SERIILE

GRANULOCITARE
 DEFINITIE
- totalitatea precursorilor +
celulelor adulte granulocitare
(neutrofile, eozinofile,
bazofile) care pot fi
recunoscute morfologic in
maduva, sange si in alte
tesuturi;
-
sunt inrudite, dar diferite prin
filiatie si functionalitate;

- au origine comuna in celula

stem pluripotenta (nu poate fi
recunoscuta morfologic).
 METODE DE STUDIU
- Morfologica – microscopia optica;
- Ultrastructurala (organite) – microscopia
electronica;
- Citochimica;
- Imunofenotipica (receptorii de suprafata - Ac
monoclonali) – citometrie in flux;
- Studii de citokinetica;
- Microscopie imuno-electronica si fractionare
subcelulara (pt granulatii, organite):
  
Tehnica de fractionare subcelulara :
- Incubare celule cu azot la presiune mare -
scaderea brusca a presiunii - formarea de
bule de azot in interiorul celulelor si
fragmentarea lor

- Fragmentele celulare sunt separate prin

centrifugare pe baza gradientului de
densitate. 
 PRECURSOR - MIELOBLASTUL
- celula granulocitara “CAP DE SERIE“
- nu apare normal in sangele periferic;
 - forma rotunda, diametrul 10-18m

- CITOPLASMA:
- redusa, uneori intr-o parte a celulei;
- bazofila, aspect spongios
- poate prezenta cateva granulatii azurofile mari

- NUCLEUL:
- ocupa aproape toata celula;
- rotund / ovalar;
- cromatina fin dispersata (aspect punctat,
dantelat, de sita);

- TIPURI MIELOBLASTI:
- tip I – fara granulatii azurofile in citoplasma;
- tip II - <20 granulatii azurofile in citoplasma;
- tip III - >20 granulatii, fara aparat Golgi.
 MIELOBLASTUL
 ME - structura de celula slab diferentiata:
- numerosi ribosomi liberi – citoplasma bazofila;
- cantitate redusa de reticul endoplasmic;
- aparat Golgi putin dezvoltat;
- mitocondrii mici, numeroase.

CITOCHIMIE:
- mieloblast vs limfoblast;

EXPRESIA ANTIGENICA:
- CD34+ (dispare cu maturarea),
- CD33+low (creste cu maturarea),
- HLA-DR+ (scade cu maturarea);
- CD38+, CD13+;
- CD11b, CD16 low (creste cu maturarea).
- MPO+ (creste cu maturarea).
MATURAREA GRANULOCITARA
 PROMIELOCITUL
mai mare decat Mbl (12-25m);
nu apare normal in sangele periferic;

CITOPLASMA:
- abundenta, bazofila;
- zona clara paranucleara;
- numeroase granulatii azurofile (rosii-violet);

NUCLEUL:
- rotund, oval sau in boaba de fasole;
- cromatina fin structurata, putin mai densa
decat la Mbl;
- 1-3 nucleoli (mai putin evidenti cu maturarea
nucleului)
ME:
- aparat Golgi bine dezvoltat, cu 4-9 cisterne
dispuse semicircular in jurul centriolului
GRANULATIILE AZUROFILE (PRIMARE)
- numeroase in promielocite;
- prin agregarea mai multor vacuole pe fata concava
a aparatului Golgi;
- granulatii dense, rotunde, diametrul 0,8;
- culoare rosie vie (mucopolizaharide sulfatate);
- contin enzime si alte substante necesare pentru
fagocitoza (mieloperoxidaza, hidrolaze acide,
proteaze, proteine cationice bactericide – antivirale,
antifungice, antibacteriene);
- rol in degradarea si distrugerea microorganismelor in
fagolizozomi;
- receptori de membrana: CD63, CD66c, CD68.

 GRANULATIILE TOXICE

- sunt granulatii primare persistente;

- apar in neutrofile in cursul infectiilor si
inflamatiilor.
 MIELOCITUL
12-18m (usor mai mic decat promielocitul);
Nu apare normal in sangele periferic.
Este ultima celula capabila de diviziune.

CITOPLASMA:
- slab bazofila;
- granulatiile azurofile inca persista;
- apar granulatiile secundare, specifice.
 
