Universitatea Dunărea de Jos, Galați

Facultatea de Știința și Ingineria Alimentelor

Controlul expertizarea și siguranța alimentelor

ELECTROFOREZA
ACIZILOR NUCLEICI


Studentă: Dobrică Iulia-Georgiana

Anul I, Master
 Definiție

 Electroforeza reprezintă o metodă de separare,
identificare și purificare a acizilor nucleici și descrie
procesul de migrare a particulelor ionizate într-un câmp
electric.
 Sarcina electrică a acizilor nucleici este negativă, astfel
separarea lor se face în funcție de dimensiunea
fragmentului analizat care este dată de numărul de perechi
de baze care îl formează. ( perechi de baze sau kilo pb)
 Tipuri de electroforeze folosite

 În gel de agaroză
 În gel de poliacrilamidă(PAAG)
 În câmp pulsatil
 Capilară
 Electroforeza în gel de agaroză

 Electroforeza în gel de agaroză constituie o metodă standard pentru separarea,
purificarea şi identificarea moleculelor de ADN, inclusiv din amestecuri de unde
acestea nu pot fi separate adecvat prin alte tehnici.
 Concentrația gelului de agaroză se alege în funcție de lungimea fragmentelor vizate
iar în funcție de aceasta, se pot separa fragmente de la 100pb la 50kpb.
 Acest tip de electroforeză se realizează în plan orizontal, gelul fiind imersat în
soluție tampon iar avantajele acestei tehnici este că ADN-ul nu este denaturat,
păstrându-și intacte elementele structurale.
 Verificarea integrită ții ARN-ului prin electroforeză
în gel de agaroză


 La pH alcalin sau neutru, acizii nucleici au sarcina electrică globală
negativă. Ca urmare, dacă sunt plasaţi într-un câmp electric, moleculele
acestora vor migra către anod.
 Stabilitatea moleculelor de ARN este mult mai scăzută în comparaţie cu
ADN, astfel moleculele de ARN prezintă un procent crescut de structuri
secundare la nivelul conformaţiei, fapt care impune folosirea unui gel
denaturant pentru evidenţiere. Formaldehida, care are rolul de agent
denaturant, distruge legăturile secundare astfel migrarea moleculelor de
ARN se realizează doar pe baza sarcinii şi masei moleculare a acestora.
Acest tip de electroforeză asigură doar separarea şi evidenţierea
moleculelor mari de ARN (ARN ribozomal).
 Vizualizarea ARN se realizează utilizând bromura de etidiu.
 Electroforeza în gel poliacrilamidă

 Electroforeza în gel de poliacrilamidă
se realizează în poziție verticală și se
bazează pe fenomenul migrării unor particule
încărcate electric, într-un mediu lichid sau fixat
pe suport solid, sub acţiunea unui câmp electric
extern.
 Puterea de rezoluție este mare putând fi
separate fragmente de ADN mici (5-500 pb) şi
foarte apropiate ca mărime.
 Electroforeza în câmp pulsatil


 Fragmentele ADN cu o lungime de peste 15-20kpb se separă
prin schimbarea direcției câmpului electric care conferă
moleculelor direcții suplimentare de deplasare, astfel acestea
să aibă o cale prin gel. Tensiunea este în general comutată în 3
direcții:
 Una care rulează de-a lungul axei gelului
 Și două la 60° față de ambele părți ale axei.
 Electroforeza capilară

 Oferă avantajul automatizării
complete
 Fragmentele de acizi nucleici sunt
separate electroforetic în capilare
individuale distribuite intr-un
format paralel
 Timpul de intervenție este redus –
necesită doar un singur pas de
diluție în placa de analiză.
 Avantajele electroforezei

 Este o metodă simplă și rapidă


 Permite vizualizarea directă a
fragemntelor ADN folosind un
colorant intercalar fluorescent
(Bromură de etidiu)
 Dacă este necesar ADN-ul ce formează
benzile poate fi recuperat din gel și
analizat suplimentar prin alte metode
(clonare, aplificare, secvențiere etc.)
 Determinarea marimii fragmentelor
se face uzual prin compararea cu
“DNA-ladders” ce contin fragmente
liniare de ADN, de lungimi cunoscute
 Bibliografie


 https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0925400517312716
 http://
pro-decizii-informate.ro/wp-content/uploads/2015/07/Lucrari-practice-Biochi
mia-acizilor-nucleici-si-biologie-moleculara-2009.pdf
 https://biochimiero.files.wordpress.com/2017/12/l6-electroforeza-adn-ului.pdf
 http://
www.uaiasi.ro/POSCCE/Rubusselect/files/ELABORAREA%20SI%20OPTIMI
ZAREA%20METODOLOGIEI%20DE%20CERCETARE.pdf
