 24 horas.
 Las lectinas se agregaron por duplicado a 1, 10 y 100 µg / ml con o
sin 50 mM de sus azúcares hapténicas y se reemplazaron cada
cuatro días durante 21 días.
 Los anticuerpos monoclonales HECD1, PR3B10 y AUA-1 se
agregaron en diluciones en serie durante todo el experimento. Las
inmunoglobulinas de ratón purificadas (50 µg / ml) actuaron como
control. Las placas se examinaron diariamente mediante
microscopía de contraste de fase para detectar estructuras
glandulares, definidas como agregados de células organizadas
con luz central compuesta de células epiteliales que tienen
núcleos polarizados hacia la superficie basal de la célula.
Resultados
 MODULACIÓN DE LA ADHESIÓN CELULAR
POR LECTINAS La figura 1 muestra la e
Vectos de lectinas en célula-célula
adhesión.
 EFFECT OF LECTINS ON THE STEADY STATE
EXPRESSION OF epCAM None of the
lectins tested had any significant eVect
on the expression of epCAM in LS174T
cells. Immunoblotting detected bands of
(46 kDa) of almost equal intensities in both
unstimulated and lectin stimulated cells.
The blot (fig 2) represents one of three
experiments which all gave similar results.
EFECTO DE LAS LECTINAS
SOBRE LA PROLIFERACIÓN
EFECTO DE LAS LECTINAS
SOBRE GLANDULAR
DIFERENCIACIÓN
 Cuando se cultiva durante dos semanas en
colágeno, Células LS174T formadas desorganizadas
individuales grupos de células y no mostraron ningún
patrón de di glandular Verentiación en presencia o
ausencia de FCS (fig. 4A). Sin embargo cuando
cultivado en presencia de AGV (1, 10 y 100 µg / ml)
con o sin FCS, las células mostraron una Tendencia a
formar estructuras glandulares organizadas que
consisten en una sola capa de células con núcleos
dispuestos de forma basal alrededor de un lumen
central que contiene mucina (fig. 4B). Este e Vect
era Inhibido en presencia del anti epCAM.
anticuerpo monoclonal AUA-1 (50 µg / ml) y manosa
(no se muestra).
 Discusión
 Hemos demostrado por primera vez que VFA, el Lectina
presente en habas, puede aumentar. morfológica di
Verentiación y por lo tanto disminuir el fenotipo maligno de
las células de cáncer colorrectal. La agregación celular es
necesaria para la diferenciación normal de colonocitos19
pero en la En el presente estudio, algunas lectinas también
causaron agregación sin inducir diferenciación. los Efecto
de VFA en la adhesión célula-célula de LS174T Las células
fueron bloqueadas por anticuerpo monoclonal AUA-1
contra epCAM pero no por monoclonal. anticuerpos contra
CEA o cadherina E; esta Sugiere un efecto específico en
epCAM. Sin lectina tuvo algún efecto significativo en la
expresión de epCAM que sugiere que VFA actúa ya sea por
enlazando directamente a epCAM, que es N-glicosilado, 20
21 o por una vía que involucra epcam. Queda por ver si VFA
se une directamente a epCAM
 Es posible que las lectinas interactúen con las
moléculas de adhesión de la superficie
celular en forma de receptor de ligandos, lo
que conduce a la activación de una vía de
señalización. Esto está respaldado por la
evidencia de que las moléculas de adhesión
participan en una gran variedad de eventos
de transducción de señales importantes para
regular no solo la adhesión celular, sino
también la migración, el crecimiento, la
apoptosis y la regulación de genes
específicos
 Los estudios han demostrado que algunas lectinas son
internalizadas por las células y desencadenan la apoptosis.
También se ha demostrado que ABL inhibe la proliferación
de células HT29 después de la internalización
 Las VFA y otras lectinas vegetales que se unen a la manosa
pueden contribuir a la protección contra el cáncer
colorrectal por parte de los vegetales a través de los
efectos en el desarrollo del tumor. Además, los nuevos
datos que implican a epCAM en el efecto sugieren un
nuevo objetivo a través del cual podría modificarse el
comportamiento de los tumores. Actualmente estamos
investigando los efectos de las VFA y otras lectinas que se
unen a la manosa de plantas y mamíferos en el desarrollo
de tumores gastrointestinales.