TULPINI BACTERIENE NECESARE

SISTEMULUI DE AGRICULTURĂ PE
BAZĂ DE MULCI BIOACTIV IZOLATE
DIN ZONA DE SUD-EST A ROMÂNIEI
Florica CONSTANTINESCU1, Sorina DINU1, Oana SICUIA1, Roxana ZAMFIROPOL1
1
- Institutul de Cercetare-Dezvoltare pentru Protecţia Plantelor
Proiect Makis : Sistem de agricultură
alternativă pe bază de mulci vegetal
bioactiv format din culturi verzi

OBIECTIVE:
1 Dezvoltarea unui sistem de agricultură alternativă prin
utilizarea mulciului vegetal bioactiv format din culturi verzi de
leguminoase (mazăre, măzăriche, lupin, sulfină albă) şi din culturi
verzi de crucifere (rapiţă, muştar).

2 Diseminarea pe scară largă a sistemului de agricultură

alternativă, cu reliefarea rezultatelor clare şi semnificativ
avantajoase pentru producătorii agricoli.
Izolare
tulpini
Biopreparate
Selecţie inoculante pe bază de
bacterii din grupul
tulpini
Rhizobium

Formulare
biomasă Biopreparate destinate
formării mulciului bioactiv,
pe bază de bacterii
sporulate din genul
Bacillus
 Grupul Rhizobium
 Bacterii simbionte
 Fixatoare de azot
 Asigura un aport de 100-300 kg
azot substanta activa/ha

Noduli pe radacina unei

plante leguminoase

Plantă de mazăre (Pisum sativum) Bacteroizi în interiorul unui nodul

 Tulpini specifice diferitelor culturi de
protecție în timpul iernii
Rhizobium leguminosarum bv. viciae Rhizobium lupini
Mazăre de iarna Măzăriche de
Lupin
toamnă
 Biopreparate pe bază de Rhizobium
leguminosarum
Avantaje:

 Îmbogățirea cu azot a solului fără a

determina poluare;

 Creșterea fertilității solului prin

îmbunatățirea structurii (producere EPZ);

 Stimularea creşterii plantelor datorită

producerii de fitohormoni.
 Bacillus subtilis
Utilizat în combaterea biologică a
fitopatogenilor
 Formează spori – foarte rezistenți la
factorii de stress din mediu

Biopreparate existente pe piața

mondiala
Epic (Gustafson, SUA)
Serenade (Agra Quest, UE, SUA)
Kodiak (Gustafson, SUA)
System (SIAPA, UE)
 Avantajele biopreparatelor pe bază de
Bacillus subtilis în sistemul agricol propus

 Creșterea capacității de mineralizare a

materialului vegetal
 Diminuarea cantității sporilor ciupercilor
fitopatogene de sol din mulci
 Stimularea creșterii plantelor prin
producerea de auxine sau gibereline
 Asigurarea unor recolte sporite simultan cu
reducerea aplicării pesticidelor
Izolarea de tulpini biologic active din
Bărăganul de sud si Dobrogea de sud
 Probe de sol din culturi de crucifere,
leguminoase și
miriște.
 Probe vegetale din plante de rapiță.

 356 tulpini bacteriene au fost analizate și

caracterizate în scopul selecției
Selecţia izolatelor bacteriene s-a realizat
pe baza următoarelor caracteristici:

-Capacitatea antagonistă in vitro;

- Producerea de enzime:
proteaza,celulaza, amilaza, lactonaza;
-Mobilitatea izolatelor;
-Stimularea creşterii plantelor;
-Producerea de hormoni de creştere (IAA) şi
-Testarea inocuităţii izolatelor.
 Identificarea bacteriilor izolate
 Teste biochimice şi coloraţia Gram

G- G+

Testul Biolog de degradare

oxidativă a diferitelor
substrate, cuplat cu baze de date
specifice.

 Identificarea microorganismelor selectionate

până la nivel de specie prin amplificarea 16s rADN
prin tehnica PCR.
 Selecţia tulpinilor bacteriene
Activitatea antagonistă s-a analizat in vitro faţă de Fusarium spp.,
Alternaria spp, Botrytis spp., Sclerotinia sclerotiorum şi Sclerotium
bataticola
Metoda culturilor duble Metoda înţepării punctiforme a mediului

Versus Sclerotium bataticola

Versus Alternaria spp.

