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Contenido
•Introducción
• Levaduras
• Proceso Fermentativo
•Subproductos
•Introducción a la microbiologia
•Operacions de Limpieza
•Auxiliares de Fermentación
•Zaranda de Levadura
•Filtro tangencial
•Antiespumante
•Mermas de proceso
Fermentación
2. Levadura 8 CO2
3 Aire
7 Desechos 6 Auxiliares
5 Operación
CH2 0H
O
H OH
H
+ Enzimas de Levadura
OH H H
OH
H OH
B-GLUCOSA
18 18
17
16 16
15
14
14
13
12
11 12
10
Temperatura
9 10
8
7 8
6
5 6
4
3
4
2
1
0 2
-1
-2 0
Dias
0,5 1,5 2,5 3,5 4,5 5,5 6,5 7,5 8,5 9,5 10,5 11,5 12,5 13,5
aire
CO2
Levaduras
CO2
calor calor
Levaduras calor
calor
calor
CH5OH
2.1 EL MOSTO: UN MEDIO DE CULTIVO RICO
Biosíntesis Síntesis de
Combustible Metabolismo
de proteínas membranas
Fermentación
GLUCOSA GLUCOLISIS
PIRUVATO
FERMENTACIÓN
RESPIRACIÓN
DESCARBOXILACIÓN
OXIDATIVA
CICLO DE KREBS
FOSFORILACIÓN
OXIDATIVA
ETANOL+CO2 H2O+CO2
CAMBIO DE PLATA
(cambio de energía )
GLUCOLISIS
Fase de Inicio
En las primeras 12 a 18 horas, la levadura apenas se reproduce. El CO2 está
en el inicio de su formación y en está fase no existe prácticamente formación
de espuma. La temperatura comienza a aumentar muy lentamente, en 24 hs,
puede hacerlo de 0.5 a 1.0°C. La atenuación del extracto en 24 hs. es de
apenas 0.4 a 0.8°P. El pH disminuye en 0.30 a 0.60 unidades en 24 hs.
Fase de Baja Espuma
En esta fase la Fermentación se intensifica, hay una pequeña formación de
espuma y mayor formación de CO2. La atenuación del extracto en 24 hs es de
0.8 a 1.0°P. La temperatura aumenta de 1.5 a 2.0°C por día. El pH cae de 0.6
a 0.8 unidades por día.
Fase de Alta Espuma
Es la fase de fermentación es muy intensa. El CO2 está en su etapa de
máxima formación y el Kräusen (camada de espuma) alcanza alturas de hasta
50 cm y adquiere una coloración marrón medianamente oscura. La atenuación
del extracto en 24 hs es de 1.0 a 2.0°P. La temperatura aumenta de 3.0 hasta
5.0°C por día. El pH alcanza valores de 4.0 a 4.4. El número de células se sitúa
en valores de 40.0 a 60.0 millones/ml.
Fase Final de Fermentación
La camada de espuma comienza a colapsar dando lugar a una película
extensa, que no debe romperse. La atenuación del extracto en 24 hs es de 0.2
a 0.3 °P. El pH permanece inalterado. Puede observarse la floculación del
fermento, acelerado por el enfriamiento del tanque hasta temperaturas de 4.0
a 5.0°C.
Curva de Fermentación
CURVA DE FERMENTACIÓN-MADURACIÓN
Extracto (ºP)
16.0
N° Células/ml x 106
70
15.0 Floculación
65
14.0
60
13.0
12.0 55
Temperatura (ºC)
11.0 50
10.0
45
9.0
Retirada de Fermento 40
8.0
7.0 35
6.0 30
5.0
25
4.0
3.0 20
Tiempo (hs)
Proceso de Fermentación
Productos primarios
Etanol
CO2
Calor
Productos secundarios
Alcoholes superiores, ácidos compuestos nitrogenados y
azufrados, azúcares no fermentables, etc.
