LABORATORIO #2: TECNICAS DE EXTRACCIÓN DE ADN

PRESENTADO POR:

CAMILO CORTINA
CARLOS RODRIGUEZ
JHONNY CASTILLA
ANYI ARIZA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS Y EDUCACION

LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION

AMBIENTAL

GENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

 INTRODUCCION

La extracción de ADN de una

muestra celular se basa en el
hecho de que los iones salinos
son atraídos hacia las cargas
negativas del ADN,
permitiendo su disolución y
posterior extracción de la
célula. Se empieza por lisar
(romper) las células mediante
un detergente, vaciándose su
contenido molecular en una
disolución tampón en la que se
disuelve el ADN.
 OBJETIVOS

 Utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN

de un producto natural
 Observar la estructura fibrilar del ADN.
 Técnica 1. Extracción ADN Cacera
material vegetal

Es una técnica especializada en el uso de materiales de

cocina o caseros, para poder extraer una muestra lo
bastante buena de ADN, para su próximo análisis.
 Preguntas sobre la técnica #1

¿Para que se usa el lavaplatos, sal común, zumo de

piña. Que explicación científica tiene sobre esto?

 El lava platos o detergente, se utiliza para romper las membranas de

lípidos que cubren los orgánulos, los cuales contienen el ADN.

 el cloruro sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos,

por lo tanto el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares,
y la sal evita la unión de las proteínas al ADN.

 El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar

las proteínas y por tanto capaz de separar el DNA de las histonas.
¿Cómo funcionan los alcoholes en el ADN?

 La función principal del alcohol etílico es precipitar el ADN, Una vez

extraído el ADN, se debe proteger el mismo de enzimas que puedan
disminuirlo es por ello que para aislarlo hay que precipitarlo en
alcohol.
 Técnica 2 Extracción ADN Tejidos De Hojas De Tomates (Solanum lycopersicum.)

La extracción de DNA a partir de tejido vegetal se

realiza mediante una serie de pasos generales no tan
comunes y un pco mas complejos para distintas
especies.
 Preguntas sobre la tecnica #2

¿Que son las nucleasas?, ¿por que se deben inhibir en este

proceso?, ¿como influyen los iones quelantes de magnesio?

 Son enzimas que cataliza la degradación de ácidos nucleicos

rompiendo los enlaces fosfodiésteres.

 se debe inhibir la acción de estas nucleasas para evitar la

degradación del DNA.

 Mediante acción de los agentes quelantes inhibe la acción o

funcionamiento de las nucleasas.
¿Por que se utiliza nitrogeno líquido?

 Esto se efectúa con Nitrógeno líquido, para evitar la formación de

cristales de hielo una vez iniciado el proceso de congelación, pero
como objetivo principal para evitar la degradación del ADN.
 Técnica 3. Electroforesis en gel de
agarosa Extracción ADN

La electroforesis en gel es un grupo de técnicas

empleadas para separar ADN basándose en
propiedades como el tamaño, la forma o el punto
isoeléctrico.
 Preguntas sobre la técnica #3

¿para que se utiliza tampón de carga.?

 aumentar la densidad de la muestra, para depositarse en el fondo del
pozo, teñir la muestra para facilitar su carga dentro del gel,
identificar la distancia recorrida por las muestras.
¿Para que se usa el bromuro de etidio y función.?
 Usado comúnmente como aclarador de ácidos nucleicos en
laboratorios de biología molecular para procesos como la
electroforesis en gel de agarosa.
¿Por qué se dice que es fragmento intercalante?
 Agente intercalante es aquel que se introduce entre las bases apiladas
del DNA, abre un poco la doble hélice, provoca un desenrolla miento
local.
¿A qué se debe que el fragmento sea más corto que
otro.?
 Esto se debe al números de pares de bases si son cortos tienen mayor
contenido pero si no tienden a llegar más lejos.
¿Por qué y para que se utiliza el electrodo positivo y
negativo.?
 para generar un flujo de energía y formar de un campo eléctrico que
provocan la migración de las moléculas de ADN según su longitud.
 PREGUNTAS DE PROFUNDIZACÓN

Mencione y explique otros métodos para purificación

del DNA.
 Extracción/Precipitación
A menudo se efectúa una extracción
con disolventes para eliminar los
contaminantes de los ácidos
nucleicos. Por ejemplo, suele
emplearse una combinación de fenol
y cloroformo con objeto de eliminar
las proteínas. Para concentrar los
ácidos nucleicos suele realizarse una
precipitación con isopropanol o
etanol.
 Cromatografía

permeación sobre gel, intercambio

iónico, adsorción selectiva o unión por
afinidad. La permeación sobre gel
aprovecha las propiedades de las
partículas porosas del gel para tamizar
moléculas. Se emplea una matriz con
poros de tamaño definido, que dejan
pasar las moléculas más pequeñas por
difusión, pero no las más grandes, que
quedan eluidas en el volumen vacío.
Así pues, las moléculas quedan eluidas
por orden de tamaño decreciente.
 Centrifugación
La centrifugación selectiva constituye
un método de purificación eficaz. Así,
por ejemplo, la ultra centrifugación en
gradientes autogenerados de CsCl con
fuerzas g elevadas se lleva empleando
mucho tiempo para purificar
plásmidos. La centrifugación suele
asociarse a otros métodos, como la
cromatografía de columna
centrifugada, en cuyo caso se combina
la permeación sobre gel y la
centrifugación para separar el ADN o
ARN de contaminantes más pequeños.
¿Por que es importante la purificación del DNA?
 Porque permite separar el ADN de los demás componentes celulares
que no son de interés, y así descartar contaminantes preservando el
ADN para un alto grado de calidad y pureza, de esta forma los
resultados serán más exactos y confiables.
¿Cómo y cuáles son las aplicaciones al extraer DNA?
 En la medicina, En la investigación de enfermedades como el cáncer
es posible extraer pequeñas porciones de ADN de las células tumorales
que portan los marcadores genéticos del tumor liberadas al torrente
sanguíneo.
 Biotecnología, El conocimiento de los genes no solo se limita a la
medicina. La agricultura y la ganadería se valen ahora de técnicas de
manipulación de ADN conocidas como Biotecnología.
 Medicina forense, Gracias a la identificación del ADN (ácido
desoxirribonucleico), es posible conseguir la información genética de
un individuo y determinar tanto su aspecto físico como ciertos rasgos
de su personalidad.
 CONCLUSIONES

Cada uno de los métodos para la extracción del ADN tiene una grado de
supremo cuidado es decir se debe realizar cada procedimiento tal cual
se detalla porque un solo cambio en los reactivos puede cambiar los
resultados esperados, por ejemplo si el alcohol se hubiese agregado
caliente posiblemente, la solución obtenida no sería el ADN. De igual
manera el manejo adecuado de los reactivos debe ser cuidadoso En caso
de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy
claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo
mejor, la calidad y cantidad de la muestra vegetal, así como las
características fisicoquímicas dependiente de la especie estudiada,
influirán en la concentración y pureza del extracto final, el cual debe ser
preservado en buffer si se quiere utilizar a futuro. Se recomienda para
nuevos procesos de extracción de ADN vegetal, usar el método de lisis de
membranas por enzimas específicas para evitar daño en demasía al
material genético con el método mecánico tradicional.
 Bibliografía

HISTORY CHANNEL IBERIA. (30 de 12 de 2016).

CRIME+INVESTIGACIÓN.
Obtenido de https://citv.es/blog/que-es-y- como-se-realiza-
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