NUCLEUL:
- excentric, rotund sau oval;
- cromatina mai condensata;
- nucleoli mici sau invizibili;

ME:
- granulatii secundare (se formeaza pe fata convexa a
aparatului Golgi);
- reticul endoplasmic, poliribosomi in cantitate redusa
(scaderea bazofiliei);
- mitocondrii mici, putine.
GRANULATIILE SECUNDARE (SPECIFICE)
- productia terminata in stadiul de mielocit;
- fuzioneaza cu veziculele fagocitice
- Receptori de membrana:
- CD15, CD11b, CD66a, CD66b, rec pentru fibronectina, rec
trombospondina, rec TNF, etc.
- Matricea:
- apolactoferina - leaga Fe, efect antibacterian (priveaza bacteriile de Fe
necesar pentru crestere), modifica formarea de radicali hidroxil si adeziunea
celulara;
- colagenaza – degradeaza colagenul si participa la remodelarea tisulara;
- lizozim, 2-microglobulina, gelatinaza, histaminaza, heparinaza, proteina
ce leaga vit 12, sialidaze, fagocitina, citocrom, oxidaza, aminopeptidaze;
- fosfataza alcalina – reactii de citochimie;
- dg NMPC: valori 0 in LMC, in PV,  in infectii. 
 METAMIELOCITUL
10-18m; 0-1% in sangele periferic
 
CITOPLASMA:
- roz pal, cu granulatii specifice;
NUCLEUL:
- incurbat, reniform;
- cromatina mai densa, cu aglomerari de-a lungul membranei
nucleare;
- fara nucleoli

ME:
- reticul endoplasmic, poliribosomi mai putini (sinteza de
proteine este incheiata)
 

GRANULATIILE TERTIARE:
- dezvoltate in stadiul de metamielocit;
- 0,2-0,5 m - tehnici de fractionare subcelulara;
- receptori de membrana: CD11b, citocrom b558, laminina
- matricea: gelatinaza, lizozim, fosfataza acida, etc; nu contin
peroxidaze.
 NESEGMENTATUL

NUCLEUL:
- cromatina condensata;
- in banda, forma de potcoava sau
forma literei “U“; cele doua capete
simetrice;
- una sau mai multe constrictii (legatura
dintre doua zone) care depasesc 1/3 din
grosimea benzii nucleare;

CITOPLASMA:
- granulatii specifice.
 NEUTROFILUL SEGMENTAT
elementul final, matur al seriei;
diametru de 10-15m

CITOPLASMA:
- roz pal, nr mare de granulatii specifice;

NUCLEUL:
- cromatina densa, uniforma
- lobulat, nr de lobi  5; daca 5% din PMN au 5 lobi
nucleari sau daca 1 PMN 6 lobi = hipersegmentare
(caracteristica pentru deficitele de B12 sau acid folic)

CORPUSCULUL BARR – apendice nuclear sexual:

- rotund sau ovalar, diametrul 1-1,5m, atasat unui lob
nuclear printr-un filament“ bat de toba“
- cromatina foarte densa;
- reprezinta unul din cei doi cromozomi X ai femeii;

- diagnosticul sdr intersexuale (sdrTurner, Klinefelter),

precizarea sexului (cel putin 6/500PMN);
 
 NEUTROFILUL SEGMENTAT
GRANULATIILE:

SPECIFICE (SECUNDARE):
- colorate in brun, greu de individulizat;
- uneori formeaza o masa compacta.

PRIMARE (AZUROFILE):
- doar la ME (f rare, au pierdut coloratia specifica);

TERTIARE:
- cele mai mici (tehnici de fractionare subcelulara);

VEZICULE SECRETORII:
- contin hidrolaze transportate din regiunea aparatului Golgi spre granulatiile tertiare;
- receptori de membrana: CD11b, CD10, CD13, CD45, CD16, CD35 (CR 1), fosfataza
alcalina, etc;
- matricea: proteine plasmatice (tetranectine, albumine), etc. 

MICROTUBULI, MICROFILAMENTE:
- rol in endocitoza, secretia lizosomilor, mentinerea formei celulei.
 
