 PRODUCCIÓN DE BIO-SURFACTANTE Y SU APLICACIÓN EN EOR

MICROBIANA

 Hay varias fuentes de energías disponibles en todo el mundo y entre

ellas, el petróleo crudo desempeña un papel vital. La recuperación de
petróleo se logra utilizando métodos de recuperación primarios y
secundarios convencionales. En orden para recuperar el restante
petróleo residual, tecnologías como la recuperación de petróleo
mejorada (EOR) se utilizan que también se conoce como recuperación
terciaria. Entre la EOR, la recuperación microbiana mejorada de
petróleo (MEOR) es una técnica que permite la mejora de la
recuperación de petróleo mediante la inyección de biosurfactante
producida por microorganismos.
Biosurfactante puede recuperar el petróleo irrecuperable de la roca
de la tapa que se mantiene por la fuerza capilar alta.
Biosurfactante es un agente activo de superficie que puede reducir la
tensión interfacial y reducir la viscosidad resto de petroleo residual,
tecnologías como la Recuperación Mejorada del Petróleo (EOR) se
utilizan lo que se conoce también como terciaria de la recuperación.
Entre EOR, Microbiana la Recuperación Mejorada del Petróleo
(MEOR) es una técnica que permite la mejora de recuperación del
petróleo mediante la inyección de bio-surfactante producidas por
microorganismos. Bio-surfactante puede recuperar irrecuperable
petroleo de la capa de la roca que se mantiene en alto el capilar de la
fuerza. Bio-surfactante es una superficie agente activo que puede
reducir la tensión interfacial y reducir la viscosidad petróleo residual
restante
Bio-surfactante puede recuperar irrecuperable petroleo de la capa de
la roca que se mantiene en alto el capilar de la fuerza. Bio-surfactante
es una superficie agente activo que puede reducir la tensión interfacial
y reducir la viscosidad petróleo residual restante,
las tecnologías como Enhanced Oil Recovery (EOR) son utilizadas que
también es conocido como la recuperación terciaria. Entre EOR, la
Recuperación de petróleo realzada microbiano (MEOR) es una técnica
que permite la mejora de la recuperación de petróleo por la inyección
del bio-surfactant producido por microorganismos
El Petróleo crudo juega un papel vital en nuestra vida cotidiana. La
contribución de la energía es de aproximadamente el 70%
comparativamente con otras fuentes de energía. La recuperación
del petróleo se refiere al proceso por el cual el petróleo crudo se
extrae de los pernos de roca de depósito del petróleo. La
recuperación del petróleo se divide en tres fases: primario,
secundario y terciario de la recuperación.
El método es de aproximadamente 10% a 15%. Una vez que la
presión se redujo a no más de aceite puede ser recuperado a la
superficie. En esta etapa el método de recuperación secundario
ayuda a recuperar el petróleo. En este método, artificialmente, el
agua se bombea a alta presión para acumular presión.
Debido a la diferencia de presión, el petróleo se
desplaza desde la alta presión a baja presión de la
zona.
Alrededor del 50% de OOIP se puede recuperar
utilizando el método de recuperación terciaria. La
inyección de diferentes agentes como el calor,
polímeros, surfactantes químicos y surfactantes
microbianos para recuperar el petróleo crudo de la
zona atrapada se conoce como métodos
Recuperación Mejorada del Petróleo.
Adicionalmente 20 – el 30% del petróleo es
recuperado después de la recuperación secundaria.
 El petróleo es un elemento clave para las actividades humanas como
fuente de energía y como materia prima para la producción de diversos
