Gen Campylobacter

Epidemiologie
 Enterita= antropozoonoza,
 Rezervor principal: diferite specii de animale
si pasari,
 Alte surse de infectie:
 * omul bolnav, convalescent, purtator:
- In faza acuta a bolii: eliminare masiva de
germeni prin materii fecale,
- In convalescenta, pacientii netratati cu
antibiotice: durata excretiei: 2-3 saptamani,
- Omul purtator sanatos,
- Contactii bolnavilor eliminatori.
 Epidemiologie

 Factori favorizanti:
 * varsta: 0-4 ani,
 * sezon cald (iulie- septembrie),
 * profesia (boala profesionala/ personal
din crescatorii de pasari, animale),
 Incidenta:
 * tari dezvoltate: 4,3%- 13,9%,
 * tari in curs de dezvoltate: 5%-35%,
 * Romania: 5,1%
 Semnificatie clinica

 1. Campylobacter jenuni
 2. Campylobacter coli
 1970: agenti care determina infectii
gastrointestinale
 C. jejuni/ coli- printre cei mai frecventi agenti
etiologici ai enteritelor bacteriene sporadice,
 C. fetus: patogen oportunist (HIV+, alcoolism,
ciroza, DZ, neoplazii, leucemii etc),
 Forme clinice usoare sau medii
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 RECOLTA, TRANSPORT
 Specimene clinice: materii fecale, tampoane
rectale, sange,
 Min 2-3 recolte consecutiv,
 Mediu de conservare si transport Cary- Blair,
apa peptonata alcalina, tyoglicolat- cystine,
mediu Stuart modificat,
 Prelevatele biologice stocate in m. Cary-Blair
se refrigereaza la 4°C, daca nu se proceseaza
imediat
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 CARACTERE MACROSCOPICE:
 - materii fecale de consistenta redusa, pana la apoase,
+/- mucus, sange,
 - examen microscopic direct
 * microscopie cu contrast de faza,
 * examinare in camp intunecat:
 **mobilitate specifica “in tirbuson”
 * frotiu colorat Gram, Giemsa,
- numar mare de leucocite, hematii, cocobacili Gram
negativi spiralati, “in aripi de pescarus”
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 IZOLARE BACTERIANA:
 1. Medii de imbogatire: bulion Oxoid, bulion
thyoglicolic cu antibiotic, +/- sange,
 2. Medii de cultura selective:
 - medii cu carbune, dezoxicolat, cefoperazona *CCDA,
Oxoid,
 - medii cu sange, antibiotice (vancomicina, cefope-
razona, colistin, cephalotin, septrin):
 *Agar Columbia- sange berbec + Campy Supplement,
Campy – CVA,
 Mediu Skirrow,
 Incubare: 42°C, 24- 48 ore,
 Atmosfera: microaerofilie: 85%N2, 10%CO2,
5%O2.
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 IDENTIFICARE BACTERIANA:
 - caractere culturale:
 *colonii gri-castaniu, plate, rotunde,
convexe, margini regulate sau umede,
cu tendinta de intindere a coloniei de-a
lungul striului de insamantare,
 - caractere microscopice: col Gram
 *cocobacili subtiri Gram negativi,
spiralati, “in aripi de pescarus”, izolati si
grupati in gramezi, intra- si extra-
leucocitari,
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 - caractere biochimice:
 * catalaza (+),
 * oxidaza (+),
 * hidroliza hipuratului,
 * producerea de H2S,
 * sensibilitatea la antibiotice (ac. nalidixic,
cephalothin),
 Sistem automat VITEK2C,
 Identificare Campylobacter
spp- caractere biochimice

Specia catalaza oxidaza Hidroliza Ac. cephalothin Crestere Crestere

hipuratului nalidixic 25°C 42°S
Campy. + + + V R - +
jejuni
Campy. + + - V R - +
coli
Campy. + + - V S + -
fetus
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 - caractere antigenice:
 * ELISA: detectie de Ag Campy direct in
probe de materii fecale (proSpecT
Campylobacter),
 - caractere genetice:
 * metode de amplificare genica:
 -PCR direct in probe de materii fecale
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 Diagnostic bacteriologic indirect: teste

serologice:
 - IgA, IgM, IgG
 - IgA: ser, materii fecale (primele saptamani
ale infectiei, dupa care scad rapid),
 -reactii fals (+) pentru Legionella (cross-
reactivitate, in infectii cu Campylobacter)
 - utile in investigatii epidemiologice,
 - nu se recomanda pentru diagnostic de rutina
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC

 ANTIBIOGRAMA
 - Campy. jejuni, Campy. coli:
 * sensibilitate variabila la antibiotice
(macrolide, fluoroquinolone, aminoglicozide,
cloramfenicol, nitrofurantoin, tetracicline)
 * majoritatea tulpinilor nu sunt sensibile la
cefalosporine si peniciline,
 * recomandate: azitromicina,
eritromicina, ciprofloxacin,
 Metode: E-test, CMI prin dilutii in agar,
 *Mueller- Hinton Agar+ sange berbec
 HELICOBACTER SPP

 HABITAT:
 - tract gastrointestinal si hepatobiliar la mamifere si
pasari,
 - tulpinile de Helicobacter cu localizare în nişele
gastrice invadează foarte rar sistemic, faţă de
speciile de Helicobacter enterohepatice,
 * Helicobacter pylori colonizează cardia, corpul
şi antrum- ul gastric, respectiv porţiunea distală a
stomacului uman,
 - aceste bacterii se întâlnesc tranzitoriu în ariile de
metaplazie la nivelul zonei proximale a intestinului
subţire (duoden), în salivă, lichid de vărsătură,
materii fecale.
 Descrierea genului Helicobacter

 Genul Helicobacter cuprinde aproximativ 20

specii validate prin reguli internaţionale de
nomenclatură,
 Genul include bacili spiralaţi sau încurbaţi,
cu dimensiuni cuprinse între 0,3 – 1,0 μm
în grosime şi 1,5 – 10,0 μm lungime,
 Bacteriile din Genul Helicobacter sunt Gram
– negative, nesporulate, mobile prin
multipli flageli dispuşi mono- sau bipolar
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT

 Transport. Stocare.
 a) Speciile enterohepatice de Helicobacter
 - traversează bariera intestinală şi determină infecţii sistemice,
 - când se suspectează bacteriemia, se recoltează sânge venos periferic,
 - hemoculturile se însămânţează în condiţii aerobe şi de anaerobioză, în
perechi de flacoane speciale, cu incubare în sisteme automate.
 b) Speciile de Helicobacter cu localizare gastrică: H. pylori şi “H.
heilmannii”
 - sunt rareori izolate din coprocultură,
 - materiile fecale proaspăt recoltate în recipiente sterile, se transportă şi se
prelucrează în laborator în maxim 4 ore de la recoltă, deoarece speciile de
Helicobacter îşi pierd rapid viabilitatea.
 - piesele de biopsie de mucoasă gastrică sunt utilizate pentru diagnostic
direct : testul rapid al ureazei sau teste histopatologice.
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
 - piesele biopsice de mucoasă gastrică se pastrează la
temperatura camerei şi se prelucrează în maxin 2 ore
de la recoltă,
 - Helicobacter pylori, fiind foarte sensibil în condiţii de
deshidratare şi în atmosferă ambiantă, necesită
utilizarea mediilor de conservare si transport,
cum ar fi: brucella broth cu 20% glycerol, cysteine-
Albimi broth cu 20% glycerol, mediu Stuart,
 - dacă transportul depăşeşte ca timp 4 zile, cel mai
bun mijloc de conservare este reprezentat de mediul
chocolat însămânţat cu prelevatul respectiv, incubat
în condiţii de microaerofilie (pungi cu plicuri genera-
toare de microaerofilie: CampyPak, Campy Pouches.
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT

 Examinarea microscopică:
 - frotiuri colorate Gram sau Giemsa (fragment de
mucoasă gastrică sau materii fecale),
 - examinare în imersie,
 - se vizualizează prezenţa bacililor cu morfologie
caracteristică: bacili scurţi, Gram negativi, încurbaţi,
sub formă de virgulă sau cu dispoziţie caracteristică
“in aripi de pescăruş”, spiralaţi, în prezenţa unei
reacţii inflamatorii evidente, reprezentată de leucocite
PMN.
 * Sensibilitatea examenului microscopic depinde
de experienţa şi conştiinciozitatea microbiologului,
fiind considerată superioară testului ureazei.
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
 CULTIVARE, IZOLARE BACTERIANA:

 a) Mediile de cultura neselective:

