DETERMINACIÓN DE

COLIFORMES (AGUA)
 ACONDICIONAMIENTO (DÍA 1)

16 tubos de ensayo de 10ml 16 pipetas(1ml)

CAPTACIÓN

EFLUENTE

LAG. SECUND.
Esterilizar las pipetas en el
horno por 1hr y esperar que se
enfríe durante 1hr.
 27 tubos de ensayo 27 Tubos durham se colocan invertidos

CAPTACIÓN EFLUENTE LAG. SECUND.

-6 -5 -4 -6 -5 -4 -4 -3 -2
 PREPARACIÓN DE MEDIOS

2 PIPETAS (5ml) PIZETA PROPIPETA BAGUETA

PEPTONA MEDIO A1

PEPTONA 16 tubos + 3 (seguridad) Mezclar la sustancia(Medio

A1 o Peptona) con el agua
1gr 1000ml destilada en el vaso de
Xgr 180ml precipitado haciendo uso de la
bagueta, luego verter al
X = 0.18 gr Erlenmeyer.
MEDIO A1 27 tubos + 3 (seguridad)

31.5gr 1000ml
Xgr 310ml
X = 9.765 gr Vaso de precipitado Erlenmeyer (500ml)
 C E L. S.
CAPTACIÓN
-6 -6 -4

EFLUENTE -5 -5 -3

-4 -4 -2
LAG. SECUND.

EXTRAS EXTRAS

Colocar los (19+30) = 49

tubos de manera inclinada
en la canastilla metálica y
cubrir con papel Kraft para Autoclave por 1 hr
rotular. T=121 °C
 INOCULACIÓN (DÍA 2)
PEPTONA
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Mechero de alcohol

C
-4 -5 -6

NOTA:
E
• Agitar 30 a 40 veces por cada dilución
• Cada pipeta utilizada se descartara
-4 -5 -6
para evitar la contaminación
• Se conservará las últimas 3 pipetas
utilizadas.
L.S.
• Procurar que el mechero no se
-2 -3 -4 encuentre tan cerca ni tan lejos.
MEDIO A1

CAPTACIÓN EFLUENTE LAG. SECUND.

-4 -5 -6 -4 -5 -6 -2 -3 -4
Colocar los tubos del medio
A1 inoculados en una gradilla

Luego se trasladan a la incubadora

a 35°C por 3hrs

Después se coloca a baño maría a 44.5°C por 24 hrs.

 MEDICIÓN (DÍA 3-4)

-4 -5 -6
SI NO SI
NO SI NO

SI SI NO

RESULTADOS 2 2 1

SI = Presencia de burbujas en el durham

-4 -5 -6 NO = No hay presencia de burbujas en el durham

MEDICIÓN (DÍA 3-4)

2 2 1
12 NMP

Para 10ml : 10^(-4)

1ml : 10^(-5)
0.1ml : 10^(-6)

Por regla de tres simple

  𝑁𝑀𝑃 𝑥 10 𝑚𝑙
𝑚𝑒𝑛𝑜𝑟 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑞𝑢𝑒 𝑠𝑎𝑙𝑖 ó 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜 −4
10 =10

 Reemplazando valores
 
=1,2
PRECAUCIONES

• Siempre procurar tener un espacio libre y limpio al

momento de realizar la inoculación de las
muestras.

• Los tubos de ensayo y las pipetas deben

encontrarse a una temperatura ambiente, NUNCA
se debe inocular si estos se encuentran calientes
porque induce a errores en los resultados.

• Colocar de manera correcta los tubos durham, de

lo contrario no se podrá realizar la medición.

• Si no se hará uso de las muestras a la brevedad,

se deberá almacenarlas en la incubadora a
temperatura ambiente a fin de mantener la
representatividad de la muestra.