compuestos. Dos de los grandes problemas que la industria petrolera
enfrenta son, por un lado, la contaminación que ella misma produce y por
el otro, la baja eficiencia en la extracción del petróleo de sus reservorios
naturales. Una de las técnicas de remediación de sitios contaminados se
basa en el uso de microorganismos capaces de degradar el petróleo y sus
derivados mediante la utilización de distintas estrategias tales como la
bioaumentación o la bioestimulación. Sin embargo, la naturaleza
hidrofóbica de los hidrocarburos hace que estos compuestos sean poco
accesibles y se adhieran fuertemente a las moléculas del suelo o
sedimentos en ambientes acuáticos.
Tanto para favorecer la degradación como para facilitar su extracción de
los yacimientos, es importante aumentar su movilización y su
solubilización en medios acuosos, y para ello se propone el uso de
compuestos tensioactivos (surfactantes). Algunos microorganismos
poseen la capacidad de sintetizar este tipo de compuestos, denominados
biosurfactantes. Los biosurfactantes presentan varias ventajas con
respecto a los surfactantes químicos, entre ellas su biodegradabilidad,
baja toxicidad, biocompatibilidad, especificidad y la 147 amplia variedad
de estructuras químicas disponibles. Estas características han permitido,
en los últimos años, el desarrollo de técnicas de remediación y de
recuperacion asistida del petróleo residual que incluyen el uso de
biosurfactantes, tanto a escala de laboratorio como a campo.
El petróleo y otros combustibles fósiles son la principal fuente de
energía para las actividades humanas. Su utilización como fuente de
energía y materia prima para la producción de diversos compuestos
genera uno de los mayores problemas ambientales que debe enfrentar
el mundo actual
Por ello, el conocimiento de los problemas derivados de la
contaminación y la búsqueda de nuevas alternativas que contribuyan a
la optimización en el uso de estos compuestos preservando el medio
ambiente, así como el desarrollo de 148 nuevas metodologías para la
depuración de ambientes contaminados constituyen un objetivo
ecológico prioritario
En tal sentido, los microorganismos pueden ser actores importantes
en relación al petróleo y sus derivados dado que, debido a su alta
versatilidad metabólica, pueden ser utilizados tanto en procesos de
extracción y recuperación de petróleo como en aquellos
relacionados con la contaminación derivada del mismo. Este trabajo
intenta ampliar el conocimiento sobre el papel que juegan los
biosurfactantes en la industria petrolera, resaltando la importancia de
los organismos que los producen, como posibles agentes a ser
utilizados en protocolos de biorremediación o de recuperación del
petróleo residual en los yacimientos. En nuestro laboratorio se están
realizando investigaciones de estos compuestos obtenidos a partir
de bacterias aisladas de ambientes naturales.
Problemas de la industria petrolera:
Contaminación y eficiencia de extracción Dos de los problemas más
importantes que históricamente afectan a la industria petrolera son la
alta contaminación ambiental que genera y la baja eficiencia de
extracción del crudo de sus reservorios naturales. En el caso de la
contaminación ambiental, la misma ocurre cuando se producen
pérdidas en los tanques, oleoductos y diversas instalaciones
industriales o a partir de fallas o accidentes en los sistemas de
almacenaje o de transporte. En esos casos, los hidrocarburos alcanzan
aguas abiertas y suelos, pudiendo llegar a contaminar napas
subterráneas y/o cursos de agua superficial. Por otro lado, la extracción
