Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC.
COLORAŢII UTILIZATE IN
BACTERIOLOGIE
LP 3
MORFOLOGIA BACTERIILOR
Organisme unicelulare, procariote
MORFOLOGIA BACTERIILOR
• Forma bacteriilor:
• - stafilococi - (Staphylococcus).
• Microscopului optic
• Microscopul cu fond întunecat
• Microscopul cu contrast de fază
• Microscopul cu fluorescenţa
• Microscopul electronic cu transmisie
• Microscopul electronic cu baleaj (scanning)
MICROSCOP OPTIC
MICROSCOP ELECTRONIC
Imagini – microscop fond intunecat
Metode microscopice în bacteriologie
I. Preparatul nativ
(umed, între lamă şi lamelă)
Utilizat : sediment urinar,
materii fecale-diaree,
preparate umede recoltate din
micoze superficiale
Permite studierea:
• mobilităţii germenilor;
• morfologiei bacteriene.
Tehnica de lucru – se realizeaza
o suspensie de microorganisme
vii cu SF intre lama si lamela( sau KOH pt. fungi).
Examinarea se face cu:
• microscopul optic, cu obiective uscate.
• microscopul cu fond întunecat;
• microscop cu contrast de fază:
Metode microscopice în bacteriologie
Tehnica de lucru:
• microorganismele se suspensioneaza intr-o picatură de
colorant
• se examineaza cu microscopul optic, cu imersie.
• Se colorează fondul preparatului, iar bacteriile rămân
necolorate
Metode microscopice în bacteriologie
• III. Preparate colorate
Permit studierea:
• morfologiei germenilor;
• dispoziţiei germenilor;
• afinităţii tinctoriale (colorabilitatea):
Etapele realizării frotiurilor:
• etalarea - întinderea cu grijă a preparatului
patologic (pp) pe lamă (să nu atingă marginile);
• uscarea la temperatura camerei;
• fixarea (la flacără sau chimică)
Coloraţii simple
Coloraţia cu albastru de metilen:
• - se acoperă frotiul cu soluţie A.M.,
• - se lasă în repaus 1-2 minute;
• - se spălă cu apă distilată;
• - se aşează frotiul în stativ pentru uscare;
• - se examinează la microscop;
• - se notează observaţiile şi se interpretează rezultatele.
• bacterii colorate în albastru închis, cu un halou
necolorat (dacă sunt capsulate),
• diferite celule şi celulele inflamatorii (nucleul are o
culoare albastru mai închis, citoplasmă are nuanţe de
albastru);
• se pot observa destul de bine detaliile de structură.
Coloraţia cu albastru de metilen
• secretie genitala 100X Elemente tip Candida 100X
Coloratii compuse-Coloraţia Gram:
• se acoperă frotiul cu violet de gentiana, 1-2minute;
• se îndepărtează colorantul;
• se acoperă frotiul cu lugol (fixator), 1-2 minute;
• se îndepărtează lugolul;
• se acoperă frotiul cu un amestec de alcool-acetonă (1 parte acetonă/3 părţi alcool
de 96°), rapid, 25-30 secunde;
• se spălă insistent cu apă
• se acoperă frotiul cu fucsină diluată 1/10 pentru 1 minut;
• se spălă cu apă;
• se aşeză frotiul în stativ pentru uscare;
• se examinează la microscop;
• se notează observaţiile şi se interpretează rezultatele:
• dacă frotiul a fost realizat din colonia izolată se pot vedea: microorganisme cu
aceeaşi formă şi dimensiune , cu o anumită dispoziţie, cu sau fără capsulă, Gram
pozitive (violet) sau Gram negative (roşii); levuri colorate în violet;
• dacă frotiul a fost realizat din p.p. se pot vedea diferite celule, PMN (nucleul şi
citoplasmă apar în nuanţe de roşu), bacterii Gram pozitive şi/sau Gram negative,
levuri etc;
Coloraţia Gram
Frotiuri din sputa, colorate Gram: stanga - coci Gram pozitivi in diplo si lanturi scurte (Str.
pneumoniae); centru- cocobacili Gram negativi intra si pericelular (Haemophilus influenzae );
dreapta- levuri /pseudofilamente(x100)
Coloraţia Gram
Coloratia Gram: Stanga- bacili Gram negativi; coci Gram pozitivi in gramezi –Centru si in
lanturi - dreapta; (X100)
Bacillus
Antrax Koch 1876
anthracis
Neisseria
Gonoree Neisser 1879
gonorrhoeae
Salmonella
Febra tifoida Eberth 1880
Typhi
Mycobacterium
Tuberculoza Koch 1882
tuberculosis
Imunohistochimie
• Coloratia Ziehl-Neelsen
– Evidentierea micobacteriilor (BK, lepra)