Explorați Cărți electronice
Categorii
Explorați Cărți audio
Categorii
Explorați Reviste
Categorii
Explorați Documente
Categorii
Lp.3
REACTIA SE SEROAGLUTINARE
RAPIDA PE LAMA
• Antigenul se numeste anglutinogen
Ex. Dacă anticorpul de tip IgG posedă două locuri de legare a antigenului,
antigenul poate lega mai multe molecule de anticorpi: astfel se vor forma
complexe antigen-anticop şi apar retele.
Materiale necesare:
-Lame de sticle curate, degresate
-Anse metalice calibrate, cu diametrul buceli de 3 mm
-Flacara pentru flambarea anselor
-Pipete Pasteur sau seringi de 1 ml pentru repartizarea antigenului pe lamă
-Apă distilată sau ser fiziologic
-Antigenul ( suspensie de germeni bacterieni conservat corespunzător) sau
serul cu anticorpi specifici ( suspensie infiolată şi conservată corespunzător)
Tehnica de lucru:
- se prepară extempore, în momentul executării reacţiei, dintr-o
cultură pe agar suspendată într-o picătură de soluţie fiziologică
depusă în prealabil pe lamă
-Suspensia de germeni
Avantaj!
Permite stabilirea titrului
de anticorpi din serul de
examinat
TITRUL AGLUTINANT DE ANTICORPI – reprezintă concentraţia minimă de
anticorpi ( exprimată prin diluţia maximă) şi este modul concret de apreciere
cantitativă a aglutininelor.
Se aplică în- diagnosticul bolilor infecţioase cum ar fi:
salmoneloza, bruceloza, morva, colibaciloza, etc
!
diluţiilor, diferă în funcţie de boală, conform protocolului de lucru.
Materiale necesare:
-Tuburi Wassermann
-Pipete gradate sau micropipete
-Ser fiziologic fenolat 0,5%
Antigenul brucelic - se diluează 1/40 în soluţie cloruro-sodică izotonică (8,5% NaCl), perfect neutră
Pentru evitarea infectării, în cursul reacţiei, se adaugă 3-5% fenol la antigenul astfel diluat.
Pentru efectuarea reacţiei se fac diluţii: 1/25, 1/50, 1/100, 1/200, 1/400, 1/800
Incubare
la 37 C,
timp de
24 ore.
Rezultatele reacţiei se exprimă în U.A.I.
( unitati aglutinante internationale).
Rezultatele reacţiei:
Elementele reacţiei:
- antigenul (precipitinogenul)- extract microbian, toxina, suspensie de
virus etc.
- se prezintă sub fomă unui lichid limpede
- anticorpii ( precipitine) – prezent în ser şi apar mai gre în ser decât
aglutininele.
- electroliţi
Reacţia de
T2- executarea propriu zisă- punerea în contact a
seroprecipitare
precipitinogenului cu serul precipitant
3 tehnici principale:
Interpretarea reacţiei:
-Reacţie pozitivă- 2-3 min de la efectuarea reacţiei, la
zona de separare dintre ser şi antigen, un precipitat
alb, sub forma unui inel sau disc
Principiul reacţiei:
- are la bază proporţionalitatea directă dinte viteza de producere a
reacţiei şi raportul dintre antigen şi anticorp.
- reacţia se produce cu atât mai repede cu cât cantitatea de anticorpi din
ser neutralizează perfect antigenul şi cu cât acesta din urmă se găseşte în
cantitate corespunzătoare celei de anticorpi din ser.
!!!! Un exces de antigene sau de
anticorpi poate provoca o reacţie
întârziată, care este cu atât mai mare
cu cât disproporţia dintre cele două
elemente este mai accentuată
Cu cât raportul dintre Atg si Atc este mai aproape de valoarea 1( vezi dil. 1-16) cu atât
seroflocularea (neutralizarea toxinei) se produce mai repede (15 min).
Se trage concluzia că, serul antitoxic care se
titrează conţine, în diluţia unde a apărut mai
întâi flocularea, un număr de unităţi
antitoxice, corespunzător numărului de
unităţi toxice din volumul de toxină care a
fost repartizat iniţial în toate tuburile (titrul
toxinelor şi a antitoxinelor se exprimă în
unităţi şi nu în diluţii).
L.P. 8
REACŢII SEROLOGICE DE PRECIPITARE ÎN MEDII
SEMISOLIDE.
IMUNODIFUZIA.
DIFUZIA VERTICAL SIMPLA (OUDIN), DIFUZIA
VERTICAL DUBLĂ ( OAKLEY ŞI FULTHROPE)
-Descriu precipitarea antigen anticorp într-un
Bechold (1905) mediu semisolid
Oudin (1945) -Dau reacţiei o aplicaţie practică
Ouchterlony si Elek (1948) -Demonstrează faptul că această reacţie permite
identificarea fracţiunilor antigenice dintr-un
complex
Tamponul:
-este acelaşi pentru toatele tehnicile în gel de agar şi gel de agaroză
- contine:veronal acid, veronal sodic, apă distilată, pH 8,6
Antiserurile:
- pentru tehnicile de imunochimie- seruri antiproteină
- sunt liofilizate şi se reconstituie într-un ml de apă distilată
Serul de cercetat:
- se foloseşte proaspăt sau conservat ăntr-un ml Na-azid pentru 1 ml ser.
