Sunteți pe pagina 1din 34

PRINCIPALELE

TESTE BIOCHIMICE UTILIZATE IN


DETERMINAREA STARII DE IGIENA
SI A SALUBRITATII PRODUSELOR
ALIMENTARE
- (BACTERIOLOGIA ALIMENTARA)
TESTUL HEMOLIZEI
• Capacitatea unor bacterii de a elabora enzime
care pot produce hemoliza globulelor rosii
ale diferitelor specii de animale.
• Speciile cele mai utilizate fiind: oaia, calul,
iepurele, s.a.
• Mediul utilizat cel mai frecvent este geloza
sange (agar sange), cu o proportie de 5-10%
sange inglobat in mediu.
TESTUL DE HEMOLIZA –
TEST DE PATOGENITATE
• PREZENTA HEMOLIZEI - denota
capacitatea patogena a bacteriilor testate;
• Bacterii importante pentru microbiologia
alimentara –testate pt. hemoliza: E. coli,
Bacillus cereus, Clostridium perfringens,
Streptococcus, etc.
• LIPSA HEMOLZEI - denota lipsa de
patogenitate a bacteriilor cercetate.
TIPURI DE HEMOLIZA
• HEMOLIZA ALFA - producerea in jurul
coloniei a unei decolorari mai putin intinsa,
insotita de o inverzire a mediului -
EFECTUL VIRIDANS – datorita
transformarii hemoglobinei in
methemoglobina sub actiunea apei oxigenate
produsa de bacterie.
• Hemolizinele streptococice sunt active fata
de globulele rosii de iepure.
• HEMOLIZA BETA – decolorarea intensa a
mediului agar sange in jurul coloniei,
datorita unui proces intens de hemoliza.
• Hemolizinele streptococice sunt active fata
de globulele rosii de oaie.
• HEMOLIZA GAMMA – hemolizinele
streptococice sunt intense fata de globulele
rosii de iepure si foarte putin active fata de
cele de oaie.
TESTUL INDOLULUI
o Dezintegrarea triptofanului sub actiunea
unor enzime elaborate de microorganisme;
o Indolul se pune in evidenta cu ajutorul unor
reactivi, cel mai utilizat fiind reactivul
Kovacs sau
o cu ajutorul benzilor de hartie impregnate cu
indicatori;
Testul indolului cu reactiv
Kovacs
• presupune punerea in contact a culturilor de
bacterii insamantate pe medii lichide –
preferabil apa triptonata, cu reactivul Kovacs,
reactiv pe baza de iod ;
• TEST POZITIV- aparitia unui inel de culoare
rosie la suprafata mediului;
• TEST NEGATIV – nu apare inelul de
culoare rosie sau prezinta alta coloratie.
TESTUL BENZILOR
DE INDOL
• Benzile de indol sunt benzi de hartie cu o
lungime de 10-12cm, 0,5cm latime si care au
impregnat 1/3 din lungimea benzii cu
indicator.
• TEST POZITIV - innegrirea benzii dupa 24-
48 ore de incubare, benzi care contin indicator
pentru indol;
• TEST NEGATIV – nu se constata innegrirea
benzii.
• Bacterii indol pozitive - Escherichia,
Pasteurella, etc.;
• Bacterii indol negative – Salmonella,
Enterobacter, Proteus, Hafnia,etc.
TESTUL HIDROGENULUI
SULFURAT
• Capacitatea unor enzime bacteriene de a
dezintegra aminoacizii care contin sulf:
cistina, cisteina, etc.;
• Se pune in evidenta cu ajutorul benzilor sau
a mediilor care contin acetat de plumb:
• Medodele pe medii de cultura si cu ajutorul
benzilor.
TESTUL H2S PE MEDII
• TEST POZITIV - innegrirea centrului coloniei
cultiva de mediile care contin 1-10% acetat de
plumb sau innegrirea mediului din jurul
coloniei daca se produce sulfura de plumb
rezultata din combinarea hidrogenului sulfurat
si a acetatului de plumb.
• TEST NEGATIV – nu se constata colonii cu
centrul negru sau innegrirea mediului in jurul
coloniei.
TESTUL BENZILOR pt. H2S
• Benzile pentru H2S sunt benzi de hartie cu o
lungime de 10-12cm, cu o latime de 0,5cm si
care au impregnat 1/3 din lungimea benzii cu
indicator, cel mai utilizat fiind acetatul de
plumb.
• TEST H2S POZITIV - innegrirea benzii
dupa 24-48 ore de incubare, benzi care
contin 10% acetat de plumb;
• TEST H2S NEGATIV – nu se constata
innegrirea benzii.
• Bacterii H2S pozitive - Proteus, Salmonella,
Citrobacter:
• Bacterii H2S negative – Escherichia,
Enterobacter, Staphylococcus.
TESTUL DE HIDROLIZA A
UREEI
• presupune punerea in evidenta a
proprietatilor unei bacterii de a hidroliza
ureea, realizata pe medii lichide sau solide
care contin uree 10-20%;
• Medii de cultura utilizate: MIU,
Christensen, bulion uree, etc.
TESTUL CITRATULUI

• presupune punerea in evidenta a


proprietatilor unei bacterii de a utiliza
citratul de amoniu sau de sodiu ca unica
sursa de carbon – pe mediul Simmons;
• Mediul contine 1,5% albastru de bromtimol
• TEST POZITIV - virarea culorii mediului
din albastru verzui in albastru intens;
• TEST NEGATIV – nu se constata
modificarea culorii mediului de cultura,
acesta ramane verde- albastru.
• Bacterii citrat pozitive - Salmonella,
Enterobacter, Citrobacter:
• Bacterii citrat negative – Escherichia,
Shigella.
UTILIZAREA SISTEMELOR MULTITEST

