XANTHOMONAS

AXONOPODIS PV.
MANIHOTIS
APLICACIÓN BIOTECNOLÓGICA
POR: IMERA PERTUZ
Mediante la utilización conjunta de genética mendeliana y
estadística a comienzos del siglo XX, se construyó la ciencia y
arte del mejoramiento genético de cultivos. La intensiva
explotación del llamado vigor híbrido, se incrementaron
significativamente los rendimientos de cereales, al mismo
tiempo que hibridaciones intervarietales e interespecíficas,
acompañadas de manipulaciones citogenéticas, fueron útiles
para mover genes de resistencia a enfermedades y a insectos
plagas desde donadores foráneos hacia las variedades
cultivadas.
El mejoramiento de plantas fue posteriormente acelerado, con el
desarrollo de la tecnología de ADN recombinante, que permite la
transferencia de genes foráneos al genoma de especies cultivadas. La
implementación exitosa de transgénesis para combatir insectos plagas y
enfermedades de cultivos importantes como arroz (Oryza sativa L.), trigo
(Triticum aestivum L.), cebada (Hordeum vulgare L.), maíz (Zea mays L.) y
algodón (Gossypium hirsutum L.), así como la biofortificación de cultivos
es otro desarrollo importante para la la desnutrición. El arroz dorado,
genéticamente enriquecido con vitamina A y hierro, por ejemplo, tiene el
potencial real de salvar millones de vidas. Otra aplicación interesante de
la tecnología transgénica es la producción de vacunas bebibles contra
enfermedades mortales
Los xanthomonads son patógenos bacterianos de las plantas que
causan enfermedades en muchas especies de ellas, incluyendo
cultivos importantes. La clave para la patogenicidad de la mayoría
de los Xanthomonas es un sistema de secreción de Hrp-tipo III
(T3S) que transloca las proteínas efectoras en las células
vegetales. Dentro de la célula eucariótica, se cree que los efectores
realizan una variedad de tareas para apoyar la virulencia
bacteriana, la proliferación y la diseminación, se empezaron a
entender los objetivos de acogida de diferentes efectores. La
familia efector más grande encontrada en Xanthomonas spp. es la
familia AvrBs3 / PthA o TAL (tipo activador de la transcripción). Los
efectores TAL actúan como activadores transcripcionales en el
núcleo de la célula vegetal. La especificidad de los efectores TAL se
determina mediante un nuevo dominio modular de unión al ADN.
Xanthomonas axonopodis pv. manihotis es el patógeno que causa la plaga bacteriana
de la yuca . Originalmente descubierta en Brasil en 1912, la enfermedad ha seguido el
cultivo de yuca en todo el mundo. Entre las enfermedades que afligen a la yuca en todo
el mundo, la niebla bacteriana causa las mayores pérdidas en términos de rendimiento
es capaz de infectar a la mayoría de los miembros del género de plantas Manihot .
Consistiendo de cerca de 100 especies, la especie más económicamente significativa
es fácilmente el arbusto leñoso ampliamente cultivado, Manihot esculenta. En la yuca,
los síntomas varían de una manera que es única para este patógeno. Los síntomas
incluyen niebla, marchitez, muerte y necrosis vascular. Un síntoma más diagnóstico
visible en la yuca con X. axonopodis. Las infecciones son manchas necróticas angulares
de las hojas, a menudo con un anillo clorótico rodeando las manchas. Estas manchas
comienzan como distinguibles húmedas, lesiones pardas normalmente restringidas a la
parte inferior de la planta hasta que se agrandan y se unen, matando a menudo toda la
hoja. Un síntoma de diagnóstico adicional se encarna a menudo como charcos del
exudado de la goma a lo largo de heridas y venas cruzadas de la hoja. Comienza como
un líquido dorado y se endurece para formar un depósito de color ámbar.
Para lograr una colonización exitosa dentro de las células vegetales, las
diferentes especies de bacterias fitopatógenas han desarrollado proteínas
efectoras que son inyectadas al citoplasma de las células vegetales a través del
sistema de secreción tipo tres (T3SS, del inglés Type Three Secretion System).