El rol de la aireación del Mosto
O2
El crecimiento de la Levadura en condiciones Aeróbicas es muy rico en Ácidos Grasos Insaturados (UFA) y
Esterol Esteres comparado con el crecimiento Anaeróbico. Los principales Ácidos Grasos en células
Aeróbicas son los ácidos insaturados Palmitoleico y Oleico, mientras que en células Anaeróbicas
predomina el ácido saturado Palmítico. La diferencia en la distribución de Ácidos Grasos en células
Aeróbicas y Anaeróbicas es más marcada en los Esterol Esteres. Durante las primeras horas de la
Fermentación se observa una rápida síntesis de Ácido Palmitoleico en mostos aireados, la síntesis de
Ácido Oleico requiere más Oxígeno y tiempo del disponible en condiciones normales de producción.
Utilización de Azúcares
Hexosas
Azúcares de inicio de
Fermentación
Maltosa
Azúcar de Fermentación
principal
Maltotriosa
Azúcar de Final de
Fermentación
Glucólisis
CH2OH
+2
O H Mg
H
OH H + ATP
OH OH
H OH
2
CH2OPO3
O H
H
OH H + ADP
OH OH
H OH
(&-D-GLUCOSA-6-FOSFATO )
-2
CH2OPO -2 O
3 CH2OPO3
O CH OH
H 2
H
OH H H OH
H OH
OH OH
H OH OH H
&-D-GLUCOSA-6-FOSFATO &-D-FRUCTOSA-6-FOSFATO
-2 -2 O
O CH2OPO3 -2
CH2OPO3
CH OH CH OPO 3
2 2
+ ATP H OH
H OH
H H OH
OH
OH H OH H
&-D-FRUCTOSA-6-FOSFATO &-D-FRUCTOSA-1-6-DIFOSFATO
-2 O
CH2OPO3 -2 -2
CH OPO 3 CH OPO HC O
2 +2 2 3
Zn HCOH
H OH C O
H OH + -2
CH OH CH OPO
2 2 3
OH H
FOSFATO DE D-GLICERALDEHIDO
&-D-FRUCTOSA-1-6-DIFOSFATO
DIHIDROXIACETONA 3-FOSFATO
-2
CH OPO HC O
2 3 HC O
C O HCOH
HCOH
+ -2 2 -2
CH OH CH OPO
2 2 3 CH OPO
2 3
FOSFATO DE D-GLICERALDEHIDO
D-GLICERALDEHIDO
DIHIDROXIACETONA 3-FOSFATO
3-FOSFATO
O O
HC O
HC O P O
HCOH +
2 + NAD + P HCOH O + NADH
-2 i
CH OPO -2
2 3 CH OPO
2 3
D-GLICERALDEHIDO
3-FOSFATO 3-FOSFOGLICERIL-
FOSFATO
O O
O
HC O P O NADH
+ HC O
HCOH O + NAD + ADP + P +
HCOH
-2
CH OPO -2 ATP
2 3 CH OPO
2 3
3-FOSFOGLICERIL- 3-FOSFOGLICERATO
FOSFATO
FOSFOGLICERATO-QUINASA
OCTAVA REACCION (CAMBIO DE RADICAL )
O +2 O
HC O Mg HC O
-2
HCOH HCO PO
3
-2
CH OPO CH OH
2 3 2
3--FOSFOGLICERATO 2--FOSFOGLICERATO
FOSFOGLICERO-MUTASA
NOVENA REACCION
O O
HC O HC O
-2 -2
HCO PO CO PO
3 3
CH OH CH
2 2
2--FOSFOGLICERATO FOSFOENOLPIRUVATO
O
O
C O
C O
-2 + ADP
+ ATP
HCO PO
3 C O
CH
2 CH
3
FOSFOENOLPIRUVATO
PIRUVATO
FIN DE LA GLUCOLISIS
FERMENTACION LACTICA (AUSENCIA DE LEVADURA )
O O
C O C O +
C O + NADH + H HC OH
+ NAD
CH CH
3 3
PIRUVATO L-LACTATO
Concentraciones durante
Producto intermediario normal en la
proceso
fermentación alcohólica. Es excretado por la
levadura durante los primeros tres días de
•Cerveza Joven: 20-40 mg/l
Fermentación. Es responsable por el flavor de
cerveza verde joven. Con aroma característico
•Cerveza terminada < 8-10 mg/l
como a sótano o moho.
Umbral de detección
Remoción efectiva
4.0-8.0 mg/l
•Toda medida que promueva una vigorosa
fermentación secundaria y maduración.
•Fase de maduración en caliente.