de hidrocarburos de sus reservorios naturales no es un proceso
eficiente.
Tanto es así que según la base de datos de Reservorios del
Departamento de Energía de los Estados Unidos existen más de 600
reservorios que contienen más de 12.000 millones de barriles de
petróleo irrecuperables. Si por algún mecanismo se pudiera extraer solo
el 10% de ese petróleo residual, se estaría hablando de un incremento
en 300 millones de barriles
Actualmente se utilizan hasta tres etapas de extracción de petróleo, las
cuales aumentan el rendimiento final pero elevan los costos. La etapa de
extracción primaria es la más económica y se realiza aprovechando la
presión natural del reservorio, la extracción secundaria depende del uso
de bombas y/o inyección de gas, agua o vapor para extraer parte del
petróleo residual adherido a las rocas del suelo.
 Aunque esta segunda extracción aumenta la recuperación del
petróleo residual, más del 60% del crudo existente en un
reservorio queda aun en el mismo (2,3), lo que hace al
proceso poco eficiente.
 Existe, entonces, una tercera etapa de 149 extracción,
denominada Recuperación Asistida del Petróleo o EOR por
sus siglas en inglés (Enhanced Oil Recovery). Esta técnica
utiliza distintos métodos para aumentar la presión en el
reservorio y/o disminuir la viscosidad del petróleo. Tanto para
la remediación de los ambientes contaminados como para el
proceso de EOR, se ha propuesto el uso de microorganismos.
En el caso de EOR , cuando se utilizan microorganismos o los
compuestos producidos por ellos, se lo denomina MEOR
(Microorganism Enhanced Oil Recovery).
Microorganismos y la industria petrolera
A pesar de que los ambientes naturales cuentan con sistemas de
detoxificación naturales (proceso de atenuación natural), éstos pueden
tardar mucho tiempo en lograrse, con el consecuente daño tanto para
la flora y fauna local como para el ser humano. Por este motivo, en el
caso de ambientes altamente contaminados, es necesaria la acción del
hombre para acelerar este proceso. A esta intervención se la denomina
remediación. En las últimas décadas del siglo XX y primeros años del
siglo XXI, se comenzaron a utilizar organismos capaces de degradar
hidrocarburos para remediar sitios contaminados. A este proceso se lo
denominó biorremediación. El estudio de la biorremediación ganó
impulso luego del vertido de crudo del buque Exxon Valdez en Alaska el
24 de marzo de 1989
En general se basa en dos mecanismos: la bioestimulación, que
consiste en agregar fertilizantes fosforados y nitrogenados de manera
de otorgar aceptores de electrones y nutrientes al ambiente y así
favorecer el aumento de la carga microbiológica autóctona, y la
bioaumentación, que consiste en inocular cepas o consorcios de
microorganismos especialmente formulados para sanear un
determinado sitio (7). Uno de los grandes problemas que tiene tanto la
biorremediación como la MEOR es, justamente, la baja
biodisponibilidad de los hidrocarburos debido a su escasa solubilidad
en agua y su alta adherencia a las moléculas del suelo. El uso de
agentes tensioactivos, tanto sintéticos como biológicos, aumentaría la
disponibilidad de los hidrocarburos ya sea para su mejor extracción o
para su biodegradación.
Los surfactantes como agentes para mejorar la biodisponibilidad
El término surfactante proviene de las palabras inglesas Surface Active Agents. Los
surfactantes son moléculas anfipáticas que poseen la capacidad de interaccionar con
compuestos hidrofóbicos e hidrofílicos a la vez y por lo tanto, ubicarse en la interfase
