CONTROL DE CALIDAD

• PREPARAR 1 mL DILUCIÓN DE SUERO DE COOMBS

AL 16%
• TOMAR 12 TUBOS DEL MATERIAL LAVADO
• AGREGARLES 2 GOTAS DE LA DILUCIÓN
• PASAR EL REACTIVO POR TODAS LAS PAREDES
• REPOSARLOS 10 MINUTOS EN POSICIÓN
HORIZONTAL
• AGREGAR UNA GOTA DE ERITROCITOS
SENSIBLIZADOS, CENTRIFUGAR Y LEER
• TODAS LAS AGLUTINACIONES DEBEN SER
SEMEJANTES, DE LO CONTRARIO, LAVAR DE NUEVO
EL MATERIAL QUE PASÓ EL CONTROL DEBE DE
REVISARSE VISUALMENTE CONTRA UNA LUZ BLANCA
PARA ELIMINAR LOS TUBOS O PIPETAS QUE TENGAN
RESIDUOS CONTAMINANTES.

LOS QUE PASAN ESTE CONTROL SE SEPARAN EN

RAYADOS PARA HACER GRUPO Y Rh(o)D Y LOS NUEVOS
PARA REALIZAR PRUEBAS CRUZADAS, INVESTIGACIÓN
DE ANTICUERPOS Y FENOTIPOS.
 CONTROL DIARIO

• LIMPIEZA DE AREAS
• BAÑOS DE TEMPERATURA CONSTANTE:
• LIMPIEZA, TEMPERATURA CORRECTA ANTES Y AL
INICIO DEL TRABAJO, EN CADA ESTUDIO, AL FINAL
• CENTRIFUGAS: LIMPIEZA, VELOCIDAD, TIEMPOS
• LAVADORAS: LIMPIEZA, VELOCIDAD, TIEMPOS,
LLENADO DE SALINA, BALANCE
• REFRIGERADORES Y CONGELADORES:
LIMIEZA, TEMPERATURA, CARGAS
 CONTROL DIARIO

• CÉLULAS DE FENOTIPO CONOCIDO:

• A1 A2 B O Rho(D) POS. Y NEG
ERITROCITOS SENSIBILIZADOS

• ANTISUEROS COMERCIALES:
• ANTI-A, -B, -AB -Rho(D) CONTROL Rh
• SUERO DE COOMBS POLIESPECÍFICO
 CONTROL DE TÉCNICAS DE
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
 TODOS LOS ERITROCITOS QUE SE
UTILIZAN PARA DETECCIÓN DE
ANTICUERPOS Y CUALQUIER OTRO
ESTUDIO EN INMUNOHEMATOLOGÍA DEBEN
SER LAVADOS 3 VECES CON SOLUCIÓN
SALINA ISOTÓNICA PREVIO A SU
APLICACIÓN
ANTICUERPOS NATURALES REGULARES

• Aparecen desde los primeros días de la vida y

desparecen con la muerte del individuo

• Su concentración varía según medio ambiente y la

integridad inmunológica

• Anti A Anti B Inmunoglobulina IgM generalmente

aglutinante, en ocasiones hemolítica, de amplio rango
térmico

• Anti AB Clase IgM+IgG+IgA, fijadora de complemento,

de amplio rango térmico, en la población mexicana
siempre es causa de hemólisis intravascular en
transfusiones incompatibles
 ANTICUERPOS NATURALES
IRREGULARES

• Aparecen en algunos períodos de la vida por

estímulos externos

• IgM activa hasta 22o C Inactiva a 37o C

• Generalmente no fijan complemento, inocuas en la

transfusión sanguínea
 ANTICUERPOS NATURALES
IRREGULARES

• Anticuerpos más frecuentes:

• Anti -H -A1 -I -i -M -N -P1 -Lea –Leb -E

y sus combinaciones

• Anti E salino generalmente es peligroso

• Anti Lewis pueden llegar a fijar complemento

• AUTO Anti I. –i fijadores de complemento en A.H.A.I.

 ANTICUERPOS INMUNES

• APARECEN DESPUES DE ESTÍMULOS ANTIGÉNICOS

POR EMBARAZO O TRANSFUSIÓN SANGUÍNEA
INCOMPATIBLE

• Anti –D –E –c –e –C -Dia -K -Fy -Jk –S –s

• Pueden ser también los Anticuerpos Irregulares con

actividad a 37o C

• Algunos pueden ser fijadores de complemento y dar

una reacción hemolítica intravascular muy severa:
Kidd, Duffy, Lewis
 SALINA

• Técnica: Suero en estudio y eritrocitos de panel a

concentración: 3-5% en Solución salina isotónica
estéril o Alsever

• Estudos de A.H.A.I.: Sr S22 S37 Scoombs

• En Reacc. Transfusional: Sr S37 Scoombs

• Después de cada incubación investigar hemólisis en

el sobrenadante

• Con esta técnica se puede diferenciar muy bien los

anticuerpos fríos de los “calientes”; de los que fijan
complemento y de los que no lo fijan
 HIPERPROTÉICA

• ALBÚMINA 22% 30% (gramos %)

• Técnica: Suero + eritrocitos + albúmina para una

concentración de proteínas mayor a 10 %

• Ar A37 Acoombs (4 lavados previos)

