MÉTODO DE DETERMINACIÓN POR SIEMBRA EN PROFUNDIDAD

INGENIERO: Dr. Andrés Corcino Rojas Quinto

CURSO: Análisis Cuantitativo Químico Orgánico
GRUPO: VB
INTEGRANTES:
Cuicapuza Perez Jhenifer IQA
Egoavil Coca Greysi IQI
Landa Chagua Giovanni IQA
Morales Basilio Jhan IQI
Ramírez Castañeda Fiorela IQA
Ruiz Jiménez Raquel IQI
Salazar Marcelo Dheybys IQI
Surichaqui Ramos Litman IQI
Vasquez Rivas Mayeli IQI
Tovar Orellana Ivan IQI
 RESUMEN
La calidad del agua se define como el conjunto de caracteres físicos químicos y
biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea
segura para el fin destinado.
La contaminación del agua por materia fecal es un factor de importancia sanitaria
debido a que las heces contienen una gran variedad de microorganismos, pudiendo
contener inclusive microorganismos enteropatógenos como bacterias del género
Salmonella, Shigella y Vibrio; protozoarios como Entamoeba histolytica; virus como
enterovirus o de la hepatitis A.
Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parámetro físico químico y
biológico. Los parámetros bacteriológicos tienen mayor importancia para
dictámenes higiénicos ; es preciso hallar el número de gérmenes saprófilos o de
coli y de bacterias procedentes del intestino humano como indicadores de
la contaminación.
Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes,
pertenecientes a las enterobacterias que fermentan lactosa con producción de gas
y ácido. Para determinar el número de estas bacterias se suele emplear medio
selectivo de endo.
 OBJETIVOS
OBJETIVOS

Objetivo General
Conocer el método de determinación por siembra en profundidad.
Objetivos Específicos
Conocer el reglamento de análisis de calidad de agua para consumo
humano en el Perú.
Identificar los microorganismos presentes en el agua.
Conocer algunas enfermedades ocasionadas por los microorganismos
patógenos presentes en aguas.
Conocer el fundamento teórico del recuento en placa.
 INTRODUCCION
La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres físicos químicos y
biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea
segura para el fin destinado (DGCOH, 1982).
Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores:
a) Físicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad específica, sólidos, pH.
b) Químicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxígeno Disuelto), DBO
(Demanda Bioquímica de Oxígeno).
c) Biológicos. El método microbiológico para detectar la presencia de microorganismos
coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba Presuntiva, Prueba Confirmativa,
Prueba Completa.
Los parámetros físico-químicos dan información extensa de la naturaleza de las
sustancias químicas del agua y sus propiedades físicas, sin aportar información de su
influencia en la vida acuática; los métodos biológicos aportan esta información, pero no
señalan algo acerca del contaminante o contaminantes responsables.
La determinación de microorganismos indicadores de contaminación fecal permite poner
de manifiesto que el agua, ha sido contaminada con materia fecal y su posible
transmisión de enfermedades causadas por organismos enteropatógenos (bacterias que
viven y se desarrollan en la cavidad entérica –intestino grueso- de animales de sangre
caliente).
 CALIDAD DEL AGUA

