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DOCTORANT EN PHARMARCIE
13M144
FMSB-YDE1
SOMMAIRE
INTRODUCTION
QUESTION DE RECHERCHE
HYPOTHESE DE RECHERCHE
OBJECTIFS
GENERALITES SUR VERNONIA CONFERTA
MATERIEL ET METHODOLOGIE
RESULTATS ATTENDUS
CHRONOGRAMME
BUDGET
INTRODUCTION
• Règne Plantae
• Phylum Tracheophyta
• Classe Magnoliopsida
• Ordre Asterales
• Famille Asteraceae
• Genre Monosis DC
• Espèce Vernonia conferta Benth.
USAGES ETHNOBOTANIQUES
• Douleur
• Infections bactériennes
• Thérapie du cancer
• Diabète
• Infections helminthiques
• Hépatotoxicité
• Maladies inflammatoires
• Améliorateurs de mémoire
• Maux d'estomac
• Diarrhée
DESCRIPTION
• Matériel végétal
Le matériel végétal sera constitué des écorces et des tiges de
Vernonia conferta Benth qui seront récoltées au mois de octobre 2019
à Baffousam dans la région de l’ouest Cameroun. Les échantillons
récoltés seront identifiés à l’Herbier National du Cameroun.
MATERIEL
• . Microorganismes
Dans le cadre de cette étude, nous utiliserons des souches
bacteriennes de aeromonas hydrophila, pseudomonas aeruginosa,
vibrio cholerae, staphylococcus aureus, Il s’agira de souches de
bactéries Gram négatifs . Ce sont par ailleurs des bactéries
responsables des multirésistances
MATERIEL
• Appareils
L’évaporateur rotatif (de marque précise), lyophylisateur(de
marque précise), la balance, L’autoclave (de marque précise et de
model précis), le poupinel (de marque précise et de model précis), le
bec bunsen, le distillateur (de marque précise et de model précis),
l’incubateur (de marque précise et de model précis) et la centrifugeuse
(de marque précise et de model précis) seront utilisés pour la
détermination de l’activité antimicrobienne
MATERIEL
• Réactifs et solvants
Le diméthylsulfoxyde (DMSO) et l’eau physiologique seront
utilisés dans la détermination de l’activité antimicrobienne. La
réalisation du screening nécessitera plusieurs réactifs et solvants : le
réactif de valse Mayer (1,36 g de HgCl2 et 5 g de KI pour un volume final
de 100mL) ; le réactif de Hager (solution saturé d'acide de picrique) ; le
réactif de Wagner (1,27 g de I2 et 2 g de KI pour un volume final de 100
mL) ; une solution diluée de perchlorure de fer (FeCl3) ; l’acétate de
plomb à 10 %; l’anhydride acétique; l’acide sulfurique; le chloroforme;
MATERIEL
• Réactifs et solvants
l’acide acétique anhydre; le NaOH 2N; l’acide sulfurique
(concentré et à 10 %) ; le NH4OH dilué au demi ; l’alcool chlorhydrique
(alcool à 95° + eau distillée + HCl concentré à partie égale en volume) ;
les copeaux de magnésium; l’alcool iso-amylique; l’acide chlorhydrique
à 1 %; le FeCl3 10 %; une solution de sulfate de cuivre 1 % (1 g de CuSO4
en solution ajouté à 65 mL d’eau ; distillée que l’on agite fortement et
complète à 100 mL) ; l’éthanol absolu; le réactif de STIASNY (10mL de
formol à 40 % plus 5 mL d’HCl concentré) ; le HN03 et l’ammoniaque.
MATERIEL
• Verrerie
La balance à précision 0,1 près, les béchers, les erlenmeyers, les
portoirs, les tubes à essai, les pipettes de 5 et 10 mL,
entonnoirs,burette, pissette, serviront à la fois pour l’extraction, le
screening phytochimique et la détermination de l’activité
antimicrobienne. Les pipettes pasteurs, les micropipettes de 15 μL, 100
μL, 1000 μL et embouts de 100 μL, 1000 μL, les tubes à essais à vis, les
écouvillons, les boîtes de Pétri de 90 mm de diamètre, les disques
stériles de 6 mm de diamètre, l’anse de platine, pied à coulisse seront
spécifiques à la détermination de l’activité antimicrobienne.
• Milieux de culture
• aeromonas hydrophila
Culture sur milieux de type gélose au sang :
Milieux spéciaux : Mac Conkey, Drigalsky, CIN
• pseudomonas aeruginosa
Culture sur milieux de type gélose au sang
Milieux spéciaux : Milieu au cétrimide ou CETAVLON® (bromure de N-cétyl N,N,N,-
triméthylammonium) +/- acide nalidixique : PSEUDOGEL®, PYOCYANOSEL®
• Milieux de culture
• vibrio cholerae
Culture sur milieux de type gélose au sang
Milieux spéciaux : Milieu d'enrichissement : eau peptonée alcaline, milieu
taurocholate tellurite peptone.
Milieu d'isolement :
- peu sélectif : gélose nutritive avec 0,1 % de Teepool ;
- sélectifs : milieu TCBS.
• staphylococcus aureus
Culture sur milieux de type gélose au sang
Milieux spéciaux : Milieu sélectif de Chapman à 7,5% de Na Cl (milieu
hypersalé + mannitol) et milieu de Baird-Parker au tellurite (colonies
noires avec halo clair)
METHODOLOGIE 1000g de poudre d’ecorse/ 1000g de
poudre de tiges de V.conferta
Filtrer et Filtrer et
concentrer par concentrer par
lyophilisation évaporation sous
rotavapeur
suspension bactérienne
Ensemencement sur à 10^6 UFC/ml
milieu approprié
1-3 colonies
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METHODOLOGIE
Traitement et analyses des données
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RESULTATS ATTENDUS
• Criblage phytochimique
La présence des métabolites secondaires sera révélée par la positivité des
tests effectués selon les principes décrits par les auteurs.
• Effet sur l'activité antibactérienne
Nos extraits seront considérés comme ayant un effet positif sur
l'activité antibactérienne des souches testées si, dans un premier temps,
nous observons et augmentons la présence de diamètres de zone
d'inhibition relativement proches ou supérieurs à ceux de notre antibiotique
de référence.
Dans une deuxième étape, la confirmation sera faite par le test de
micro dilution en milieu liquide.
CHRONOGRAMME
Novembre Décembre Janvier Février Mars Avril 2020 Mai 2020 Juin 2020
2019 2019 2020 2020 2020
Choix sujet + Réd
protocole
Validation du
protocole
Soutenance du
protocole
Obtention des
autorisations
Travail au
laboratoire
Rédaction de la
thèse
Soutenance de la
thèse
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BUDGET PRÉVISIONNEL
Total (FCFA)
Frais de récolte 50 000
Analyse physico-chimique 80 000
Location du laboratoire 100 000
Réactifs de laboratoire 200 000
Connexion Internet et communication 100 000
Frais de déplacement 20 000
Matériel didactique 20 000
Analyse statistique 100 000
Imprévus 100 000
Total 770 000
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MERCI POUR VOTRE ATTENTION
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