Versus Fusarium graminearum
 Producerea de enzime

56.1s MB2

Us1 FL400

Protează Celulază Amilază

(tulpinile 56.1s; 53, 54, 55) (tulpina 56.1s)
 Producerea de enzime
Quorum sensing
Lactonază
CV026

Ps33

Fl400
 Testarea mobilităţii

56.1s PCL1764

Mobilitatea de migrare la suprafaţa agarului (swimming)

Mobilitatea de agregare (swarming)

 Tulpini selectate
FL400 – Paenibacillus graminis
– izolat din rizosferă de grâu

Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.

Produce metaboliţi antifungici - antagonistă faţă de toate

ciupercile de sol studiate.

Mobilitate: de migrare si de agregare.

Stimulează creşterea plantelor de tomate şi de fasole

Stimulează formarea nodozitaţilor pe rădăcini de plante

leguminoase.
Identificat pe baza 16s rADN.
56.1s - Brevibacillus laterosporus
– izolat din sol

Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.

Produce metaboliţi antifungici - antagonistă faţă de toate

ciupercile de sol studiate.

Mobilitate: de migrare şi de agregare.

Stimulează creşterea plantelor de tomate.

Identificat pe baza 16s rADN.

Us1 – Bacillus marisflavi
– izolat din rizosfera de usturoi

Enzime produse: proteaza, amilaza, lactonaza.

Producere de metaboliţi antifungici.

Mobilitate: de migrare şi de agregare.

Stimulează creşterea plantelor de tomate.

Identificată pe baza 16s rADN.

 Biotestarea in vitro a efectului fitostimulator
asupra plantulelor de grâu

 Spor de creştere al
rădăcinilor, faţă de martor,
cuprins între 9,28% şi
25,77%.
Martor Varianta FL400 (107 ufc/ml)

Seminte de grâu germinate dupa 72 ore de la

inoculare cu tulpina de Paenibacillus graminis
FL400 vs. Martor
 Testarea in vivo a izolatelor bacteriene
selecţionate în ceea ce priveşte stimularea
creşterii plantelor de tomate

Varianta tratată cu tulpina

FL400

Var. tratata cu tulpina 56.1s Mt neinoculat

 Testarea in vivo a tulpinilor bacteriene selecţionate pe
plante de măzăriche de toamnă

Bloc randomizat cu 4 variante in 4

repetitii:

V1= Martor nebacterizat

V2= Tratament la samanta cu B49b
V3= Tratament la samanta cu FL400
V4= Tratament la samanta cu B49b
+FL400

Experienţă cu plante de Vicia villosa în câmpul B49b - Bacillus subtilis

I.C.D.P.P. (foto O. Sicuia, ianuarie 2010) FL400 – Paenibacillus graminis
 Producerea de fitohormoni auxinici (IAA-
acid indolil 3-acetic)
Cod tulpini/ 56.1s FL400 Us1 Sp s2 Mzb1
Varianta de
creștere
Crescute 0,150 0,166 0,156 0,156 0,143
fără (6 (6,64 (6,24 (6,24 (5,76
triptofan ug/ml)* ug/ml) ug/ml) ug/ml) ug/ml)
Crescute cu 0,208 0,210 0,197 0,191 0,195
triptofan (8,32 (8,4 (7,88 (7,64 (7,34
ug/ml) ug/ml) ug/ml) ug/ml) ug/ml)

Producerea de IAA (acid indolil 3 acetic) în prezența sau absența triptofanului.

*Valorile reprezinta cantitatea de IAA în µg/ml în supernatantul culturii dupa 8
zile de creștere a bacteriilor în mediul nutrient broth suplimentat sau nu cu
triptofan (100 µg/ml).
 Testarea inocuităţii izolatelor
selecţionate

Se determină cu ajutorul
biotestului de inocuitate pe bază
de larve de Galleria mellonela.

Inocularea larvelor cu
suspensii bacteriene în
concentraţie de 102 ufc/ml şi
106 ufc/ml
 Concluzii

Au fost selecționate 3 tulpini de microorganisme cu activitate

biologică ridicată care au provenit din Baraganul de sud.

Tulpinile sunt depuse la autorităţi de depozit internaţional şi

sunt în curs de brevetare.

Pe baza acestor tulpini vor fi produse biopreparate bacteriene

destinate sistemului de agricultură pe bază de mulci bioactiv.