 - numai pentru însămânţarea fragmentelor de biopsie gastrică, în
vederea izolarii H. pylori,
 - medii agarizate, tip Brain Heart Infusion/ BHI agar, brucella
agar, Columbia agar, Skirow agar, îmbogăţite cu sânge sau ser
de cal, sânge de berbec.,
 - sunt recomandate medii gata turnate, comercializate sub
denumirea de:
 * brucella agar cu 5% sange cal,
 * brain heart infusion/BHI agar suplimentat cu 7% sânge
defibrinat de cal (indice de izolare 96%),
 * Trypticase soy agar cu 5% sânge berbec (indice de izolare
78%),
 * Columbia sânge agar cu cyclodextina (indice de izolare 32%).
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT

 b) Medii de cultura selective:

 - se recomandă pentru izolarea speciilor de Helicobacter cu
localizare enterohepatică, din prelevate cu floră bogată de
asociaţie:
 *materii fecale, alimente
 - mediile selective şi atmosfera în microaerofilie sunt esenţiale
pentru cultivarea speciilor de Helicobacter din materii fecale şi
tampoane rectale,
 * Columbia agar baza cu 5% sânge berbec, şi ameste
antibiotic inhibitor (cefoperazonă, vancomicină,
amphotericină B).
 * incubate la 37- 42 ºC, în atmosferă umedă de
microaerofilie, timp de 24, 48, 72 ore
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
DIRECT
 Identificare:
 - din cultura izolată se efectuează cateva teste minimale, de
rutină, pentru o identificare preliminară:
 * frotiu Gram,
 * cytochrom – oxidaza (+),
 * catalaza (+),
 * testul ureazei rapide (+),
 * caracteristicile fenotipice,
 * activitatea exoenzimatică
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
*CARACTERE BIOCHIMICE

Habitat şi caracteristici fenotipice ale principalelor specii de Helicobacter, în infectii umane

Helicobacter Localizare Catalaza Reducerea Fosfataza Ureaza Creştere Rezistenţa Rezistenţa
Taxon nitraţilor alcalina 42ºC la Ac. la Flageli
nalidixic cefalotin
H. gastrică
bizzozeronii + + + + + R S bipolari

H. canis intestinală - - + - + S I bipolari

H. canadensis
intestinală + +/- - - + R R Mono/
bipolari
H. cinaedi intestinală + + - - - S I bipolari
H. fennelliae intestinală + - + - - S S bipolari

H. pullorum intestinală + + - - + R S monopolar

H. pylori gastrică + - + + - R S monopolar
Helicobacter
sp. strain intestinală +/- - - + + R R bipolari
flexispira
H.
winghamensis intestinală - - - - + R R bipolari
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
*CARACTERE ANTIGENICE SI
GENETICE
 * CARACTERE ANTIGENICE:
 ELISA: detectie Ag H. pylori direct in prelevat
biologic, kituri comerciale,
 Detectia de Ag utila in cazul in care reactia
ureazei din biopsia de mucoasa gastrica e dificil
de realizat (pediatrie),
 Detectie de Ac- rezultate cu semnificatie
redusa (pacienti HIV+),
 * CARACTERE GENETICE:
 PCR, RT-PCR:
 - gene tinta: 23SrDNA, glmM, vacA etc
 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
INDIRECT
 ELISA: Ig A, Ig G: persista luni sau ani,
 - test screening primar pentru forme de boala
necomplicate,
 - rezultatele echivoce sau negative pentru IgG,
se completeaza cu detectia IgA, in infectii cu
Helicobacter pylori,
 Teste serologice tip ELISA pentru H. pylori, au
sensibilitate 92%, specificitate 83%

 SENSIBILITATEA LA
ANTIBIOTICE
 Tratamentul infectiilor cu H. pylori,
necesita o schema complexa:
 * metronidazol,
 * macrolid (claritromicina),
 * ciprofloxacin, aminoglicozide, tetraciclina etc,
 * medicatie antiacida: omeprazol, ranitidina,
 * Antibiograma:
 Dilutii in agar,
 Mueller Hinton + sange berbec 5% , benzi
E-test,
 DIAGNOSTICUL BACTERIOLOGIC IN
INFECTII PRODUSE DE
GENUL PSEUDOMONAS

