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Determinación de su
actividad catalítica en
distintos materiales
biológicos
¿Qué son ?
La mayoría son proteínas
( existe ARN catalítico ).
OBJETIVO
Identificar las enzimas mediante su actividad, frente
a sustratos específicos
Preparar 3 tubos de ensayo:
Sacarosa 1% --- 1 ml 1 ml
Saliva 1:9 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Almidón 1% 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
GOT
B6
GPT
B6
GPT: glutámico pirúvico transaminasa, alanin amino transferasa o ALAT
GOT: glutámico oxalacético transaminasa, aspartato amino transferasa
o ASAT
Transaminasas
A + B --------- C + D
V= - dA o dC = K.[A].[B]
dt dt
Katal:
v = Vmax[S]
Km + [S]
Km concentración de sustrato
a la cual la velocidad de
reacción es ½ de su
k1 k2 velocidad máxima
E+S ES E+P
k-1
Km = k-1 + k2
k1
En las reacciones enzimáticas en que
participan más de un sustrato, cada uno de
ellos posee su propia Km
1 Km + [S]
=
v0 Vmax[S]
1 Km [S]
= +
v0 Vmax[S] Vmax[S]
1 Km 1 1
= +
v0 Vmax [S] Vmax
Ecuación de Lineweaver-Burk
Inhibición competitiva
Ki Ki
EI + S ESI
Ks
Blanco testigo 1 2 3 4 5 6
Reactivo 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml
trabajo
40.000
35.000
30.000
25.000
1/V
20.000
y = 75,431x + 11,8
15.000
10.000
5.000
0.000
-0.20 -0.10 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50
1/[S]
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
V
0.150
0.000
0 0.05 0.1 0.15 0.2
[S]
10
7
V
0
0 5 10 15
[S]