Universidade Federal de Sergipe

Disciplina: Genética Básica

Replicação do DNA
Prof. Msc. Jordana Dantas Rodrigues Reis

Dezembro, 2019
REPLICAÇÃO DO DNA
 Replicação
Processo pelo qual uma célula duplica seu DNA antes da divisão;

A informação genética deve ser copiada fielmente a cada divisão;

Elas são capazes de se dividir

A replicação deve ocorrer em alta velocidade e fidelidade a cada 20min Replica o DNA
com velocidade de 1000
Ex.: E. coli possui 4,6 milhões de bp nucleotídeos por segundo,
com menos de 1 erro por
O genoma humano possui aproximadamente 3,2 bilhões de bp bilhão de nucleotídeo.
Onde ocorre?
 Replicação Semiconservativa
Complementaridade das fitas – cada filamento serve como
molde para síntese de um novo filamento;

Pareamento específico de bases;

Um dos filamentos complementares parental é conservado.

o Molécula original de DNA é metade (semi) conservada
Replicação Bidirecional
 Modos de replicação

 A replicação difere quanto a natureza do DNA molde, se ele é linear ou circular;

Três modos de replicação:

Replicação em teta – encontrada em bactérias

Replicação em círculo rolante – ocorre em alguns vírus

Replicação eucariótica linear

Replicação teta (θ)
Replicação em círculo rolante
Replicação Linear
 Origem de replicação
Cromossomos bacterianos e virais – 1 origem de replicação;

Cromossomos eucariontes – varias origens controlam a

replicação

Cada origem controla a replicação de uma

unidade de DNA (réplicon)
 Requisitos da Replicação

 Molde de DNA;

 Matéria prima – trifosfato de desoxirribonucleosídeos (dNTP);

 DNA Polimerase – enzima que catalisa a adição de nucleotídeos a

fita de DNA;

 Primers – fornece um grupo 3’-OH

 Sentido da replicação
Sentido da replicação é 5’ 3’
Replicação Contínua e Descontínua
 Estágios da Replicação

Iniciação;

Alongamento – adição de nucleotídeos;

Término – quando duas forquilhas de replicação se encontram; ou sequencias

específicas bloqueiam a replicação.
 Permissão para a replicação
Todo o genoma deve ser replicado com precisão, de uma vez, em cada ciclo
celular, de modo que nenhum gene fique sem replicar;

A replicação exata é feita pelo inicio da replicação em duas etapas:

1º: as origens são liberadas, aprovadas para a replicação – o fator de liberação da
replicação liga-se a uma origem (complexo de reconhecimento de origem).

2º: a maquinaria de replicação inicia a replicação em cada origem de liberação

 Permissão para a replicação
• O complexo de reconhecimento de origem (ORC), liga-se as origens e desenrola
o DNA;

• O fator de liberação (MCM) – contém uma helicase que desenrola a fita;

• MCM liga-se ao DNA para que a replicação tenha inicio em uma origem;

• Proteína Geminina – impede que o MCM se ligue ao DNA e reinicie a replicação

nessa origem;
 Deselicoidização
Participação de várias helicases, proteínas de ligação unifilamentar (SSB) e
topoisomerases;

 As helicases: são enzimas que rompem as pontes de hidrogênio que mantêm os

dois filamentos da dupla hélice juntos;

 O DNA desenrolado é estabilizado por proteínas de ligação à fita simples

(SSB), que se ligam ao DNA unifilamentar e impedem a reestruturação do
dúplex.
DNA polimerase em Eucarióticos
Atividade de
primase, produz
primer de RNA e
uma seq curta de
nucleotídeos de
DNA. Em seguida
a Pol delta continua
a síntese.

Pol Translesão
são usadas para
ultrapassar
distorções do
molde de DNA
 Montagem do nucleossomo
Estrutura do nucleossomo é rapidamente reorganizada;

Os nucleossomos se desfazem durante a replicação e são remontados a partir de

uma mistura de histonas antigas e novas;

Reorganização requer duas etapas:

1ª redistribuição das histonas preexistentes
2ª a formação de novos nucleossomos
 Replicação das Pontas dos Cromossomos
O grupo 3’-OH para a replicação pelas polimerases é dado pelos primers de
RNA, sintetizados pela primase;

Esses primers precisam ser removidos e substituídos por nucleotídeos de

DNA;

Após o primer ser removido, os nucleotídeos de reposição podem ser

adicionados a esse grupo 3’-OH.
 Telômeros e telomerase
Os telômeros são constituídos por sequências repetidas e ligadas por múltiplas
proteínas interativas teloméricas. Em mamíferos, contém repetições de
TTAGGG seguido de protuberâncias de cadeia simples 3 'ricas em G;

As extremidades dos cromossomos eucarióticos são replicadas por um RNA -

enzima protéica chamada telomerase. Esta enzima adiciona extra nucleotídeos
para a cadeia de DNA rica em G do telômero.

Ponta do 5’- CCCCAA

cromossomo 3’- GGGGTTGGGGTTGGGG G Para o centrômero
 Sem a telomerase os cromossomos são encurtados após cada
divisão celular.

Sem telomerase Com telomerase

 Tamanho do telômero e envelhecimento em
humanos
O encurtamento do telômero pode contribuir para o processo de
envelhecimento;

Gene não funcional da telomerase – telomerase não expressa – encurtamento

sucessivo dos telômeros
 Tamanho do telômero e envelhecimento em
humanos
 Algumas síndromes estão associadas a
replicação dos telômeros;

 Síndrome de Werner – doença

autossômica recessiva, com sinais de
envelhecimento prematuro;

 Deficiência da helicase RecQ que está

associado a replicação eficiente dos
telômeros .
 PCR
• Objetivo: Amplificar uma sequência específica do DNA.

• Simula em laboratório a replicação do DNA

 Componentes da PCR
• DNA molde
• 2 Primers (Forward e Reverse)
• Taq DNA Polymerase (Thermus aquaticus)
• dNTPs
• Cloreto de Magnésio
• Tampão da reação
 Fases da PCR
1) Desnaturação
 94º - 95ºC (30-60s)

2) Anelamento
 40º-70ºC (30-60s)

3) Extensão
 72ºC (30-60s)

 Média - 40 ciclos
Como é feito no laboratório