•Óptima aireaci{on del Mosto.
•Concentración adecuada de levadura.
Proceso de Fermentación
Respiración 36 ATP
Bajo consumo de Azúcares por la
1
alta cantidad de energía generada.
Glucosa
Fermentación 2 ATP
Alto consumo de Azúcares por la
baja cantidad de energía generada.
GLUCOSA-6-FOSFATO
3-FOSFOGLICERATO
FRUCTOSA-6-FOSFATO
2-FOSFOGLICERATO
ATP ADP
FRUCTOSA-1-6-DIFOSFATO
FOSFOENOLPIRUVATO
2NAD+ 2NADH
2ADP 2ATP
2 GLIRERALDHEIDO 3-FOSFATO
PIRUVATO
-FOSFOGLICERIL-FOSFATO
CICLO DE KREBS ( 1937 )
ACIDO PIRUVICO ( 3 C )
CoA CO2
NAD NADH
ACETIL-CoA ( 2 C )
CoA
NAD NADH
CO2
ACIDO FUMARICO ( 4 C )
FADH NAD CoA
ACIDO &-CETOGLUTARICO ( 5 C )
ACIDO SUCCINICO ( 4 C )
NADH
FAD
CoA CO2
CO2
SUCCNIL-CoA ( 4 C )
GTP
GDP
NADH CADENA RESPIRATORIA
( TRANSPORTE ELECTRÒNICO )
NAD
+ -
H +e
FMN + -
H +e FADH
PROTEINA FAD
Fe-S + -
NIVEL DE ENERGIA
ADP + P
H 2e
COENZIMA Q ATP
-
2e
Citrocromo B
-
2e
H O Citrocromo C
2 -
2e
Citrocromo A
-
2e
Citrocromo A3
1/2 O
2
FERMENTACION ALCHOLICA
O
C O H +
C O + NADH + H C O + CO2 + NAD
CH CH
3 3
PIRUVATO Acetaldehido
H2
H +
+ NADH + H C OH + NAD
C
O CH3
3
CH Alcohol Etílico
Acetaldehido
GLUCOSA + 6 O 6 CO + 6 H O
2 2 2
* *Azúcares fermentescibles
*
* *Azúcares no fermentescibles
*
* *Hidrolizado por la invertasa
*
Metabolismo de los carbohidratos
60
50
40
30
20
10
0
0 24 48 72 96 120 144
Hs de Procesos
40-50%red.Glucosa
Maltosa Dextrinas Glucosa Maltotriosa Fructosa
Metabolismo del nitrógeno
BZOZO41
1800
BZOZO40
BZOZBSM01
1600 BZOZNGM01
Novo Gradiska malt
198 ppm FAN
1400
Total diacetyl (ppb)
1000
600
400
ZAGDIACETYL
2600
Filling
2400 Range of total diacetyl profiles
• Falta de FAN
at Zagreb
2200
1000
800
600
400
200
0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240
Hours including filling (16-19h)
VITAMINAS
1) AZUFRE
H2N CH C OH
CH2
CH2
S
Metionina,
CH3 apolar
Iones inorgánicos (y otros elementos)
1) AZUFRE
c) Otros
•Los principales subproductos organosulfurados del metabolismo de las
levaduras son los mercaptanos (tio-alcoholes). Junto con sus derivados
menos abundantes, los tio-aldehídos y tio-cetonas, contribuyen al flavor
global de la cerveza.
Elementos METALICOS
• Macroelementos. [0.1 y 1.0 Mm]: K+, Mg2+, Ca2+, Zn2+, Fe2+, Fe3+
y Mn2+.
• Inhibidores. >[10-100 mM]: Ag+, As3+, Hg+, Li+, Os2+, Pd2+, Se4+
y Te4+.
a) Magnesio
a) Magnesio
• Otras funciones:
• -Interviene en la tolerancia al alcohol.
• -Efecto protector frente a tp y estrés osmótico.
• -Estabilizante de estructuras.
• -Papel clave en el crecimiento y división celular.
b) Calcio
• Importante en la estructura de la membrana de la levadura y en su
función.
