ANÁLISIS

MICROBIOLÓGICO
DEL AGUA

Lic. TM Manuel Quintanilla C.

manuelqc8@gmail.com
El agua potable es aquella que cumple con los requisitos microbiológicos,
organolépticos, físicos, químicos, y radiactivos que establecen las normas
sanitarias de calidad de agua potable y que se considera apta para el
consumo humano.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
Se puede definir el análisis microbiológico como el
conjunto de operaciones encaminadas a determinar los
microorganismos presentes en una muestra problema de
AGUA.

E. coli

Proteus
vulgaris
 Inocuidad: que no contenga
patógenos

Aceptabilidad: que no
contenga niveles de
Objetivos del control microorganismos suficientes
microbiológico del agua para convertirlo en alterado
desde el punto de vista
organoléptico.

Estabilidad: que tenga una

calidad constante.
 Componentes de un análisis
microbiológico

Muestreo: Se debe realizar Método analítico: Se

de forma adecuada pueden emplear diversos Interpretación de resultados:
siguiendo protocolos métodos analíticos, Para ello se debe saber el
establecidos. Obteniendo eligiendo el más sensible significado de los
muestras estadísticamente para detectar lo que se microorganismos.
significativas. quiere.
 BACTERIA ENFERMEDAD/INFECCIÓN SÍNTOMAS
Diarrea muy líquida, con sangre y
Aeromonas Enteritis
moco
Gripe, diarres, dolor de cabeza y
Campylobacter jejuni Campilobacteriosis estómago, fiebre, calambres y
náuseas
Infecciones del tracto urinario, Diarrea acuosa, dolores de cabeza,
Escherichia coli meningitis neonatal, enfermedades fiebre, uremia homilética, daños
intestinales hepáticos

Náuseas, dolores de estómago y

Plesiomonas shigelloides Plesiomonas-infección diarrea acuosa, a veces fiebre,
dolores de cabeza y vómitos

Salmonella typhi Fiebre tifoidea Fiebre

Mareos, calambres intestinales,
Salmonella sp. Salmonelosis vómitos, diarrea y a veces fiebre
leve
Dolores de estómago, diarrea y
Streptococcus Enfermedad (gastro) intestinal
fiebre, a veces vómitos
Vibrio El Tor (agua dulce) Cólera (forma leve) Fuerte diarrea
FACTORES QUE INCIDEN EN LA FLORA
BACTERIANA
 La acidez disminuye el contenido de microorganismos.
 La materia orgánica lo aumenta.
 Mucho oxígeno disuelto disminuye los microorganismos
anaerobios.
 Las sales, si son abundantes, producen que el agua sea
casi estéril.
 La filtración disminuye el número de microorganismos.
 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los
diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que
transmiten enfermedades.

Enfermedad Agente

Fiebres tifoideas y Salmonella typhi,

Salmonella
paratifoideas Paratyphi A y B
Disentería bacilar Shigella
Cólera Vibrio cholerae
Gastroenteritis agudas Escherichia coli ET
y diarreas Campylobacter
Yersinia enterocolitica
Salmonella sp
Shigella sp
 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
Origen viral
Hepatitis A y E Virus de la hepatitis A y E Virus de la
hepatitis
Poliomielitis Virus de la polio
Gastroenteritis agudas Virus Nortwalk, Rotavirus,
y diarreas Astrovirus, Calicivirus,
Enterovirus, Adenovirus,
Reovirus

Origen parasitario Entamoeba

Disentería amebiana Entamoeba histolytica

Giardia lambia
Cristosporidium
 Al hacer el análisis de las aguas no buscamos tal o cual microorganismo
patógeno, es decir, no aislamos o identificamos los microorganismos patógenos
del agua, sino que averiguamos si esta tiene o no contaminación de origen
fecal.
Criterio sanitario para un agua de consumo humano (Real Decreto 140/2003)
Anexo I. Características microbiológicas
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
• Bacterias coliformes y Escherichia coli (E.
coli)
Métodos de • Enterococos
• Clostridium perfringens (incluidas las
análisis esporas)
• Enumeración de microorganismos
cultivables-Recuento de colonias a 22 °C