 Microorganismele genului Pseudomonas sunt

foarte raspandite in natura: apa, sol, unde
indeplinesc functii de mineralizare a
materiei organice vegetale si animale, de
unde ajung frecvent in tractul digestiv uman
si animal.
Definitie
 Gram (-) drepti sau incurbati, polimorfi,
 mobili, cu cili polari (monotrichi sau lophotrichi),
 strict aerobi,
 catalaza (+),
 oxidaza (+),
 nesporulati,
 necapsulati (exceptie fac variantele fenotip mucos,
virulente, izolate din supuratii cronice bronho-
pulmonare),
Pseudomonas spp - Definitie
 unele specii produc pigmenti difuzibili, fluorescenti
(pioverdina, piocianina),
 miros specific, aromat (“flori de tei”),
 cresc pe medii simple,
 majoritatea speciilor sunt nepatogene.
 In Genul Pseudomonas sunt cuprinse specii fluorescente si
nefluorescente.
 Pseudomonas aeruginosa este specia cel mai frecvent
implicata in imbolnaviri umane.
 Ps. aeruginosa este principala bacterie condittionat
patogena, implicata in proportie de aproximativ 10- 15% in
infectiile intraspitalicesti
Diagnostic de laborator
 Prelevate :
 secretii plagi, puroi, urina, sange, LCR, sputa,
 Recolta, Transport (rezistent, nepretentios),
 Examinare macroscopica (puroi verde, albastrui)
 Examinare microscopica a produsului
patologic:
 Frotiuri colorate Gram si albastru de metilen:
frecvente PMN, frecventi bacili Gram (-) drepti,
incurbati, polimorfi, nesporulati, necapsulati.
 Caractere de cultivare
pe medii lichide
 Cultivare:
 * Medii lichide (bulion, apa peptonata):
 creste cu tulburarea mediului si formarea unei
pelicule la suprafata acestuia; in cateva zile
pelicula se rupe, cade la fundul tubului, iar mediul
devine vascos, filant,
 la suprafata se formeaza un inel pigmentat, colorat
verde- albastrui, cu miros de flori de tei,
 Pseudomonas aeruginosa-
Caractere culturale
 * Medii solide:
colonii tip “S”, “M”, “R”
 - Istrate Meitert: colonii Lactozo (-),
mici, albastre, aderente de mediu,
 - Geloza- sange: colonii gri,
lucioase, hemoliza tip ß, luciu metalic
 Caractere culturale
 MacConkey, ADCL etc: colonii
lactozo (-)
 Medii care pun in evidenta
pigmentogeneza: King A, B,
 Incubare 24- 48 ore la 37°C (Ps.
aeruginosa se dezvolta la +4°C si
42°C (criterii orientative de
diagnostic),
Caractere biochimice
 catalaza (+),
 oxidaza (+),
 glucoza, lactoza, zaharoza (-): bacterie inerta din
punct de vedere al metabolismului glucidic,
 TSI, MIU, MILF: teste nemodificate,
 creste pe mediu cu citrat ca unica sursa de carbon
(virare spre albastru a mediului citrat Simmons),
 pigmenti piocianina, pioverdina, piorubrina,
piomelanina,
 creste la 42°C,
 Marcheri epidemiologici, in Infectii
intraspitalicesti
 Bacteriocinotipia,
 Lizotipia,
 Antibiotipia/ Antibiograma:
 este obligatorie,
 pune in evidenta tulpinile multidrog –
rezistente: rezistenta la cel putin 3 clase de
antibiotice, izolate din infectii intraspitalicesti.
Recomandari de tratament

 In tratamentul infectiilor cu Ps. aeruginosa, se utilizeaza asociatii

de substante antimicrobiene, deoarece in monoterapie exista riscul
selectarii tulpinilor multirezistente.
 Se recomanda asocierea unei peniciline (ticarcilina, mezlocilina,
piperacilina) cu un aminoglicozid (amikacina, tobramicina).
 Dintre clasele noi de antibiotice cu efect antipseudomonazic se
recomanda: piperacilina/ tazobactam (tazocin), cefoperazona,
imipenem, meropenem, ceftazidim, noile quinolone, tigecyclina etc.
 In scop terapeutic se mai poate utiliza vaccinul piocianic
monovalent.