• Requerimientos 10-20 ppm (0.25-0.5 mM),>[1000 ppm,25 mM] actúa
como inhibidor.
c) Zinc
3) OXÍGENO
MANTENIMIENTO DE
EQUILIBRIO REDOX
REGULACIÓN DEL pH
INTRACELULAR
Alcoholes superiores o Aceites de fusel
• Remoción efectiva
• Incremento del nivel de dosaje de levadura.
• Temperaturas bajas de dosaje.
• Uso de presión en estados iniciales de Fermentación
• Optimizar la cantidad de aminoácidos en mosto
• Evitar incorporación de oxígeno luego del dosaje de levadura
Alcoholes Superiores
• La influencia de la formación:
• El mosto original, hasta 15°P, es lineal, luego se incrementa
sensiblemente.
• El oxigenar durante la fermentación primaria, conduce al
crecimiento celular, con esto disminuye la formación de ésteres
Ésteres
C H3
C 2H5
C H3 CO C C OOH + TPP
3 C 2H5 C O C OOH + C H3 C HOTPP
OH
Ácido -oxibutírico Acetaldehído activo Ácido -acetohidroxibutírico
ALDHEIDOS Y CETONAS
• Butanodiona Pentanodiona
CH3
.
C O
C O
CH2
CH3
Umbral 0,1 ppm Umbral 10 ppm
Sabor a manteca
SECUENCIA DE ASIMILACIÓN
• CLASE 1
• Aspártico, asparaguina, glutámico, treonina, serina, metionina
• CLASE 2
• Valina, iso-leucina, fenil-alanina, glicocola, alanina, tirosina.
• CLASE 3
• Lisina, histidina, arginina, leucina.
Teoría de formación del diacetilo
3
DIACETILO
200 1200
140
100 600
80 Necesidad de Valina
400
60
40
200
20
Transporte
0 0
0 20 40 60 80 100 120 160 180
Horas de Proceso
FAN Total Diacetilo
MECANISMO DE FORMACIÓN de Valina y
Butanodiona
CH3 CO COOH
Ac. PIRÚVICO
CO2
Acetoina
Valina
Butanodiol
MECANISMO DE FORMACIÓN de Isoleucina y
Pentanodiona
Threonina
&_Ceto Butyrato
CO2
&- Ceto-&-Hydroxy Butyrato 2,3 Pentanodiona
Oxidación Química
Pentanodiol
Isoleucina
MECANISMO DE FORMACIÓN de DIACETILO
MANTENIMIENTO DE
EQUILIBRIO REDOX
Ejemplos
450 80
400 70
350 60
300 50
250 40
200 30
150 20
100 10
50 0
0 -10
Fecha: 29/08/0730/08/0731/08/0701/09/07 02/09/0703/09/0704/09/0705/09/0706/09/07
3
Ejemplos
600 16 450 16
14 400 14
500
12 350 12
400 10 300 10
8 250 8
300
6 200 6
200 4 150 4
2 100 2
100
0 50 0
0 -2 0 -2
7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7 7
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/07
/0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0 /0
0/ 8 0/ 8 0/ 8 0/ 9 /09 0/ 9 0/ 9 /09 0/ 9 0/ 9 0/ 9 /09 0/ 9 0/ 9
/08
/08
/08
/09
/09
/09
/09
/09
/09
/09
/09
/09
/09
/09
29 30 31 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11
29
30
31
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
11
Buta ppb Penta ppb Temp. Buta ppb Penta ppb Temp.
3
Factores Internos
3
Factores Internos
3
Factores Externos (Microorganismos)
3
Compuestos Azufrados
Mercaptanos
Son compuestos muy dañinos al aroma de la cerveza,
parcialmente responsables por el defecto llamado “Light Struck”.
Pueden ser oxidados a disulfuros que son menos importantes en
el aroma de la cerveza.
Sulfuro de Dimetilo -DMS-
Relacionado con la calidad de la malta y la efectiva cocción del
mosto, la levadura no puede reducirlo por si misma.
