Mutatiile

Mutatiile
• Evenimentul care produce o varianta
de secventa ADN
 Tipuri de mutatii
• Deletia unei gene
• Duplicatia unei gene
• Disruptia unei gene printr-un
rearanjament cromozomial
• Deletia sau duplicatia unuia sau mai
multor exoni ai unei gene
• Mutatii ale promotorului
• Mutatii care afecteaza splicing-ul
 Tipuri de mutatii
• Mutatii care afecteaza cadrul de citire
(frameshifts)
• Mutatii care introduc un stop codon
prematur (nonsense)
• Mutatii care inlocuiesc un AA cu un
altul (mis-sense)
• Mutatii care schimba un codon ptr un
AA cu un altul ptr acelasi AA
(substitutii sinonime)
 Mutatii
• Nule sau amorfice (nu exista produs
sau functie)
• Hipomorfice (cantitate mica de
produs sau functie redusa)
• Hipermorfice (produs sau functie in
exces)
Deletia unei gene
Duplicatia unei gene
 Deletia sau duplicatia unei
gene
• Scaderea sau cresterea produsului
genic
• Există si del/dup non-patogene
(CNV)
• Gena dozaj-sensibila = daca o
crestere sau scadere cu 50% a nr de
copii cauzeaza o schimbare
fenotipica
 Disruptia unei gene
• Fragmentul 5’ al genei retine
promotorul si poate fi transcris, dar
nu exista un transcript de lungime
normala
• ARNm partial, instabil
• Se poate crea o gena himerica noua
prin alaturarea de exoni din gene
diferite (cancer)
Mutatii care afecteaza transcriptia
unei secvente codificatoare intacte
• Modificarea promotorului – aboleste,
reduce sau creste transcriptia unei
gene; produs genic normal, dar in
cantitate mica/mare sau in alte
tesuturi
• Modificari ale altor secvente
reglatoare ale transcriptiei
Mutatii care afecteaza splicing-
ul transcriptului primar
• Abolirea sau modificarea site-urilor
de splice – orice schimbare a
dinucleotidelor GT…AG care
marcheaza inceputul si, respectiv,
sfarsitul intronilor, si care afecteaza
site-ul de splice
 Mutatii care afecteaza splicing-ul
transcriptului primar
• Activarea unui site splice nou –
activarea unui site splice criptic prin
modificari de secvente – in exon sau
in intron
• Schimbarea echilibrului isoformelor
de splice
Mutatii care cauzeaza erori de
translatie
• Mutatii frameshift – insertia sau
deletia oricarui nr de nucleotide care
nu este multiplu de 3; efectul =
modifica complet citirea tuturor
mesajelor dincolo de mutatie; se
produce un polipeptid complet nou,
instabil
• Deletii sau duplicatii ale unui exon –
efectele depind de formarea sau nu a
unui frameshift (DMD/B)
Mutatii care cauzeaza erori de
translatie
• Mutatii nonsens – convertesc orice
codon intr-un stop codon (TAG, TAA,
TGA);
• nonsense-mediated decay =
mecanism de detectare si degradare
a ARNm ce contin stop codon
prematur
 Mutatii care cauzeaza
substitutii de aminoacizi
• Schimbarea unei nucleotide dintr-o
secventa codanta va schimba un codon
in altul
• Efecte: - substitutii sinonime –
schimbarea unui codon cu altul care
codifica acelasi AA
• - mutatii mis-sense – inlocuiesc
un AA cu altul prin schimbarea
codonului
 Efectele mutatiilor
• Pierdere de functie
• Castig de functie
 Efectele tipurilor comune de
mutatii
• Deletie sau inversie mare – functie
complet abolita
• Duplicatia unei gene – va creste
cantitatea de produs cu 50%
• Modificarea promotorului sau a
secventelor reglatoare – poate reduce
sau creste nivelul de transcriptie
• Schimbare in intron – fara efect
 Efectele tipurilor comune de
mutatii
• Mutatie splicing – pierdere de functie
• Mutatie framshift – pierdere de
functie
• Mutatie nonsense – pierdere de
functie
• Mutatie mis-sense – pierdere, castig
sau fara efect
• Substitutie sinonima – fara efect
 Corelatii fenotip-genotip
• Mutatiile unei gene sunt prezente la
majoritatea pacientilor cu un anumit
sindrom
 Corelatii fenotip-genotip
• Boala Huntington – toate cazurile au
>36 secvente repetitive CAG; marimea
secventei se coreleaza cu varsta de
debut
• Fibroza chistica – corelatii slabe cu
severitatea in FC clasica
• Surditate – mutatiile mis-sense
asociate cu o forma mai putin severa
decat cele nonsens.
 Corelatii fenotip-genotip
• Distrofia musculara – deletiile
frameshifting produc DMD, deletiile
in-frame produc DMB
 Corelatii fenotip-genotip –
interpretarea noilor mutatii mis-sense
• A mai fost raportata, anterior,
mutatia ca si cauza a bolii? daca da,
raportarea este de incredere?
• A fost gasita mutatia la persoane
sanatoase? Daca nu, este putin
probabil sa fie o varianta polimorfica
comuna, dar ar putea fi o varianta
neutra rara nedescrisa anterior
 Corelatii fenotip-genotip –
interpretarea noilor mutatii mis-sense
• Daca pacientul este dintr-o familie cu mai
multi membrii afectati, este prezenta
mutatia la toti indivizii afectati? Daca nu,
atunci este improbabil sa fie patogenica.
• Aminoacidul inlocuit are un rol vital in
functia sau structura proteinei? Daca toate
proteinele inrudite la oameni si alte
animale au acelasi aminoacid la acea
pozitie (reziduu conservat evolutionist),
aceasta ar fi o evidenta a unui rol vital.
 Cum apar mutatiile?
• Alterarea DNA
• Erori de replicare
• Ruperi ale catenelor prin erori de
replicare, modificari chimice, iradiere
naturala
• Ruperi ale ambelor catene – mai
severa
 Nomenclatura mutatiilor
• - g = DNA genomic
• - p = proteina codificata
• - > = schimbat cu: 76A>C=la nucleotidul 76 o A este
schimbata cu o C
• - 76-78del = deletie de 3 nucleotide
• - Ala26Val sau p.A26V = alanina-26 este schimbata cu o
valina
• - Cys318X sau p.C318X = codonul ptr cisteina 318 este
schimbat intr-un stop codon

• http//www.genomic.unimelb.edu.au/mdi/mutnomen/
 Definitii
• Malformatie = anomalie morfologica
cauzata de un proces anormal de
dezvoltare; o eroare primara a
morfogenezei, e.g. despicatura palatina
• Secventa malformativa = un pattern de
defecte multiple secundare unei
malformatii unice primare
• Sindrom malformativ = un pattern de
manifestari, adesea cu o cauza unica,
secundar catorva erori diferite de
morfogeneza
 Definitii
• Deformatie = distrosiune printr-o forta
fizica a unei structuri altfel normala
• Disruptie = distructia unui tesut care
a fost anterior normal
• Displazia = organizare celulara
anormala intr-un tesut care are drept
urmare modificari structurale (displazii
schletice)
Hibridizarea acizilor nucleici
• Denaturarea ADN – ruperea
legaturilor de H2 dintre cele 2 catene
prin expunere la temperatura inalta
sau pH inalt
• Hibridizarea – unirea acizilor nucleici
monocatenari complementari ptr a
forma un dublu helix prin amestecare
in solutie la o temperatura si pH
moderat
PCR