REACCIONES SEROLOGICAS

PRUEBAS SEROLÓGICAS: selección

 Sensibilidad: probabilidad de que un

individuo enfermo de positivo en el test
(% de (+) en grupo de enfermos)

Especificidad: probabilidad de que un

individuo sano de negativo en el test (%
de (-) detectados en grupos de sanos)
Principios
Principios de
de los
los Métodos
Métodos Serológicos
Serológicos
Reacción Antígeno-Anticuerpo
La reacción entre un antígeno (Ag) y un anticuerpo
(Ac) dirigido específicamente contra él da lugar a un
complejo antígeno – anticuerpo

Utilizada ampliamente en los laboratorios para la

detección y cuantificación de gran cantidad de
sustancias en diversos medios biológicos.
 AGLUTINACION
AGLUTINACION
 . Fundamento:  reacción inmunoquímica Ag-Ac; que
«produce la agregación de partículas o células recubiertas
de antígeno o anticuerpo».

 En esta técnica se hacen visibles los complejos Ag-Ac por

la aglutinación que producen los anticuerpos cuando el Ag
forma parte o se ha unido artificialmente a la superficie de
glóbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partículas de látex..

 Se divide en dos fases, 1ª : contacto Ag-Ac sobre la

superficie de la partícula (o célula), y 2ª en la que las
partículas se agregan y se puede visualizar la aglutinación.
 Caracteristicas
  Ag (sobre células o partículas ) generalmente
poli antigénicos. Ac de clase IgM e IgG
     
  Reacción con Ag superficiales

  Reacción bastante sensible

  Reacción relativamente específica (depende de

comunidad Ag)
 Modalidades
Aglutinaciones en Lámina:
Prueba rápida y específica para despistaje. 
Valores positivos deben ser interpretados.

Aglutinación en Tubo:
 Las Aglutinaciones en Tubo proporcionan un menor número
de reacciones falsas negativas/positivas.
Tipos
 Aglutinación directa
 Inmune
 No inmune
 Aglutinación pasiva o indirecta (latex, bentonita)
 Precipitación
Precipitación

El antígeno: molécula soluble que al

contacto con los anticuerpos, se forman
complejos Ag-Ac que al insolubilizarse
precipitación.

 Se da en 2 etapas: la primera se

desarrollan los complejos Ag-Ac.
En la 2a los complejos se agregan formando
micelas o redes que precipitan. Esto se
acelera aumentando la Tº, además es
dependiente de la concentración de
electrolitos.

La formación de estas redes esta dada por la

bivalencia del Ac. y la polivalencia del Ag.
 Tipos
Tipos de
de reacciones
reacciones de precipitación   
de precipitación
 a) En medio líquido:
     Cualitativa: para utilizar este método debemos
asegurarnos de que uno de los reactivos este
puro, por la posible existencia de mas de un
complejo en la mezcla.
     Semicuantitativa: constituye un método poco
práctico.
     Cuantitativa: esta es la primera  técnica que
permitió medir en masa la cantidad de
Ag. o Ac. presente en una solución.
 
b)   En medio sólido ( precipitación en
gel) :
Las  moléculas de los reactivos difunden
libremente a través de un gel, donde se
encuentren (equivalencia), se producirá un
precipitado que se verá como una nítida
banda blanca.
 REACCIÓN
REACCIÓN DE
DE PRECIPITACIÓN
PRECIPITACIÓN

Antígeno
Exceso de soluble
antígeno

Equivalencia Anillo de
precipitación

Exceso de
anticuerpo

Anticuerpo
 Ag + agar
Solución de Ag
al 1 %
en S.S.F.

agar
al 0.5 %
Ac + agar
al 1 %
INMUNODIFUSIÓN
INMUNODIFUSIÓN

Ac Ag

Banda de precipitación

Ac Ag

Bandas de precipitación
 INMUNOELECTROFORESIS
INMUNOELECTROFORESIS

Ag

Agar gel
Ag

anticuerpo

bandas
de precipitación
 TEST
TEST DE
DE FIJACIÓN
FIJACIÓN DEL
DEL COMPLEMENTO
COMPLEMENTO
TEST POSITIVO Añadir antígeno Añadir complemento Añadir hematíes-Ac.

Suero con
anticuerpos

Formación Fijación del Células rojas

de complejos complemento íntegras
 TEST
TEST DE
DE FIJACIÓN
FIJACIÓN DEL
DEL COMPLEMENTO
COMPLEMENTO
Añadir complemento Añadir hematíes-Ac.
Añadir antígeno
TEST NEGATIVO

Suero sin
anticuerpos

No formación
de complejos Complemento Células rojas
libre lisadas
PRUEBAS SEROLÓGICAS. TIPOS
Enzimoinminoanálisis de absorción ELISA
Ag unido a fase sólida
+
Suero

Lavado

+
Anti-Ac*

Lavado

+
Sustrato
 ELISA
ELISA
Placa
Antígeno

Pocillo
Anticuerpo

Enzima

Anticuerpo marcado

Substrato

Producto
coloreado
 INMUNOFLUORESCENCIA
Directa
Colorante
fluorescente
Anticuerpo

Antígeno

Superficie celular
 INMUNOFLUORESCENCIA
Indirecta
Anticuerpo

Colorante
fluorescente
Anticuerpo anti
Ac. original
Superficie celular

Superficie celular