CARACTERISTICAS DEL SO2
ADENOSIN-5- -KETO-ß-METIL
FOSFOSULFATO ACIDO ACIDO VALERICO
ASPARTICO
3-FOSFOADENOSIN-
5-FOSFOSULFATO ß -ASPARTILFOSFATO
SULFITO HOMOSERINA
SULFURO DE
ACETILSERINA O-ACETILHOMOSERINA PIRUVATO
HIDROGENO
HOMOCISTEINA
CISTEINA
TREONINA
METIONINA
SERINA
S-ADENOSILMETIONINA
GENERACION DE SO2 DURANTE LA FERMENTACION
DURANTE LA FERMENTACION
1,5
0,5
0
00 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15
Días de Fermentación
ppm SO2
Con SO4Ca Sin SO4Ca
8 DISPERSION
7 DE VALORES
6
5
4
3
2
1
0
SO2 Fin de Reposo SO2 Cerveza Recién Envasada SO2 Cerveza a los 15 Días
QUE IMPACTA SOBRE LA GENERACION DE SO2
4,0
3,0
2,0
1,0
0,0
WR WS WT WJ WV WW WX W1X WB WC WD WE
CONDUCIONES DE LEVADURA
ULTIMO COCIMIENTO
SE DOSIFICA CO2
65 65
14 14
55 55
12 12
10 45 10 45
8 8 35
35
6 6
25 25
4 4
15 15
2 2
5 5
0 0
-2 -5 -2 -5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Dioxido de Azufre
7 6,3 6,2
6 5,2 5,3
5
4
2,8 2,8
3 2,2 2,1
1,7 2,0 1,7 1,8
2 1,5
1
0
WW5- WW5- WW6- WW5- WX1- W1X1- W1X1- WX2- WX4- WX4- WX4- WX4- W1X4-
107 112 105 101 109 106 102 107 102 103 107 112 108
ACCIONES DE MEJORA TOMADAS
1,5
1
ENFRIAMIENTO
0,5
0
04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14
Dí as de Fe rme ntaci ón
ATMOSFERA CO2
SOLUCION DE KMS
CO2 2.5Kg
CO2 A TCC
LINTERNA
SEPARADORA
DE GOTAS
ENTRADA CO2
CO2 A TCC
LINTERNA CON
SOLUCION DE
KMS
ACCIONES DE MEJORA TOMADAS
ppm SO 2 ppm O 2
SO2 O2
10 0,18
9 0,16
8 0,14
7 0,12
6
0,1
5
0,08
4
3 0,06
2 0,04
1 0,02
0 0
Fin de Medidora Medidora Botella 1/2 Mes 1 Mes 3 Meses 4 Meses 5 Meses
Reposo Llena 30 Hrs
Alcoholes Superiores
• 2-metil propanol 5-20 ppm 10-(200) ppm Alcohol
• 2-metil butanol 10-20 ppm 10-(65) ppm Alcohol, solvente
• 3-metil butanol 35-70 ppm 30-(70) ppm Alcohol, banana
• 2-feniletanol 10-20 ppm 28-(125) ppm Rosas
Esteres
• Acetato de Etilo 5-30 ppm 25-30 ppm Frutal, quemado dulce
• Acetato de Isobutilo 0.1 ppm 0.4-(1.6) ppm Frutal, banana
• Acetato de Isoamilo 0.5-2.5 ppm 1.0-1.6 ppm Frutal, banana
• Butirato de Etilo 0.3 ppm 0.4 ppm Manzana
• Hexanoato de Etilo 0.1-0.3 ppm 0.12-0.23 ppm Jabonoso, Estérico
• Dedecanoato de 0.02 ppm 3.5 ppm Frutal, Fresas
Etilo 0.1-0.5 ppm 250 ppm
• Lactato de Etilo
Ácidos Orgánicos
• Butírico 0.2-0.6 ppm 1.2-2.2 ppm Queso, rancio
• Isovalérico 0.5-1.2 ppm 1.5-1.6 ppm Queso, lúpulo viejo
• Octanoico 3-10 ppm 10-13 ppm Oleoso
• Decanoico 0.8 ppm 10 ppm Rancio
• Dodecanoico 0.1-0.5 ppm 6 ppm Jabonoso
Dicetonas vecinales
• Diacetilo 0.1 ppm 0.10-0.15 ppm Dulce, manteca
• Acetoina 3 ppm 8-20 ppm Frutal
Compuestos
Sulfurados 0.03-0.12 ppm 0.10-0.12 ppm Vegetales cocidos
• Sulfuro de dimetilo
FERMENTACION
CURVA STANDARD
GRADOS BALLING
DIAS