CRYO-Scanning Electron

Microscopy (Cryo SEM)

Programa de Ingeniería en Nanotecnología

Sebastián Monsalve R.
John Fredy Mosquera
 PROBLEMAS EN OBSERVACIÓN DE BIOMUESTRAS
La observación de bio-muestras hidratadas en un SEM convencional.

El agua se evapora muy rápido, por el alto vacío o por sensibilidad al haz de electrones, haciendo
que:

1. La muestra se contrae y distorsiona.

2. contamina la cámara SEM

1. SEM CONVENCIONAL

1. Tomado de:https://fakultaeten.hu-berlin.de/en/mnf/forschung_internationales/grs/salsa/p-a-labs/application-lab/instrumentation/a-
labs-sem
 PROCEDIMIENTOS ESTÁNDAR PARA LA OBSERVACIÓN
DE MATERIAL BIOLÓGICO EN UN SEM

Toda el agua y la materia soluble en agua es

eliminada por deshidratación, que resulta en:

1.Contracción y distorsión del material

hidratado.

2.Pérdida de distinción entre espacios líquidos y

los gasificados. Además puede ocasionar
pérdida de ceras y resinas.

3. Hinchazón y distorsión de tejidos

inherentemente desecados.

4. Procedimiento de preparación largo.

 ¿PORQUE USAR CRYO-SEM?
Dado que el agua ocupa hasta el 90% de algunos tejidos animales y vegetales, esta
técnica es esencial para la observación de muestras biológicas, húmedas o sensibles al
haz; mediante la inmovilización de agua y materiales solubles por congelación.

Además de ello elimina la necesidad de métodos de preparación convencionales, como

la fijación química y el secado en puntos críticos, permitiendo la observación de
muestras en su estado hidratado natural.

LENGUA DE UNA RATA POR: 1)SEM (secado en

2. punto crítico) 2)CRYO-SEM plántula de Arabidopsis, Hoja cortada de
saúco

2. Tomado de:http://microscopy.anu.edu.au/files/Cryo-SEM_Presentation.pdf
 ¿QUE ES CRYO-SEM?
SEM convencional
+
• Una etapa CRYO (frío) en la muestra.
• una cámara de preparación CRYO con un sistema de recubrimiento y corte

3. VISTA EXTERNA DE UN CRYO - SEM 4. COMPONENTES DEL CRYO - SEM GENERAL

3,4. Tomado de: https://www.jeol.co.jp/en/applications/pdf/sm/469_en.pdf

 equipo cryo-sem

figura 5.visión conjunta de una estación cryo-sem.

tomado de:https://www.emsdiasum.com/microscopy/products/brochures/2019/EMS_CryoSEM.pdf
 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. montar y congelar para vitrificar

figura 6. estación de nitrógeno líquido y dispositivo

de transferencia de muestras. figura 7.enfriamiento por
inmersión
tomado de:6)https://www.emsdiasum.com/microscopy/products/brochures/2019/EMS_CryoSEM.pdf; 7)Newbury, D. et al. scanning
Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis. (2003).
 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
2. transferir a la cámara de preparación
criofractura

figura 9. diferentes formas en las que

figura 8. cámara de preparación acoplada a la camara la muestra puede ser fracturada.
en frío del sem.
tomado de: 8) https://rowaco.se/en/item/pp3010t/ ; 9) Newbury, D. et al. scanning Electron Microscopy and X-Ray
 APLICACIONES
cryo-sem se utiliza para investigación en diferentes
campos de la ciencia y la industria como:

ciencias biológicas: botánica, biotecnología, ciencia

médica y agricultura
industria: farmacéutica y cosmética, alimentos.
 IMÁGENES OBTENIDAS

figura 10.cienpies con ácaro.

11. espora de hongo.

tomado de: 10)https://www.youtube.com/watch?v=0a524lCPBD4, 11) Newbury, D. et al. scanning Electron Microscopy

and X-Ray Microanalysis. (2003).
 IMÁGENES OBTENIDAS

figura 12. queso azul. 13. locion aromaterapia.

tomado de: https://www.youtube.com/watch?v=qH5mFbt_Eqs

 APLICACIÓN

fuente:Efthymiou, C., Williams, M. A. K. & Mcgrath, K. M. Food Hydrocolloids Revealing the structure of high-water content
biopolymer networks : Diminishing freezing artefacts in cryo-SEM images. Food Hydrocoll. 73, 203–212 (2017).
 RESULTADOS
Método: slushy nitrogen
 RESULTADOS
Método: congelación por chorro de propano
 CONCLUSION
? El CRYO-SEM es una técnica útil que proporciona de una forma rápida,
confiable y efectiva para ver el estado inherente de muestras hidratadas.

? Por lo tanto se puede utilizar para observar tanto la morfología como la

anatomía de muestras biológicas utilizando menos artefactos en comparación
con la técnica de fijación química convencional del SEM

? no es necesario eliminar el agua,por lo que el material no sufre cambios

mecánicos por el espacio que esta deja
 REFERENCIAS
1. Vivien Rolland, Dana M. Bergstrom, Thomas Lenné, Gary Bryant, Hua Chen, Joe Wolfe, N. Michele
Holbrook, Daniel E. Stanton, Marilyn C. Ball Plant Physiology: Volume.168. pages 1636-1647, 2015

1. DeFarge, C., Trichet, J., Jaunet, A. M., Robert, M., Tribble, J., & Sansone, F. J. (1996). Texture of
microbial sediments revealed by cryo-scanning electron microscopy. Journal of Sedimentary
Research, 66(5), 935-947.

1. Australian National University. (2010). CRYO-Scanning Electron Microscopy. ammrf, 20.

1. Newbury, D. et al. scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis. (2003).

1. Efthymiou, C., Williams, M. A. K. & Mcgrath, K. M. Food Hydrocolloids Revealing the structure of high-
water content biopolymer networks : Diminishing freezing artefacts in cryo-SEM images. Food Hydrocoll.
73, 203–212 (2017).
MUCHAS GRACIAS

¿PREGUNTAS?