  
NEUTROFILUL SEGMENTAT
 La temperatura corpului -miscari amoeboidale (pseudopode):
- celula nestimulata - dezordonate , la intamplare;
- sub influenta factorilor chemotactici - orientate spre o anumita tinta

 METABOLISMUL
- aerob - MblMc;
- anaerob - > Mt (scade numarul de mitocondrii odata cu maturatia,
continutul de glicogen creste si devine sursa de energie pentru
granulocitul matur)

ACTIVITATEA OXIDATIVA:
- esentiala pentru functia bactericida
- apare la Mt, deplin dezvoltata la neutrofilele circulante.
 EXPRESIA AG DE SUPRAFATA PENTRU
SERIA GRANULOCITARA  
 MIELOBLAST:
CD 34+, CD 33+, CD 13+, CD 15+/-, CD 11b-
 
PROMIELOCIT:
CD 34-, CD 33+, CD 13+, CD 15+/-, CD 11b-
 
MIELOCIT:
CD 34-, CD 33+, CD 13+, CD 15+, CD 11b+
 
METAMIELOCIT:
CD 34-, CD 33+, CD 13+, CD 15+, CD 11b+
 
NESEGMENTAT, SEGMENTAT:
CD 34-, CD 33-, CD 13+, CD 15+, CD11b+
 CICLUL DE VIATA AL GRANULOCITELOR
FAZA CELULELOR PROGENITOARE (celule neidentificate morfologic):
- celula stem pluripotenta
- CFC-GEMM;
- CFC-GM;
- CFC-G;
FAZA DE DIFERENTIERE, proliferare, maturare, stocare si eliberare in circulatie a celulelor seriei
granulocitare
  
 

ETAPA MEDULARA – 14 zile:

- procesul de proliferare (6zile), maturare, stocare a celulelor adulte;

ETAPA SANGUINA – 6-9 ore:

- de transport a celulelor mature spre zonele unde sunt necesare;

ETAPA TISULARA – 4-5 zile:

- de exercitare a functiilor specifice.
 COMPARTIMENTUL DE PROLIFERARE (MITOTIC)
Mb, Pr, Mc (formele mai mature – Mt, N, S – nu se mai divid);
Mielocitele sunt cele mai numeroase celule ale acestui compartiment
Simultan cu maturarea apar granulatiile azurofile si neutrofile.
Mb  Pr  Mc  Mt
1div 1-2div 2-4div
Nr total de diviziuni: 4-7; Durata: 6 zile 
12 ore = Timpul de sinteza a ADN (acelasi la toate elementele);
G1 diferita  timp de generare de 18 h la Mb
24 h la Pr
104 h la Mc
6-9 zile = timpul de tranzit al intregului compartiment;
2,6x 10*9 celule /kg corp = marimea compartimentului;
0,85x 10*9 celule / kg corp / zi = productia de neutrofile. 

COMPARTIMENTUL DE MATURARE SI DE REZERVA

Mt, N, S.
2,6-3,6x 10*9celule/kg corp = marimea compartimentului;
6-9 zile (3 zile in cursul infectiilor) = timpul de tranzit;
In MO neutrofilele stau 3 zile (compartimentul de rezerva)
 CINETICA NEUTROFILELOR

2 sectoare de marimi egale, intr-un schimb permanent:

- neutrofilele circulante;
- neutrofilele marginale
Nr total = 0,7x10*9celule /kg corp;
In sange circula ~10% din neutrofilele din MO:
- timpul de tranzit in sange este de 6-9 h;
- eliberarea neutrofilelor din MO se face prin interactiunea cu celulele endoteliale
si membrana bazala a sinusurilor sanguine;
- mediatori ai eliberarii neutrofilelor din maduva:
- TNF , TNF, G-CSF, GM-CSF,C5a;
- factorul de eliberare neutrofilelor din maduva (factor umoral);
umoral);
- IL-1.
 
 CINETICA NEUTROFILELOR
Neutofilele marginale sunt atrase in circulatie:
- de stres, efort fizic, adrenalina;
- corticosteroizi (cresc eliberarea celulelor din rezerva medulara, scad nr de
neutrofile ce ies din vase  favorizeaza infectiile).
 
