Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
bronchoalvéolaire)
• Ponction à l’aiguille d’un liquide (épanchement de séreuse ou articulaire, liquide
céphalorachidien, kystes,…)
ou mammaire,…)
• D’une autopsie
d’identification unique qui sera retranscrit sur les blocs et les lames qui seront
• • l'identité du patient : nom, prénom, date de naissance, sexe. • le siège, la date (jour
une biopsie d'artère temporale représentative doit mesurer au moins 1,5 cm)
• leur nombre : plus elles sont nombreuses, plus on a de chance de trouver du tissu
• Les autopsies médicales sont distinctes des dissections anatomiques qui sont
pratiquées dans les Laboratoires d'Anatomie pour l'enseignement des
étudiants en anatomie et pour la recherche,
• Les autopsies médico-légales sont pratiquées sur ordre de la justice (réquisition du
procureur ou ordonance d’un juge d’instruction).
• Elles les ont habituellement par un médecin expert inscrit sur les listes de la Cour d’Appel,
mais tout médecin peut être désigné.
• Les autopsies sont pratiquées dans tous les cas de mort suspecte, notamment lorsqu’il n’y a
pas eu délivrance de permis d’inhumer (cf case « obstacle médico-légal » sur les certificats
de décès.
• Les autopsies à but scientifique sont pratiquées dans les hôpitaux, généralement par les
médecins anatomo-pathologistes, à la demande des médecins qui ont soigné le patient
pendant son séjour à l'hôpital, éventuellement à la demande d'un médecin traitant pour un
patient décédé à son domicile.NON
• pièce opératoire Etude macroscopique
• Cette technique moins répandue consiste à recueillir les cellules par ponction
(séreuse, organe plein,…) ou frottis (col utérin) et à les transmettre au
laboratoire dans un liquide conservateur.
• Enfin, les cellules sont transférées en couche mince sur une lame, sur une
pastille de taille déterminée.
• 3) Cytocentrifugation sur lame de
verre
•
• Le liquide (naturel, ou
d’épanchement, ou de lavage)
cellulaire,
prélèvement.
• Pour les biopsies de petite taille, des fixateurs à base d'alcool peuvent
être utilisés
• fixation encore plus rapide mais effet délétère sur certains antigènes ce
qui peut nuire à des techniques particulières d’immunohistochimie).
• Le protocole de fixation dépend de la technique utilisée :
Microscopie photonique, Microscopie életronique à
transmission (MET), Microscopie électronique à balayage
(MEB).
• les poumons peuvent être fixés par insufflation d’une solution de formol dans les
bronches ou coupés en tranches.
• Seuls les cerveaux de nécropsies seront plongés dans une solution de formol
sans être tranchés en raison de la fragilité de la substance cérébrale.
• La durée de la fixation dépend de la taille du prélèvement : au minimum 2
à 5 heures pour une biopsie et 48 heures pour une pièce opératoire.
• Les prélèvements calcifiés (os, certaines tumeurs) doivent être sciés, puis
fixés, puis plongés dans une solution décalcifiante (acide) avant d'être
inclus dans la paraffine, ce qui rallonge la durée de la technique.
Fixation par des méthodes physiques
1. La dessication est une méthode trés simple. Elle consiste a laisser I’eau
s’ évaporer a l’air libre et a température ambiante.
très bien les tissus. Par contre les activités enzymatiques sont quasiment
perdues.
• Tétraoxyde d'osmium: Il s'agit d'un agent oxydant, il complète l'action d'un
fixateur avant l'inclusion en microscopie électronique. Il est toxique et oxydant.
dégrade les protéines.
• L'acétate d'uranyle: réagit avec les lipides et les acides nucléiques. Surtout
utilisé pour renforcer le contraste des structures.
• Autres moyens: congélation brutale afin de vitrifier l'eau . Cela évite les
traitements chimiques très toxiques et nocifs.
Avantage et inconvénients des fixateurs
• le formol seul ou formaldéhyde dilué dans l’eau courante
• économique,
• incolore,
• permet la fixation de grosses pièces,
• MAIS
• allergisant,
• carcinogène
• Il n’y a pas de fixateur idéal
• peu pénétrant.
• MAIS
• idéal pour les biopsies
• Bouin (Acide acétique Formol Acide picrique)
• rapide,
• pénétrant,
• légères rétractions tissulaires,
• MAIS
La déshydratation
durcissement.
des tissus.
• L’éclaircissement : 3 bains de toluène à 100% qui servent à remplacer
l’alcool dans les tissus afin que celui-ci soit miscible avec la paraffine.
• chimiquement inerte ;
• doit être perméable aux réactifs, doit pouvoir polymériser, sans libérer de
sous-produits ;
• <0,6µm.
• Les résines hydrosolubles:
• - En photonique : 3 avantages :
• sont hydrosolubles.
Remarque :Pour la ME
• Les coupes ultrafines des blocs sont réalisées grâce à un
ultramicrotome qui permet
• d'obtenir des coupes ultrafines d'environ 80 nm d'épaisseur.
Les coupes sont recueillies sur des grilles de cuivre.
• 2 à 5 μm d’épaisseur,
• (7µm à 40µm)
Coupes de tissus fixés ou non fixés
Congélation à l'azote liquide
• Observations:
Microscopie photonique
Microscopie à fluorescence (ApoTome)
Avantages
• Technique rapide, de choix pour la mise en évidence d’antigène
‘difficiles’, antigènes liposolubles…
Possibilité de travailler sur tissus fixés ou non fixés
Pas de dégradation des sites antigéniques : Protéine (enzyme,
récepteur, mARN …) substance chimique (neurotransmetteur…)
Ø Pas d’inclusion
Ø Pas de déshydratation
Ø Pas de polymérisation
Ø Pas de chaleur
Ø Pas de réactions chimiques
Inconvegnants
• Technique difficile à maîtriser, coupes souvent irrégulières
Préservation morphologique variable selon les tissus, présence de
cristaux de glace (trous)
Ultramicrotome (s)
• (0,25µm à 2µm)
Coupes de tissus fixés
Imprégnation en résine epoxy
(50nm à 100nm)
• Observation:
Microscopie photonique
MET
Scanner de lames-Nanozoomer
Applications
• Microscopie photonique coupe fine de 1µm
1-Contraste des structures au bleu de toluidine
2-Etude qualitative et quantitative, coupes sériées :
analyse d'images et comptage
Microscopie électronique à transmission (MET)
1-Immunomarquages des structures fines en MET:
« Pre-embeding et Post-embedding »
Avantages
Reconstitution en 3D
• Technique de coupe difficile à maitriser:
• Mise au point selon les tissus
• Difficultés de coupes pour les spécimens de dureté hétérogène
• Problèmes de pénétration des anticorps sur coupes épaisses
• Les colorants acides ont une bonne affinité avec les substances alcalin
es, ils mettent en évidence des tissusbasiques donc acidophiles.
• éosine (rouge)
• acide picrique (jaune)
• vert rapide
• Orange G
• fuchsine acide (rouge)
• érythrosine
Colorants basiques
• Fixateur(pH,VOLUME,TEMPS),colorants(concentration,pureté,
• filtration,changement régulier des bains),l’épaisseur de coupe du
tissu.
• Chaque étape est importante pour l’obtention du matériel d’analyse.
NON