Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
• Sunt prezentate estimări conservative ale frecvenţelor alelice pentru populaţia cauc
recomandate pentru utilizare de către producătorul setului AmpFlSTR® Identifiler® P
Numerotarea alelelor reflectă numărul de repetări în tandem conţinute în această alelă
a) În urma comparării profilului genetic a victimei (proba Nr.421-2011) cu profilul genetic din
proba Nr.425-2011, adică mecanismul de fixare din faţă a coşului căruţei, s-a depistat o
coincidenţă de 100% pentru toate alelele din cele cincisprezece locusuri polimorfe,
conţinând repetări tetranucleotidice, plus markerii de sex - Amelogenin (tabelul 2), alelele
care constituie “profilul genetic a victimei”.
a) În urma comparării profilului genetic a victimei (proba Nr.421-2011) cu profilul genetic din
proba Nr.426-2011, adică două porţiuni din gloabele căruţei, s-a depistat o coincidenţă de
100% pentru toate alelele din cele cincisprezece locusuri polimorfe, conţinând repetări
tetranucleotidice, plus markerii de sex - Amelogenin (tabelul 2), alelele care constituie
“profilul genetic a victimei”.
a) Compararea profilului genetic a victimei (proba Nr.421-2011) cu profilul genetic din proba
Nr.423-2011, adică toporaş, este imposibilă deoarece după efectuarea tuturor etapelor de
extragere şi amplificare a ADN-ului, s-a depistat că pe toporaş (proba Nr.423-2011) nu
există ADN uman detectabil.
Metode de
analiză a genelor
Expresia genelor
ADN ARNm Proteină Caracter
5’-ATTGCAAGATTACCATGT-3’ Catena codogenă (netranscrisă)
3’-TAACGTTCTAATGGTACA-5’ Catena anticodogenă (transcrisă)
Transcripţie
5’-AUUGCAAGAUUACCAUGU-3’ ARNm
Translaţie
Translaţie
Analiza ADN:
• depistarea mutaţiilor genice → diagnostic precis al bolilor
genetice (prenatal, postnatal precoce);
• identificarea polimorfismului individual → dactiloscopie
genomică (analiza filiaţiei);
• depistarea ADN străin (bacterian, viral) → diagnosticul bolilor
infecţioase şi gradului de infectare.
Analiza ARNm:
• analiza expresiei genice ţesut-specifică;
• evaluarea gradului de expresie a genei normale / patologice;
• Depistarea agenților infecțioși (ribovirusuri).
Obţinerea FR – fragmentelor de restricţie prin
acţiunea specifică a ER (enzimelor de restricţie)
RFLPs – polimorfismul FR la două persoane X şi Z
-
12 kb
10 kb 10 kb
8 kb
6 kb 6 kb
2,5 kb
10 kb 5 kb
6 kb 4 kb
5 kb
2,5 kb
2 kb
+
M
PCR – reacția de polimerizare în lanț
Dezavantajele PCR
• Necesitatea cunoaşterii secvenţei nucleotidice
amplificate
• Necesitatea primerilor sintetici, specifici secvenţei
analizate
Utilizarea PCR
• Identificarea inserţiilor/deleţiilor nucleotidice
• Identificarea mutaţiilor punctiforme
(substituţiile nucleotidice)
• Identificarea expresiei genice (RT-PCR)
• Dactiloscopia genomică (filiaţie)
• Identificarea agenţilor infecţioşi
• Identificarea gradului de infecţie (quantitative
PCR)
• Identificarea produselor PCR în timp real
(Real-Time PCR)
Identificarea inserţiilor / deleţiilor
Identificarea mutaţiilor punctiforme
Identificarea agenţilor infecţioşi
Stabilirea paternităţii (filiaţiei)
Optimizarea condiţiilor de desfăşurare a PCR
Concentraţiile critice ale substanţelor pentru inhibarea activităţii Taq-polimerazei
5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’ 24 54 59
ACE
5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’ 25 48 58
5’-CTGGCTCCTTGCTGGTGTGG-3’ 20 65 58
AT1 R
5’-GGGCAAGCGTATATTTTCTGGTG-3’ 23 48 55
5'-AAGGCAGGAGACAGTGGATGGA-3' 22 55 57
NOS
5'-CCCAGTCAATCCCTTTGGTGCTCA-3' 24 54 59
M 1 2 3
G
T
C (mm)
B (Nm)
A (NN)
Dezavantajele Southern-blot
• Necesită cunoaşterea hărţii de restricţie a genei ţintă
• Necesită cantităţi mari de material biologic
• Metodă îndelungată, cu multe etape
• Necesită izotopi radioactivi
• Necesită materiale costisitoare
Tehnica Northern-
blot
• Extragerea ARN din
ţesutul ţintă
• Electroforeza ARN în
condiţii de denaturare
• Transfer pe membrană de
nailon
• Hibridarea cu sonda
marcată
• Autoradiografia
Tehnica Northern-blot
• Utilizarea în paralel
a nucleotidelor ce
conţin deoxiriboză
şi dideoxiriboză
• Stoparea sintezei în
cazul incorporării
ddNTP
5’-ATTACAAGATTACCATGT-3’ catena codogenă
3’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’ catena anticodogenă (matriţă)
3’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’
5’-ATTAC-3’
3’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’
5’-ATTACAAGATT-3’
5’-ATTACA-3’
5’-ATTACAA-3’
A 5’-ATTACAAGA-3’
5’-ATTACAAGATTA-3’
5’-ATTACAAGATTACCA-3’
A T C G
5’-ATTACAAGAT-3’ -
5’-ATTACAAGATT-3’
T
5’-ATTACAAGATTACCAT-3’
5’-ATTACAAGATTACCATGT-3’
5’-ATTACAAG-3’
G
5’-ATTACAAGATTACCATG-3’
5’-ATTAC-3’
C 5’-ATTACAAGATTAC-3’ +
5’-ATTACAAGATTACC-3’ 5’-ATTACAAGATTACCATGT-3’
Tehnica dideoxi
Extragerea ADN
Denaturarea ADN
+
Metoda automată
Hibridarea
in situ
• Pregătirea
preparatelor de
cromozomi
• Denaturarea ADN
• Hibridarea cu sonda
marcată
• Vizualizarea la
microscopul optic
Hibridarea in situ pentru
depistarea secvenţelor ADN