Iesirea din circulatie – prin venulele postcapilare:
- neutrofilele adera, emit pseudopode si trec prin/printre celulele endoteliale
sensibilizate de reactii inflamatorii sau prin contactul cu neutrofilele;
- neutofilele migreaza catre zonele de maxima expunere a organismului la contactul
cu mediul extern (tract respirator,digestiv, urinar, tegumente);
- supravietuirea in tesuturi este de 4-5 zile;
 REGLAREA GRANULOPOIEZEI
NEUTROFILE
FSC-GM:
- gena crz 5q 23-31;
- greutate moleculara de 22000 daltoni, contine 127 aa;
- produs de Mfage, celule endoteliale, fibroblasti, limfocite T, mastocite;
- productia indusa de TNF, IL-1, endotoxine;
- efect de stimulare a cresterii clonale pe CFC-GEMM, CFC-EB, CFC-MK,
CFC-GM, CFC- Eo;
- asupra CFC-G actioneaza indirect, prin stimularea Mfagelor de a
produce FSC-G;
- sangele venos al adultului contine 20-300 CFC-GM/ml, nou-nascutul 2000
CFC-GM/ml;
- lactoferina si transferina inhiba formarea coloniilor GM-CSF.
 REGLAREA GRANULOPOIEZEI
NEUTROFILELOR
FSC-G:
- gena crz 17q11.2-12 – codifica un polipeptid de 30 aa (secventa semnalizatoare) si o
secventa de 170 aa (FSC-G propriu-zis);
- greutate moleculara de 25000 daltoni;
- produs de Mfage, celule endoteliale, fibroblasti;
- productia este indusa de IL-1, , TNF, endotoxina;
- stimuleaza preponderent formarea de colonii granulocitare (cel mai specific pt
neutrofile);
- actioneaza asupra granulocitelor mature:
- stimuleaza fagacitoza;
- stimuleaza citotoxicitate dependenta de Ac;

- stimuleaza eliberarea de acid arahidonic;

- stimuleaza CS pluripotenta in repaus sa intre in faza G1-S a ciclului celular;
- actiune sinergica cu IL-3 in stimularea formarii de colonii MK
 
 REGLAREA GRANULOPOIEZEI
NEUTROFILELOR

IL-6:
- produsa de Lf T, Mfage, celule endotelile, fibroblasti, osteoblasti;
- are actiune sinergica in productia de neutrofile.
 
FSC-GM, FSC-G:
- normal - concentratii scazute in plasma;
- in stari inflamatorii, infectii, reactii imunologice:
activate Lf T "+" Mfage  eliberare IL-1productia de factori
de crestere de catre celulele endoteliale, fibroblasti.
 
 INHIBAREA GRANULOPOIEZEI

PG-E:
- produsa de Mfage cand creste concentratia de FSC-GM:
- inhiba FSC-GM la nivel de CFC-GM;
- autoreglare la nivel de Mfage.
Neutrofilele au efect inhibitor pe precursorii granulocitari din compartimentul de
proliferare (feedback)
In cursul infectiilor bacteriene stimuli de descarcare a neutrofilelor din rezervele
medulare

Corticosteroizii
- cresc neutrofilele in circulatie prin:
- cresterea eliberarii din rezervele medulare;
- impiedicarea iesirii din vase in tesuturi (risc de infectii);
- cresterea timpului de tranzit la 10h.
 
 
 SERIA GRANULOCITARA EOZINOFILA
- origine in CFC-Eo
- Mbl, Pr – ca la granulocitele neutrofile;
- aparitia granulatiilor specifice eozinofile in stadiul de
Mc permite diferentierea celulelor

MIELOCITUL EOZINOFIL
- nu difera ca forma, marime si aspectul nucleului de Mc neutrofil
- diferentiere - granulatiile eozinofile: mari, egale, rotunde, rosii-portocalii.

GRANULATIILE EOZINOFILE:

- diametrul 0,5-1,5m;
- corp central dens, cristalin - proteina bazica majora (bogata in arginina, leziuni miocard);
- matrice mai putin densa - proteina cationica eozinofila (leziuni epiteliu respirator; fenomene trombo-embolice
prin activare plasminogen, factor Hagemann);
- neurotoxina derivata din Eo;
- peroxidaza Eo (diferita de MPO, actiune helmintoxica);
- membrana cu dublu contur.

 
 SEGMENTATUL EOZINOFIL
NUCLEUL:
-  doi lobi (bisac); > 2 lobi sugereaza celula activata (infectii
parazitare);

CITOPLASMA:
-  ~200 granulatii specifice/celula, diametrul de 0,3-0,7m,
ocupa intreaga citoplasma;

RECEPTORI DE SUPRAFATA:
- pt Ig A,G,D,E, pt mediatori solubili PAF, LT B4, IL-5, pt unele
fractiuni ale complementului-C3b, C4
- receptori de adeziune (integrine,selectine) cu rol in migrarea
in spatiul extravascular ICAM-1, ELAM-1,VLAM-1
- receptori pentru proteinele matricei extracelulare
(fibronectina, colagen, hialuronat);

MEMBRANA PLASMATICA:
- bogata in lizofosfolipaze:
 cristalele Charcot Leyden (dezintegrarea masiva a Eoz);
 PG pe calea ciclo-oxigenazei
 CICLUL DE VIATA AL EOZINOFILELOR