• Salmonelas
• Estafilococos patógenos
Otros tests • Bacteriófagos fecales
complementarios: • Enterovirus
• Protozoos
 Tres tipos de bacterias
del genero Las
enterobacterias o
Enterobacteriaceae
califican a tal fin:

Mesófilos aerobios : Pseudomonas:

Coliformes fecales: determinan señalan deterioro en
indican efectividad del la calidad del agua o
contaminación fecal. tratamiento de una
aguas. recontaminación.
Comprende los bacilos
aerobios o anaerobios
facultativos, no esporulados
que fermentan la lactosa de
35°C a 37°C con producción
de gas y acido en un periodo
de 24-48 horas.
COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES)
Los géneros que componen (término que designa a los coliformes de origen
este grupo son: Escherichia, exclusivamente intestinal) con capacidad de
Klebsiella, Enterobacter, fermentar lactosa 44°C ± 1°C con producción de gas
Serratia, Citrobacter y y acido en un periodo de 24 horas. habitan
normalmente en el intestino humano y de otros
Edwardsiella. animales de sangre caliente.
 La evaluación de la calidad
microbiológica de un producto

La demostración y la cuenta de
microorganismos coliformes, puede
realizarse mediante el empleo de
medios de cultivos líquidos o sólidos.
El uso de los coliformes
como indicador sanitario
puede aplicarse para:
La calidad sanitaria del agua y hielo
utilizados en las diferentes áreas del
procesamiento de alimentos.

Evaluación de la eficiencia de
prácticas sanitarias e higiénicas del
equipo.
 ESCHERICHIA COLI
Bacteria descubierta por el bacteriólogo alemán Theodor von Escherich
en 1860, quien lo denomino “baterium coli” (bacteria del intestino).
Bacilo Gram negativo, Aerobio o anaerobio facultativo no esporulado
que se caracteriza por poseer la enzima beta-galactosidasa, se
desarrolla a 44°C ± 1°C, fermenta la lactosa y el manitol produciendo
gas y acido, produce indol a partir de triptófano, es oxidasa negativo y
no hidroliza la urea.
Microorganismos cuya temperatura optima de crecimiento fluctúa
generalmente entre los 25-40°; en este grupo se encuentran la mayoría
de los contaminantes y patógenos para el hombre.

Limite permisible
Mesofílicos aerobios UFC/ml 100
El método se basa en la inoculación de alícuotas de la muestra diluida
o sin diluir, en una serie de tubos de un medio de cultivo líquido
conteniendo lactosa.

Los tubos se examinan a las 24 y 48

horas de incubación ya sea a 35 a-
37°C.
Se lleva a cabo la incubación de estos
medios selectivos hasta por 48 horas a
35 - 37 °C para la detección de
organismos coliformes y por 24 horas a
44.0 ± 1 °C para organismos coliformes
fecales (termotolerantes) y E. coli.
Limpiar perfectamente toda el área de
trabajo y desinfectar con alcohol de 96°
Homogenizar la muestra (esta deberá
estar a temperatura ambiente)
Tomar un volumen de 100 ml
Adicionar a cada tubo 9 ml de caldo lactosado a pH=7 estéril y
colocar una campana Durham invertida ( debe asegurarse de
sacar todas las burbujas de aire de la campana).Esterilizar. Poner a
temperatura ambiente
Tomar 1 ml de muestra e inocular al primer tubo, agitar con el fin de homogenizar
Tomar 1ml del primer tubo e inocular el segundo tubo, cerrar el primero.
Así sucesivamente con toda la serie de 10 tubos (serie de dilución 10-1 a 10-10)
Incubar por 24 horas a 35-37°C
Tubos positivos: Aquellos que
presenten turbiedad o formación de
gas en la campana
Tubos negativos. Aquellos que no
presentan turbiedad o formación de
gas en la campana.
Transcurridas las 24 horas observar la
turbiedad o formación de gas en la
campana
Preparar 3 series de 3 tubos con tapa rosca de
10 ml (estériles) por cada tubo positivo
resultante de la prueba presuntiva.
Adicionar a cada serie caldo verde brillante a
pH=7.2 estéril como se indica:
Serie 1 Adicionar a cada tubo 10ml
Serie 2 Adicionar a cada tubo 9ml
Serie 3 Adicionar a cada tubo 9.9ml