de los mismos. Esta afinidad por las interfases es lo que les otorga sus principales
características: - disminuir la tensión superficial – en el caso del agua puede
reducirse de 72 mN/m a cerca de 27 mN/m (8), - reducir la tensión interfacial y -
aumentar la solubilidad. Muchos microorganismos son capaces de sintetizar este tipo
de compuestos (ver Tabla 1), y en ese caso, se los denomina Biosurfactantes. Los
biosurfactantes se pueden clasificar según su peso molecular o su naturaleza
química (Tabla 1). Los compuestos de bajo peso molecular son generalmente
lipopéptidos, glicolípidos, aminoácidos modificados y ácidos grasos, mientras que los
de alto peso molecular son polímeros extracelulares compuestos por polisacáridos,
lipopolisacáridos, proteínas, lipoproteínas o una mezcla compleja de estos
biopolímeros
Clasificación y origen de diferentes biosurfactantes
Estos bioproductos poseen amplias ventajas en comparación
con los surfactantes químicos, como: - la biodegradabilidad, -
la baja toxicidad y biocompatibilidad – lo que permite su uso
en la industria farmacéutica y de alimentos, - la capacidad
de sintetizarse a partir de fuentes de carbono relativamente
baratas o a partir de residuos de otras industrias, - la amplia
variedad de estructuras químicas disponibles entre los distintos
biosurfactantes - la especificidad, ya que dependiendo de su
fórmula molecular, tendrán grupos funcionales diferentes que
le confieren mecanismos de acción específicos (14) La
efectividad de un surfactante se puede establecer en base a
distintos parámetros, todos ellos relacionados con su
capacidad de solubilizar compuestos hidrofóbicos y disminuir
la tensión superficial y/o interfacial.
Unos de los parámetros a tener en cuenta es la
Concentración Micelar Critica o CMC, y la disminución de la
tensión superficial (TS) e interfacial (TI). La CMC es la
concentración mínima de un agente surfactante capaz de
formar micelas (Figura 1). Estas micelas se producen cuando
la parte hidrofóbica del surfactante, al ser incapaz de formar
puentes de 153 hidrógeno con las moléculas de agua,
produce un aumento de la energía libre del sistema.
Los biosurfactantes y la remediación de sitios contaminados
con hidrocarburos
Debido a la naturaleza hidrofóbica de los hidrocarburos, es
necesario aumentar la biodisponibilidad de los mismos de manera
que sean accesibles a los organismos encargados de su
degradación. Este objetivo puede alcanzarse con el agregado de
surfactantes químicos o detergentes. Sin embargo, el uso de estos
compuestos agrega un contaminante extra (23). Este
inconveniente se solucionaría empleando biosurfactantes, ya que
son compuestos amigables para el ambiente.
Biosurfactantes para la recuperación de petróleo residual
(MEOR)
La extracción del petróleo de los yacimientos es muy poco
efectiva. La existencia del petróleo residual en los reservorios se
debe a los mismos factores que hacen que la remediación de los
sitios contaminados sea dificultosa, aunque en estos casos, la
principal dificultad se debe a la alta adherencia de los
hidrocarburos a las moléculas porosas del suelo: arcillas, rocas,
arena, etc. y a la viscosidad del fluido (38). El agregado de
surfactantes forma parte del arsenal de herramientas con las
que se intenta mejorar la extracción del crudo atrapado en los
yacimientos.
Se observa el efecto de los agentes surfactantes que al disminuir la
tension interfacial liquido-solido y liquido- liquido permite la
movilización y solubilización del hidrocarburo retenido
 RESULTADO Y DISCUSIÓN