El agua es un elemento esencial para la vida y es útil para todos los usos domésticos
incluida la higiene personal, de ahí la importancia de que todos deben disponer de un
abastecimiento satisfactorio (suficiente, salubre y accesible).
Entre los efectos nocivos del agua contaminada, destacan sobre todo los relacionados a
la salud (intoxicaciones, enfermedades infecciosas y crónicas, muerte). Las causas de
contaminación del agua pueden deberse a la entrada de agua contaminada procedente
del subsuelo a las tuberías por la presión baja en el interior de ellas, errores humanos,
conexiones ilegales, o simplemente malas condiciones higiénicas de los tanques de
almacenaje y cisternas de distribuidores y/o consumidores.
El control de calidad del agua para consumo humano es ejercido por el proveedor en el
sistema de abastecimiento de agua potable. En este sentido, el proveedor a través de
sus procedimientos garantiza el cumplimiento de las disposiciones y requisitos sanitarios
través de prácticas de autocontrol, identifica fallas y adopta las medidas correctivas
necesarias para asegurar la inocuidad del agua que provee.
 PROTOZOOS:
MICROORGANISMOS Los protozoos que pueden aparecer de manera más
EN EL AGUA frecuente y son responsables de epidemias son el
Los principales Crytosporidium(portado por todo tipo de animal) y
microorganismos que se Giardia lamblia.
transmiten a través del agua BACTERIAS:
engloban a las bacterias, virus y
protozoos, aunque existen Son el grupo más importante de presencia en las
también otros organismos que aguas potables y las más importantes en cuanto a
pueden ser transmitidos en el número de epidemias causadas. La mayor parte de
agua potable, pero su la contaminación bacteriana causante de
probabilidad de transmisión es infecciones, está asociada a la contaminación fecal
muy baja. del agua. Ejemplo salmonella
VIRUS
Los virus no se pueden reproducir sin una célula en
la que se puedan hospedar, pero pueden sobrevivir
en el medio ambiente largos periodos de tiempo. El
agua normalmente es contaminada por materia
fecal contaminada con virus entéricos humanos.
PRINCIPALES ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR LOS MICROORGANISMOS EN EL
AGUA
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE EL AGUA
El análisis microbiológico de agua busca determinar la calidad de la misma, la cual se
define como el conjunto de caracteres biológicos que deben satisfacerse, con el fin de
que el agua sea segura para su uso final, entre los cuales están: agua potable, agua
embotellada, agua para uso agrícola, agua de piscinas, agua para usos recreativos,
entre otras.
La microbiología de aguas se basa en identificar si hay presencia de
microorganismos indicadores de calidad tales como: Coliformes Totales , Coliformes
Fecales, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, y recuento de Aerobios Mesófilos,
de tal manera que basados en la normatividad vigente, se pueda dar un concepto de
aceptabilidad.

REGLAMENTO DE LA CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO DS Nº 031-2010-SA.

donde se establece las normas sanitarias , aplicable para todas las organizaciones que
suministran de cualquier forma agua potable a la población o a sus colaboradores en caso de
empresas productivas o de servicios
LÍMITES MÁXIMOS PERMISIBLES DE PARÁMETROS MICROBIOLÓGICOS Y PARASITOLÓGICOS
Límites máximos permisibles de parámetros de calidad organoléptica
Límites máximos permisibles de parámetros radioactivos
2.RECUENTO DE MICROORGANISMOS

