UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

Agar Levine o EMB

 ¿Quién lo desarrollo?

En 1904, Endo desarrolló un medio de

cultivo para el aislamiento de Bacilos
tifoideos de las heces.

Holt-Harris y Teague, la principal

desventaja del Endo-medio fue que el
color rojo de las colonias coliformes se
difundió a través del medio
circundante.

Cuando un mayor número de estos colonias estaban

presentes en la superficie del agar, las colonias incoloras
de los organismos tifoidea y otros no fermentadores de
lactosa fueron enmascarado y a menudo pasado por alto.
 Levine simplificó la
fórmula original
mediante el uso de
En 1916, estos dos La formulación
científicos una sola peptona original de Agar
como base y de EMB de Holt-
informó sobre el
completándola con Harris y Teague
desarrollo de un
dipotassium
nuevo medio en el fue modificado por
que fosfato como Levine, quien
tampón y describió su medio
tintes, eosina y azul
eliminando la en 1918
de metileno, se
sacarosa y
incorporaron. publicación.
aumentando la
concentración de
lactosa.
 ¿Qué es el Agar Levine?

* Es un medio utilizado para el aislamiento

de bacilos Gram negativos y microorganismos
coliformes.

* Permite el desarrollo de todas las especies

de la familia Enterobacteriaceae.

* Se utiliza con frecuencia para el aislamiento

de Escherichia coli.
¿Cuál es su composición?
 Método

Suspender
36 g de
polvo.
Distribuir
1 litro de
en placas
agua
Petri
purificada.
estériles.

Esterilizar
en autoclave Reposar 5
a 121 C minutos.
durante 15
minutos.

Llevar a
Calentar
ebullición
con
total hasta
agitación
disolución
frecuente.
completa.
 Procedimiento

Recolectar las muestras

y sembrarlas tan pronto
lleguen al laboratorio, • Paso 1
sembrando las placas
por estría.

Incubar las placas 35-

37°C durante 18 a 24
horas y observar el • Paso 2
crecimiento

Las colonias de Salmonella y

Shigella son translucidas de
color ámbar o incoloras. Los
coliformes que utilizan la
lactosa son azules o negras
con brillos metálicos.
 Aplicaciones

1.

Es un medio diferencial similar al Agar Levine y es

utilizado para el aislamiento de Enterobacterias.

2.
El uso de EMB permite la diferenciación entre
organismos fermentadores y no fermentadores de
lactosa. Es muy utilizado en bacteriología médica.
Por la combinación de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se
pueden distinguir algunos géneros:

1.

Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas

(Salmonella y Shigella) dan colonias incoloras

2.
Las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias
púrpura-violeta negruzco con/sin un centro oscuro y
quedan rodeadas de una zona incolora

3.

Queda inhibido el crecimiento de la microflora

acompañante, sobre todo la Gram-positiva.
 Limitaciones

Este medio de cultivo es

moderadamente inhibitorio
En el caso de los
ya que las cepas de Para la identificación de
microorganismos
enterococo y candida genero o especie se deben
fermentadores, no se puede pueden desarrollarse en el realizar pruebas
diferenciar el carbohidrato mismo, observándose como bioquímicas adicionales.
metabolizado. colonias de tamaño
puntiforme

Conservar el medio
preparado en placas a 2-8
Durante la esterilización el
oC y protegido de la luz ya
azul de metileno puede
que los indicadores
precipitar. Es importante
presentes son fotosensibles
resuspender el precipitado
y pueden inhibir el
mientras se distribuye en
desarrollo de algunas
cajas Petri estériles.
especies de Proteus si no se
conservan apropiadamente.
 Precauciones

Solamente para uso diagnostico in vitro.

Uso profesional exclusivo.

No utilizar el producto si al recibirlo su

envase esta abierto o dañado

No utilizar el producto si existen signos

de contaminación o deterioro, así como
tampoco si ha expirado su fecha de
vencimiento.
 Considerar las muestras como
potencialmente infecciosas y
manipularlas apropiadamente siguiendo
las normas de bioseguridad establecidas
por el laboratorio

Descartar el producto que no ha sido

utilizado y los desechos del mismo según
reglamentaciones vigentes