Colocar una campana Durham invertida en cada tubo (debe asegurarse de

sacar todas la burbujas de aire de la campana).Esterilizar. Poner a
temperatura ambiente
Tomar 0.1ml del tubo positivo resultante de la prueba presuntiva e inocular
el primer tubo, agitar con el fin de homogenizar, cerrar. Así sucesivamente
en todas las 3 series de 3 tubos
Revisar cada tubo y sacar todas las burbujas de aire de la campana.
Incubar por 24hrs a 44°C (registrar hora de inicio del conteo total de horas)
Transcurridas las 24 horas observar la turbiedad o formación de gas en la
campana
Registrar tubos positivos y negativos
Reportar el índice del NMP/100 ml
Prepara 3 series de 3 tubos con tapa rosca de bakelita de 10ml (perfectamente limpios y estériles) por
cada tubo positivo resultante de la prueba presuntiva.
Adicionar a cada serie (agua de triptona + L o DL triptófano) a pH=7.5 estéril como se indica:
Serie 1 Adicionar a cada tubo 5ml
Serie 2 Adicionar a cada tubo 4ml
Serie 3 Adicionar a cada tubo 4.9ml
Colocar una campana Durham invertida en cada tubo (debe asegurarse de sacar todas la
burbujas de aire de la campana).Esterilizar. Poner a temperatura ambiente

Tomar 0.1ml del tubo positivo resultante de la prueba presuntiva e inocular el primer tubo, agitar
con el fin de homogenizar, cerrar. Así sucesivamente con todas las 3 series de 3tubos.

Revisar cada tubo y sacar todas las burbujas de aire de la campana.

Incubar por 24 horas a 44°C (registrar la hora de inicio del conteo total de horas)
Transcurridas las 24 horas
observar la turbiedad o
formación de gas en la
campana

Registrar tubos positivos y

negativos
Reportar el índice del
NMP/100 ml
Preparar 1 placa o caja Petri
(perfectamente limpia y estéril)
etiquetarla e incluir una caja in
inoculo como testigo de
esterilidad.

Tomar 1ml de muestra y

colocarlo en la caja, agregar
de 12 a 15ml de agar nutritivo,
y homogenizar.
Colocar la tapa de la caja a medio abrir y dejar que se seque y solidifique

Una vez seca y solidificada tapar completamente

Incubar las cajas en posición invertida (la tapa hacia abajo) por
24 horas a 35°C
Transcurridas las 24 horas contar
todas las colonias desarrolladas
(excepto las de mohos y
levaduras) incluyendo las
colonias puntiformes.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS AEROBIAS
1.FUNDAMENTO
Las bacterias aerobias son todas las bacterias heterótrofas, aerobias o
anaerobias facultativas, mesófilas y psicotróficas capaces de crecer en un
medio de agar nutritivo. Este recuento de colonias es útil para evaluar el
estado de los recursos de agua en su origen y la eficacia del proceso de
tratamiento de las aguas. De igual modo, permite detectar cambios
anómalos en el número de microorganismos en la red de distribución.

2.MÉTODO
Este método se basa en contar el nº de colonias desarrolladas en una
placa de medio de cultivo sólido, en el que se ha sembrado un volumen
conocido de agua muestra, transcurrido un tiempo y una temperatura de
incubación determinados.
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO: BACTERIAS AEROBIAS
3.PROCEDIMIENTO
Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno. Inocular el
caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua
problema expresados en 10-1, 10-2, 10-3. De cada dilución depositar 1 ml en
cada placa de Petri. Verter 30 ml de medio de cultivo de agar en cada
placa y dejar solidificar (5-10min), invertir las placas y meterlas en la estufa
a 37ºC (+/-1ºC), incubar durante 48h.

4. LECTURA Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS

Transcurridos 48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en cada
placa. El resultado se expresará, como nº de bacterias totales en 1 ml.
 Se estima utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80
colonias de coliformes y no más de 200.
 OTRAS DETERMINACIONES
Sólo en el caso de un brote epidémico se lleva a efecto la
investigación de microorganismos transmitidos a través del
agua:
•Salmonelas, Shigella, Vibrio cholerae
•Estafilococos patógenos
•Bacteriófagos fecales
•Enterovirus
•Protozoos