2.1 RECUENTO EN LA PLACA

El recuento en placa es uno de los métodos más utilizados para determinar

cuál es el número de microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la
concentración es baja se procede a filtrar la muestra a través de una
membrana que será pasada al medio de cultivo, en una placa de Petri.
Los microorganismos retenidos en la membrana se desarrollarán formando
colonias, permitiendo su cuantificación. Cuando la concentración es alta, se
procede a la preparación de diluciones seriadas en una secuencia de 1:10,
alcanzándose diluciones de 10−7 o mayores. Pequeñas alícuotas de esas
diluciones son sembradas en medio nutritivo en placa, donde las bacterias se
desarrollan formando colonias. En las placas donde la concentración de la
alícuota sembrada es muy alta, las bacterias formarán crecimiento masivo,
pero si la concentración es muy baja, el número de UFC podrá ser muy bajo.
Entre los dos extremos de las diluciones, alguna de las placas contendrá un
número de colonias entre 30 y 300, permitiendo la cuantificación.
 2.1.1 RECUENTO EN LA PLACA POR SIEMBRA EN PROFUNDIDAD
Consiste en añadir medio de cultivo fundido a 50ºC sobre placa de Petri que contiene
una cantidad determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar
la muestra en el agar.
Cuando el agar solidifica se incuban las placas. Las colonias se desarrollan tanto
dentro del agar como en la superficie.
Es un método generalmente utilizado para el recuento de microorganismos anaerobios
facultativos o microaerofilos
 2.1.2 RECUENTO EN LA PLACA POR SIEMBRA EN SUPERFICIE
El recuento en placa por siembra en superficie que consiste en la siembra de un
volumen conocido de la dilución de la muestra sobre la superficie de un medio de
cultivo en placa Petri.
En este método todas las colonias crecen sobre la superficie del medio. Generalmente
se utiliza esta técnica para el recuento de bacterias aerobias.
 2.2 RECUENTO EN LA PLACA
Se utilizan generalmente cámaras de recuentos, aunque también pueden realizarse a
partir de muestras filtradas en membranas y transparentadas o teñidas con colorantes
fluorescentes.
permiten determinar el número de células microbianas, por observación directa en el
microscopio. Presentan una gran ventaja ya que la muestra puede utilizarse tal cual, o
puede prepararse una dilución tal como se realiza para otros métodos de recuento.
• Recuento en placa
Preparación de medios de cultivo
Se preparar dos medios de cultivo solidos (Agar PDA, Agar TSA) para permitir el
crecimiento microbiano. De igual manera se preparA la cantidad suficiente de caldo
nutritivo de acuerdo con las indicaciones del fabricante para realizar las diluciones de cada
microorganismo (de 10−1 a 10−10 ).
Procesamiento de las muestras
Tanto los agares como el caldo nutritivo se esterilizan a 121°C durante 15 minutos.
Inoculación del medio de cultivo
Los microorganismos a utilizar en la práctica son Saccharomyces cerevisiae y Bacillus
subtilis. Se debe formar 2 baterías de tubos (correspondiente a las 2 especies evaluadas)
con un tubo correspondiente de cada dilución. Los medios de cultivo inoculados con la
cepa B. subtilis se incubaron a 37ªC por 24 horas. Los de S. cerevisiae se incubarán a
temperatura ambiente (TA) por el mismo tiempo.
Recuento de células
Se cuenta el número de UFC de cada placa tanto de profundidad como de superficie.
 3.DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO:METODO RESPIROMETRICO
proporciona una medida directa de oxígeno consumido por microorganismos
mediante un manómetro que mide el cambio de presión. Los resultados son
obtenidos mediante un bioensayo en un recipiente cerrado y enriquecido de
oxígeno en condiciones de agitación y temperatura constantes. Se lo realiza en
cinco días ya que aproximadamente el 80 % de la materia orgánica es degradada
por bacterias aerobias en este lapso, lo que hace que este sea uno de los métodos
más eficientes para la determinación de DBO.
EXPERIMENTACION:
-MATERIALES
Incubadora de DBO a 20 ºC
Frascos de DBO
Equipo Respirométrico de DBO
Probetas de 100 a 500 ml
EQUIPO DE RESPIROMETRIA
Procedimiento
Se utilizará un método respirométrico, conforme a las instrucciones del fabricante.
La medición consiste en que las botellas de DBO se llenan parcialmente con el agua a analizar dejando un volumen
de aire a presión atmosférica. Esta atmósfera de aire va conectada a un medidor de presión. La actividad biológica
produce un consumo de OD. El agua residual no contiene OD, por lo tanto, el oxígeno previamente se tiene que
disolver en el agua desde el volumen de aire. La disolución de oxígeno produce una caída de su presión parcial en
el volumen de aire que es detectada por el medidor de presión y transformada en demanda de oxígeno expresada
en mg/L.
En general, se trabaja con agua residual urbana sin dilución. Con aguas residuales industriales biodegradables
puede requerirse la dilución de la muestra.
El rango de medida suele llegar hasta los 4.000 mg/L sin tener que diluir la muestra. Cada fabricante propone unas
instrucciones que hay que seguir, sobre todo en cuanto al volumen de agua a introducir en la botella de DBO que
es función inversa de su DBO estimada. Por ejemplo, para el equipo LISA:
 CONCLUSIONES

• Se conoció de manera teórica el método de determinación por siembra en

profundidad, así como su parte metodológica.
• Se ahondo en el reglamento de análisis de calidad de agua para consumo
humano en el Perú de manera satisfactoria para la elaboración del presente
trabajo.
• Se identificó a los principales microorganismos transmitidos a través del agua.
• Se logró reconocer las principales enfermedades ocasionadas por los
microorganismos presentes en el agua.
• Se comprendió el fundamento teórico del método de recuento en placa usado
para determinar el número de microorganismos presentes en un medio
líquido.