Los biosurfactantes son compuestos tensioactivos producidos por una

variedad de microorganismos que pertenecen al género Bacillus,
Pseudomonas y Acinetobacter. Los biosurfactantes que producen
microorganismos crecen tanto en hidrocarburos inmiscibles en agua como
en un medio de sal mineral que contiene carbohidratos. La sacarosa y el
sulfato de amonio se utilizaron como fuentes de carbono y nitrógeno junto
con sal mineral para la producción de bio-surfactnat. La cepa Pseudomonas
putida fue capaz de producir biosurfactante.
 Fig. 2 Concentración de bio-surfactante para el curso del tiempo

Se puede observar que la concentración de bio-surfactante

producido depende de la cantidad de crecimiento celular. Se
encontró que el rendimiento máximo de bio-surfactante era de 1.1
g / l. La producción de bio-surfactante se consideró más
importante ya que tiene la capacidad de reducir la tensión
superficial e interfacial.

El resultado obtenido se comparó con informes anteriores y se

encontró que Bacillus subtilis MTCC1427 con sacarosa y sulfato de
amonio proporcionó 1,1 g / l de bio-surfactante.
 Fig. 3 Tensión superficial en el tiempo de fermentación

El sobrenadante de cultivo fermentado se sometió a un análisis de

tensiómetro para estimar la eficiencia del bio-tensioactivo
producido, el cual reduce la tensión superficial interna. Se encontró
que la tensión superficial inicial era de 74 mN / m y, a medida que
avanzaba el tiempo, se logró la reducción de la tensión superficial
(Fig. 3). Se encontró que la reducción máxima en la tensión
superficial era de 43.4 mN / m con 120 horas de tiempo de
fermentación. Se encontró que los resultados obtenidos son
bastante similares a los datos informados anteriormente sobre la
producción de biosurfactante por Bacillus subtilis MTCC1427, donde
la reducción en la tensión superficial fue de 34 mN / m.
Perfil de Reducción de Tensión Interfacial Vs Tiempo

La reducción de la tensión interfacial se determinó mediante la

adición de un volumen igual de petróleo crudo al bio-surfactante.
La Fig. 4 muestra el perfil de reducción de la tensión interfacial para
diferentes tiempos de fermentación. Se encontró que la tensión
interfacial era de 44 mN / m y cuando el tiempo precede a la
reducción de la tensión interfacial se logró con el bio-surfactante
producido usando la cepa Pseudomonas putida. Se encontró que
la reducción máxima era 17.6 mN / m con 120 horas de tiempo de
fermentación.
 Fig. 5 %Petroleo recuperado por un patrón de secuencia no con diferentes
métodos de inundación.
Usando una columna rellena de arena, la eficiencia de la recuperación de
petróleo se determinó utilizando diferentes métodos de inundación. Todos los
experimentos de inundación se llevaron a cabo por separado. Inicialmente, el
aceite crudo (20 ml) se saturó en la columna rellena de arena simple rellena con
arena fina. La porosidad del material empaquetado se encontró que era del 26%.
En la primera etapa el aceite se recuperó inyectando 10 ml de agua. Se anotó la
cantidad de aceite recolectado. Cuando ya no se recuperó más aceite, se
inyectaron otros 10 ml de agua para recuperar el aceite. Esto se hizo porque
como el proceso de inyección se llevó a cabo como proceso por lotes y se
calculó la cantidad de aceite recolectado.
La inundación de MEOR se llevó a cabo mediante la
inyección de un bio-surfactante puro . Se inyectaron 20
ml de aceite crudo en la columna de arena simple
diseñada. Inicialmente se inyectaron 10 ml de
surfactante biológico y se calculó la cantidad de
aceite recolectado. Se inyectaron otros 10 ml de aceite
bioactivoactivo y se midió la cantidad de aceite
extraído. Se determinó la cantidad de aceite
recuperado inyectando 20 ml de bio-surfactante. Se
encontró que al usar agua inundada, se recuperó
alrededor del 51.5% del petróleo. Triton X 100 y Tween
inyección dieron una recuperación de 70% y 50,5%
respectivamente. Por otro lado, se encontró que la
cantidad de aceite recuperado con la inundación de
bio-surfactante era del 60%.
 Fig. 6 % z recuperado por el patrón de secuencia de diferentes
Métodos de inundaciones