Estas proteínas efectoras, a través de diferentes mecanismos, suprimen la
primera rama de inmunidad vegetal conocida como PTI (del inglés PAMP Trigger
Immunity) Sin embargo, las plantas en su proceso co-evolutivo con patógenos,
desarrollaron proteínas de resistencia capaces de reconocer ya sea de manera
directa o indirecta proteínas efectoras o el efecto que ellas tienen sobre otras
proteínas de la planta, tales como la fosforilación o degradación . En este caso,
dicho reconocimiento desencadena una respuesta hipersensible que consiste
en muerte celular programada que detiene la multiplicación del patógeno y
resulta en fenotipos resistentes en las plantas.
La mayoría de efectores no muestran características conservadas entre sí y
presentan una gran diversidad no solo a nivel de secuencia sino también a nivel
de funciones bioquímicas
Estudios recientes han mostrado que la proteína AvrBs3 de Xanthomonas, es
capaz de interactuar con proteínas de la familia α-importina en células de
pimentón. De igual manera se ha determinado que AvrBs3 se une directamente
al ADN, en la región promotora de genes blanco para inducir su expresión.
En el caso de una interacción compatible (susceptibilidad), la inducción de
genes mediada por AvrBs3 produce hipertrofia celular, En el caso de una
interacción incompatible (resistencia), la proteína AvrBs3 se une al promotor del
gen de resistencia Bs3, lo que produce una respuesta de defensa que detiene
la colonización del patógeno. Recientemente se ha determinado que la
secuencia de los 34 aminoácidos y el número de estas unidades repetitivas
representan un código que permite predecir la secuencia de ADN a la cual el
tipo de efectores AvrBs3 es capaz de unirse
Actualmente no hay protocolos estándar para la edición de genomas en yuca.
En un estudio se exploró la posibilidad de translocar efectores sobre callo
embriogénico friable (CEF) a través de la inoculación con Xam, con el fin de
determinar el potencial de este patógeno como sistema de entrega de TALEN.
El CEF de dos variedades de yuca susceptibles (COL2215 y cv. 60444) se
co-cultivaron con la cepa Xam668 a diferentes tiempos. Posteriormente, se
evaluó la expresión de marcadores correspondientes a los genes blanco
conocidos para los TALE presentes en esta cepa bacteriana. Aunque no se logró
demostrar la translocación de los mismos en el tejido embriogénico, sí se
lograron establecer condiciones adecuadas de cocultivo con Xam y el efecto
que la infección bacteriana tiene sobre la regeneración de embriones a partir
de este tejido.
La bacteriosis vascular de yuca producida por la bacteria Xanthomonas
axonopodis pv. manihotis (Xam) es una enfermedad limitante para la
producción de yuca. Dentro de los primeros factores de patogenicidad
identificados en esta bacteria se encuentra el gen PthB. La proteína PthB
pertenece a la familia de efectores PthA/AvrBs3, que se caracterizan por
presentar dominios NLS (Nuclear Localization Signal) y un dominio AAD (Acidic
Activation Domain), lo cual sugiere que estas proteínas actúan como factores
de transcripción. La identificación de las proteínas de yuca que interactúan con
PthB permitiría dar luces sobre la función de esta proteína en la patogenicidad
de la bacteria, se clonó PthB en una fusión traduccional con el BD (Binding
Domain) del factor de transcripción GAL4. Después de transformar este
constructo en una cepa de levadura, se observó autoactivación de los genes
reporteros, incluso a concentraciones altas de 3-AT. La eliminación del primer,
segundo o de los dos NLS y del AAD no eliminaron la capacidad de
autoactivación de los genes reporteros mediada por PthB. Estos resultados
indican la posibilidad de su utilización en un tamizaje de una librería de ADNc
de yuca para identificar las proteínas que interactúan con PthB.
GRACIAS POR SU ATENCIÓN.
BIBLIOGRAFÍA
[En línea]. Available:
http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/genus.pl?7234
http://www.cabi.org/isc/datasheet/56952
https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/12434
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http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0304-
35842015000100001