Aparatura:
- aparat de electroforeză (pentru tehnicile imunochimice în câmp electric)
DIFUZIUNEA VERTICALĂ SIMPLĂ (OUDIN)
Tehnica de lucru:
- într-un tub de reacţie se introduce serul inclus în gel de agar 2%
- peste acesta, se toarnă antigenul în stare lichidă
- antigenul difuzează în gelul cu ser înglobat, în care vor apare liniile de precipitare
http://www.authorstream.com/Presentation/doct
orrao-1133052-antigen-and-antibody-reactions/
DIFUZIUNEA VERTICALĂ DUBLĂ ( OAKLEY si FULTHROPE)
Tehnica de lucru:
-diferenţa faţă de tehnica Oudin constă în interpunerea, între serul inclus în geloză
2% şi antigenul lichid, a unui strat intermediar de geloză moale 1%
- ambele elemente difuzează în stratul intermediar de geloză în care apar linii de
precipitare.
L.P. 9
REACŢII SEROLOGICE DE PRECIPITARE ÎN MEDII
SEMISOLIDE.
IMUNODIFUZIA.
DIFUZIA ORIZONTALĂ SIMPLA (MANCINI),
DIFUZIA OROZONTALĂ DUBLĂ (OUCHTERLONY)
DIFUZIUNEA ORIZONTALĂ SIMPLA (MANCINI)
Principiu: difuziunea unuia din elemente (antigen sau anticorp) în mediul de gel
de agar, în care este încorporat celălalt element.
Materiale necesare:
-Plăci Petri
-Tub pentru ştanţarea godeurilor ( diametrul de 3 mm)
-Dispozitiv de repartizare- micropipetă
-Coloranţi- uneori se recomandă colorarea agarului din plăci
-Monoseruri
-Ser de referinţă se pot folosi: -ser standard (hemotest) cu IgG, IgM, IgA U.I/ml
-ser standard Behring cu conţinut cunoscut în diverse proteine
(mg/100 ml)
Ser- amestec de seruri normale
Se fac diluţii în SF.
Tuburile cu diluţiile standard, se păstrează la 4C, un an de zile
ETAPELE DE LUCRU
Reactia de Metoda
-Simplă, rapidă şi fiabilă
seroprecipitare imunodifuziei
-Cea mai utilizată
Ulenhuth in gel de agar
Extractul de
cercetat
(necunoscut)
• Plăcile se menţin în spaţii închise, cu atmosferă umedă,
• Citirea reacţiei se face după 18 - 24 ore
Interpretare:
• Negativ- dacă între anticorpii din antiser şi antigenele din extract nu
există compatibilitate
• Pozitiv – dacă între anticorpii din antiser şi antigenele din extract,
apar linii de precipitare
• Dacă sunt compatibile- apar linii de precipitare care se
întrepătrund în totalitate cu cele ale antigenului omolog
antiserului şi asezat în godeurile alăturate extractului.
• Dacă sunt înrudite- apar numai unele din liniile de precipitare
DETERMINAREA CU ANALIZATORI AUTOMATI A
UNOR ANTICORPI MARCATI MINIVIDAS
DETECŢIA ENTEROTOXINEI STAFILOCOCICE
Enterotoxinele stafilococice sunt:
- sunt secreţii produse de unele tulpini de stafilococi
- proteinele simple, constituite dintr-un lanţ polipeptidic, de la care, prin
hidroliză, s-au obţinut 18 aminoacizi (cei mai frecvenţi fiind: lizina, asparagina, acidul
glutamic si tirozina)
- masa lor moleculară variază între 28.000 şi 35.000 daltoni,
- sunt rezistente la enzimele digestive şi la temperaturi până în 117 C,
-distrugerea florei intestinale prin antibioticoterapie le potenţează efectul,
- sunt 6 variante antogenice: A,B,C,C1, D,E
-cauza toxiinfecţiilor alimentare (enterotoxinele A şi D)
Enterotoxigeneza- are loc între limite largi de temperatură (-6,7 C şi 45,5 C)
- influenţat favorabil de condiţia de anaerobioză
- nu este inhibată de acidifierea mediului
http://www.biomerieux-industry.com/video/637/player
Sau
http://www.youtube.com/watch?v=ZFRuJYynLwk
LP:12
http://www.youtube.com/watch?v=VkehUBD802k
LP.13
DETERMINAREA CU ANALIZATORI AUTOMATI A UNOR ANTICORPI MARCATI
MINIVIDAS DETECŢIA PREZENŢEI GENULUI LISTERIA MONOCYTOGENES DIN
PRODUSELE ALIMENTARE