• Detecta bien anticuerpos del sistema Rh/Hr y Kell

antes de llegar a fase coombs

• Potencia aglutinaciones en Acs. con baja

concentración
 HIPERPROTÉICA

• Potencia la aglutinación de anticuerpos fríos

haciéndoles aparecer a 37o

• Fija complemento en presencia de Acs. Fríos sin

importancia clínica

• Aglutina las células en sueros de Mieloma Múltiple y

en otros padecimientos: S.I.D.A (Cx Inmunes
Relacionados)
 ENZIMAS

• BROMELINA, FISINA, PAPAINA, TRIPSINA

• La primera se puede usar con técnica de una o 2 etapas

• Técnica: Suero en estudio + eritrocitos tratados

E22 E37 Ecoombs

• Muy buena para detectar anticuerpos fríos: H, A1 P Ii

Lewis

• Muy buena para Sistema AB0 Rh/Hr Kell Kidd

 ENZIMAS

• Destruye sistemas MNS Duffy Ge2

• Fija mucho complemento inespecíficamente

• Debe tener un control muy estricto porque destruye

con facilidad los eritrocitos
 L.I.S.S.(low ionic strength solution)

• SOLUCIÓN DE BAJA FUERZA IÓNICA

• TÉCNICA: Suero en estudio + Eritrocitos resuspendidos

en L.I.S.S.+ 2 gotas, Incubar a 37o, lavar 3 veces
agregar suero de coombs (de preferencia IgG
monoespecífico)

• Técnica muy rápida

• Detecta casi todos los anticuerpos inmunes clase IgG

• Alta sensibilidad
 L.I.S.S.(low ionic strength solution)

• No detecta IgM

• Fija mucho complemento inespecíficamente

• Al usar solo IgG monoespecífica se corre el riesgo de

no detectar anticuerpos peligrosos dependientes de
complemento: Duffy, Kidd Lewis
 COLUMNAS DE GEL

• Por intercambio de cargas: Fuera de mercado

• Por gradiente de densidad:

– Utilizan L.I.S.S. como fase líquida
– Técnica rápida, específica, alta sensibilidad
– No detecta IgM ni complemento por estar cargada
con suero de coombs IgG
 MICROCOLUMNAS DE CEFADEX

• Cargadas con suero de coombs monoespecífico

• Con antisueros para Sistema AB0 y Rho(D)

• Columnas neutras
 TIPOS DE INMUNO GLOBULINA ANTI
HUMANA (SUERO DE COOMBS)

• POLICLONAL: obtenidas de animales

• MONOCLONAL: De células murinas modificadas

• MONOCLONAL – POLICLONAL: mezcla

• POLIESPECÍFICO: Anti IgG + anti C3(complemento)

• MONOESPECÍFICO:
Anti: IgG IgM IgA C3 C4
 PERIODOS DE REACCIÓN

TÉCNICA 22oC 37oC

Salina 30-60 min 45-120 min

Albúmina No procede 45-120 min

Enzima 10-15 min 10-15 min

L.I.S.S. No procede 15 min

 OTROS MÉTODOS

• PEG (Polietilen glicol)

• LIP (Polibreno)

• 2 mercapto etanol

• Elusión: Por calor, pH ácido, éter, cloroformo,

tricloro etileno-cloroformo

• Adsorción-elusión

• Neutralización con saliva: Pacientes transfundidos en

los que se desconoce el grupo AB0 original
 ADSORCIÓN-ELUSIÓN

• AUTO ADSORCIÓN:
• A 4oC : Para separar IgM de IgG

• A 37oC: Para separar auto anticuerpos de posibles

aloanticuerpos en A.H.A.I.

• Bromelizar los eritrocitos para hacerlos más

receptivos al auto anticuerpo.

• Se puede realizar en pacientes con transfusiones

lejanas de eritrocitos (F.U.T.:mínimo 3 meses)
 ADSORCIÓN-ELUSIÓN

• PARA SEPARAR MEZCLAS DE ALO ANTICUERPOS

• ERITROCITOS:
• R1R1 Fya neg.
• R2R2
• Rh negativos
• La investigación de anticuerpos se realizan por
separado en el suero adsorto y en el despegado
(eluido) de los eritrocitos utilizados
 TIPOS DE PANELES

• ABO: Células A1 A2 B 0

• Rho(D): Positivo Negativo

• Sensibilizados con anti-D: Positivos Negativos

• Para identificación de Anticuerpos irregulares fuera

del sistema AB0

• Para identificación de anticuerpos fríos (células con

antígenos I i )
 TIPOS DE PANELES PARA
IDENTIFICACIÓN DE ACS. IRREGS.

• Panel 10 células: Abarca todos los Pos/Neg Se

puede definir la especificidad del 98% de los
anticuerpos detectados y la mayoría de mezclas de 2
Acs. en un mismo suero

• Panel 15 células: Tiene Positivos y Negativos poco

frecuentes: K2 (-), Kp(a+) Js(a+) Di(a+) Fy(a-b-)
Ss(-)
 LECTURA

• La especificidad de cada anticuerpo se debe

investigar por separado en cada paso de la técnica
• Buscar similitudes y discrepancias entre las técnicas
usadas
• Diferenciar entre los anticuerpos inocuos y los
peligrosos en la transfusión de componentes
sanguíneos
• Diferenciar los auto anticuerpos de los alo inmunes
• Aplicar criterios basados en el método científico y de
acuerdo a los datos del expediente clínico para
clasificar los anticuerpos encontrados
 CONCLUSIONES

• CONTROL ESTRICTO EN LAVADO DE MATERIAL

• UNA TÉCNICA POR SI SOLA NO DEFINE LOS

ANTICUERPOS CORRECTAMENTE

• ES RECOMENDABLE USAR POR LO MENOS 2

TÉCNICAS

• Correlacionar la respuesta primaria (IgM) y

secundaria (IgG) con la técnica usada
 CONCLUSIONES

• ES NECESARIO CONTROL ESTRICTO EN TÉCNICAS DE

DETECCIÓN, TEMPERATURAS, LECTURAS DE
AGLUTINACION

• UN SOLO PANEL NO RESUELVE EL 100% DE

PROBLEMAS