- 11 zile = timpul de generare al eozinofilelor;

- 2,5 zile = durata compartimentului postmitotic;
- 3-8 ore circula in sange, apoi migreaza in tesuturi (in zonele
de contact cu mediul exterior: tegumente, tract respirator,
digestiv, ganglioni, etc);
- 100-400/l = nr de eozinafile din sange (1% din totalul de Eo
din organism)
- cateva saptamani = durata de viata in tesuturi;
- factori chemotactici pentru Eo: IL-3, IL-5, IL-8; PAF; C5a. 
    REGLAREA PRODUCTIEI DE EOZINOFILE
IL-1: "+" proliferarea celulelor progenitoare timpurii;
 
IL-3: "+"proliferarea celulelor progenitoare timpurii;
"+"supravietuirea eozinofilelor in sange;
“+” productia de leucotriene;
"+"citotoxicitatea dependenta de Ac.
 
IL-5 = factorul de crestere al Lf B;
- produs de Lf T CD4+;
- gena cr 5q;
"+" proliferarea celulelor progenitoare CFC-Eo si maturarea Eo;
- factor chemotactic pentru eozinofile;
- stimuleaza citotoxicitatea dependenta de Ac si cea mediata celular;
- stimuleaza degranularea indusa de Ig;
 
FSC-GM: actioneaza pe progenitorul eozinofil
 SERIA GRANULOCITARA BAZOFILA
CFC-Ba este ultima din sirul de celule precursoare care s-a diferentiat ireversibil din celula
pluripotenta;
Diferentierea Ba si mastocitelor este indusa de o citokina (kit-ligant) produsa de celule
endoteliale si stromale;
Mbl, Pr nu au caractere distinctive fata de omologul lor din seria neutrofila.

MIELOCITUL BAZOFIL

Apar granulariile specifice bazofile:

- albastru violet (coloratie metacromatica),
dimensiuni si forme variabile,
- acopera, fac invizibil nucleul;
- sunt solubile, pot fi indepartate in cursul
colorarii, raman spatii goale, rotunde,
colorate slab in rosu (bazofil spalat);
- contin heparina, histamina (au afinitate
mare pentru colorantii bazici).
 SEGMENTATUL BAZOFIL
- diametru de 10-15m (in tesuturi mastocitele
20m)
- sute de granulatii specifice metacromatice,
mari dispuse si peste nucleu
 

GRANULATIILE BAZOFILE:
- mediatori vasoactivi, bronhoconstrictori:
- histamina;
- produsi de degradare ai acidului arahidonic (LT, PG);

- factori chemotactici pentru eozinofile, neutrofile;

- enzime active: chimaza, kalikreina, -glucuronidaza, heparina

- Mediatorii – preformati sau sintetizati ca urmare a unui stimul;

- rol in reactiile inflamatorii si imunologice.
 
 
Degranularea produsa de stimuli:
- imuni (Ig E, stimulare cu anafilatoxina);
- neimuni (enzime, proteoglicani, opiacee, substante de contrast radiologice, ACTH,
vit A, dextrani).
 
Stimularea Ig E dependenta
 degranulare relativ lenta (5-7');
 necesita prezenta Ca extracelular;
 eliberare de meditori preformati (histamina, proteaze);
 generare de PG D2, LTC4 (neosintetizate).

Bazofilia > 150/ul:

- insoteste cresteri Ig E: colita ulceroasa, artrita reumatoida, urticarie, mixedem, dupa
splenectomie 
 MASTOCITELE

Bazofilele si mastocitele sunt inrudite prin trasaturi

morfologice (granulatiile bazofile ) si citochimice
( histamina, rec Ig E )
Elemente de diferentiere:
- mastocitele - celule tisulare, nu circula prin sange
- au durata de viata mai lunga
- mai mari, nucleu nesegmentat,
- granulatii mai mici,
numeroase
Produse in maduva (CF-Ma), ajung in tesuturi prin
sange
Localizate teg, tractului respirator, tractului gastro-
intestinal, membrane bazale epiteliale si endoteliale
  In plaman, piele ~1-10x10*6 celule/gr tesut
 CICLUL DE VIATA AL BAZOFILULUI

CFU-Ba - "+" IL-3, IL-4;

- IL-4 - derivata din Lf T;
- gena cr 5q;
- FSC-GM, F-CS (factorul CS), IL-5 (rol
in diferentirea Eo si Ba);
- TGF- (supreseaza Eo, creste
diferentierea Ba in prezenta IL-3).