El experimento de inundación se llevó a cabo con

Proceso de inyección. La única diferencia aquí es la
inyección. Los métodos se llevaron a cabo
secuencialmente. es decir, un crudo era inyectado, 20
ml de agua inyectada y Se determinó la cantidad de
aceite recolectado. A la misma columna de nuevo
Triton X 100 seguidos por Tween y finalmente se inyecto
bio-surfactante.
 Se determino la cantidad de aceite recuperado después de cada etapa De
inyección de la figura 2, se absorbe que El 41,7% del petróleo se recuperó
utilizando agua inundada. 28.3 y El 13,4% del aceite se recuperó mediante
inyección de Triton y Tween. respectivamente. Las inundaciones de bio-
surfactante produjo alrededor del 16.6% de la recuperación de petróleo. La
eficiencia de barrido volumétrico es la fracción del depósito en total, ya que el
fluido inyectado está efectivamente en contacto. La saturación de agua inicial
tendrá mayor efecto y Se considera dominante debido a la humectabilidad
adsorbida por petróleo crudo. Esto se debe a que el agua determina qué parte
de El material envasado entra en contacto con el aceite saturado. Desde Fig. 6,
el perfil muestra que, a medida que hay un aumento en la tasa de Inyección de
fluido no hay un gran cambio en la tasa de recuperación. La razón de este caso
puede ser la digitación viscosa o las rutas de flujo preferencial. La Trayectoria de
flujo que pueden estar asociadas con la naturaleza hiperbólica. Del flujo de
fluido advectivo dominante. Sin embargo una cantidad considerable de aceite
se recuperó después de Triton X 100 y Tween inundación. Bio-surfactante que son
compuestos tensioactivos que redujo efectivamente la fuerza capilar al reducir
la tensión interfacial. Los Resultados sobre tensión superficial e interfacial y La
reducción de la tensión interfacial se determinó utilizando un tensiómetro digital.
El bio-surfactante producido demostró tener efectos positivos. sobre el
desplazamiento del petróleo crudo que se considero que se mantenía por una
mayyor mayor tensión superficial [10]. Los microbios producidos inhiben. Los
efectos negativos que altera la interacción entre el Material envasado y aceite
presente en la columna.
 Fig. 7 % Aceite recuperado inyectando un volumen
variable de fluidos (Arena fina)
 Para verificar el factor de recuperación, la cantidad de fluido
inyectado ha variado de 5 ml hasta 30 ml. Este experimento fue
realizado con un procedimiento similar al mencionado en el
experimento Se saturaron 20 ml de aceite crudo. La Inundación de
agua Se realizó inyectando 5 ml – 30 ml. Del mismo modo la
columna era saturado con petróleo crudo seguido de inyección de
químicos Tensioactivos (Tritón y Tween). Finalmente el bio-
surfactante fue Inyectado a diferente volumen (5-30 ml). La
recuperación del porcentaje se muestra en la Fig. 7. Se encontró
que la recuperación fue mayor, es decir, 79.3% con tritón
inyectando de 10 ml. La Inundación de bio-surfactante logró el 60%
de recuperación. La Inundación de agua y la inundaciones de
interpolacion se obtuvo una mayor recuperación del 83% y 90%
inyectando 5 ml respectivamente. De la trama se puede observar
que la recuperación fue bastante mayor con 20 ml de tritón y bio-
surfactantes. Desde entonces, el bio-surfactante es más
económico. que el triton Se inyecta para aumentar la tasa de
recuperación de aceite a medida que reduce la tensión superficial
e interfacial que normalmente se Encuentra en el reservorio de
petroleo . También la viscosidad. Del aceite se reduce
considerablemente con los ácidos y gases Generados por los
microbios durante la producción de bio-surfactante.
 Este interno Ayuda en el aumento de la movilidad del petróleo y por
lo tanto el aceite Se libera de la zona atrapada en el reservorio. A
medida que aumenta la inyección de agua y Tween se encontró
que Al aceite residual no se puede acceder mediante la inyección
de estos fluidos Debido al efecto de la no dispersión de fluidos en La
recuperación de crudo de la columna no tenía mucho potencial.
[13]. Potencialmente, esto podría explicarse en términos de
percolación donde alrededor del 50% de las columnas húmedas con
aceite podrían tener suficientes poros húmedos de aceite
interconectados para percolar a través de la Columna que causa
una menor saturación de aceite residual [14]. Desde los resultados
obtenidos se observa que la tensión superficial y la arena empacada
en la columna puede jugar un papel vital al atrapar El aceite en la
salida debido a la presencia de la superficie húmeda de aceite de la
columna empaquetada Así, el lipopéptido biosurfactante purificado
producido por la cepa Pseudomonas putida se encontró que es el
mas adecuado para aplicaciones de recuperación de aceite.
GRACIAS POR SU ATENCIÓN..