• Pentru testare biochimică se utilizează:


• concomitent mediile agar TSI, MIU, MIO,
MIL, MILF, citrat Simmons, RM-VP,
geloză nutritivă, etc, şi reactivii pentru
reacţia RM-VP, citrat de fier, reactivi
pentru indol, etc., sau
• sisteme multitest standardizate, care
utilizează un număr mult mai mare de
teste care pot fi efectuate şi care se pot
interpreta vizual, prin reacţie de culoare
sau automat, fiind că s-au dezvoltat de
către unele firme programe specializate.
• sisteme multitest standardizate, care
utilizează un număr mult mai mare de
teste care pot fi efectuate şi care se pot
interpreta vizual, prin reacţie de culoare
sau automat,
• acestea s-au dezvoltat de către unele
firme programe specializate.
MEDII DE CULTURA
MULTITEST
• Efectuarea testelor biochimice;
•  Mediul TSI – glucoză, lactoză, zaharoză
• Interpretarea reacţiilor biochimice se face
prin vizualizarea culorii pe coloana şi
panta mediului TSI:
• coloana galbenă a mediului denotă
fermentarea glucozei (reacţie pozitivă);
• coloana roşie sau neschimbată indică
neutilizarea glucozei (reacţie negativă);
• apariţia coloraţiei negre, denotă
producerea de hidrogen sulfurat;
• apariţia coloraţiei negre, denotă producerea
de hidrogen sulfurat;
• producerea de gaz din glucoză se
vizualizează prin apariţia bulelor de gaz în
mediu sau chiar prin ruperea mediului.
• panta mediului de culoare galbenă denotă
fermentarea lactozei şi/sau zaharozei
(lactoză şi/sau zaharoză pozitivă), iar
• culoarea roşie sau neschimbată indică
neutilizarea lactozei şi/sau zaharozei
(lactoză şi/sau zaharoză negativă);
• culturile tipice de salmonele corespund unei
pante de culoare roşie (mediu alcalin),
coloană galbenă (fermentare alcalină), cu
formarea, în cele mai multe cazuri a
hidrogenului sulfurat şi cu formare de gaz;
• Salmonella nu produce indol, reacţie
negativă pe banda de hârtie impregnată cu
para-dimetilamino-benzaldehidă. Cu
excepţia serotipurilor Gallinarum şi
Pullorum toate clelelalte serotipuri sunt
mobile.
• Mediul MILF – mobilitate, indol, lizină,
fenilalanină
• apariţia unei coloraţii violete după incubare indică
o reacţie pozitivă, deci producerea
lizindecarboxilazei, salmonelele fiind de regulă
lizindecarboxilază pozitive;
• verificarea producerii de feninalanindecarboxilază
se verifică prin adăugarea clorurii ferice la
suprafaţa mediului, salmonelele fiind
feninalanindecarboxilază negative nu se produce
virarea culorii în verde (reacţie negativă);
• mobilitatea tulpinilor însămânţate
determină modificarea turbidităţii mediului,
indiferent de modificările de culşoare care
pot apărea;
• Reacţia indolului este negativă.
• Mediul MIL - este un mediu semisolid, care
se toarnă drept, în tuburi cu diametrul mic,
în care se însământează prin înţepare pe
toată coloana, din cultura de cercetat. Este
utilizat pentru verificarea decarboxilării
lizinei după o incubare de 24 de ore la 35 0C
sau 370C.
• Apariţia unei coloraţii violete în mediu
reflectă o reacţie pozitivă, Salmonella
decarboxilează lizina, deci determină
apariţia culorii violete. Reacţia negativă
este dată de coloraţia galbenă a coloanei
mediului. Acest mediu verifică şi
existenţa mobilităţii, care se traduce prin
tulburarea mediului de-a lungul liniei de
însămânţare.
• Mediul CS – Citrat Simmons
• bacteriile din genul Salmonella utilizeză
citratul de sodiu
• reacţie pozitivă, apariţia coloraţiei
albastre a mediului, deci virarea din
verde în albastru, după incubare;
• reacţie negativă nu se modifică culoarea
iniţială a mediului.
• Mediul MIU şi Christensen - este utilizat
pentru verificarea utilizării ureeii prin
hidroliză
• germenii din grupul Salmonella nu folosesc
urea- reacţie negativă,
• coloraţia mediului (maronie pentru MIU şi
galben deschis la mediul Cristensen) nu este
modificată;
• reacţia pozitivă – se produce o îngălbenire a
mediului.
•  
TESTUL OXIDAZEI
• presupune punerea in contact a unei
colonii, fragment de colonie sau a unei
culturi de cercetat obtinuta la 2 zile, maxim
4 zile pe un mediu solid si care se combina
cu reactiv pentru oxidaza, solutie apoasa de
1% concentratie – tetrametil-parafenil-
endiamin-hidroclorid.
• TEST POZITIV – aparitia unei coloratii
violacee, negricioasa sau negricosa-
maronie, in functie de producator ;
• TEST NEGATIV – lipsa aparitiei unei
coloratii, hartia de filtru ramane alba, alb-
galbuie.
TESTUL CATALAZEI
• Combinarea culturilor de testat obtinute pe medii
solide - se recolteaza o colonie sau un fragment de
colonie si se pune in contact cu o picatura de apa
oxigenata pe o lama de microscop sau sticla de
ceas.
• Combinarea culturilor de testat obtinute pe medii
lichide cu 5ml de bulion triptic de 24 ore avand 3
ml H2O2 in concentratie 3%.