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¢a microscopía es la
técnica de producir
imágenes visibles de
estructuras o detalles
demasiado pequeños
para ser percibidos a
simple vista. En este
campo ha habido gran
impulso por parte de
la física.

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Vn microscopio óptico es un
microscopio basado en lentes
ópticas que nos permiten
observar objetos de puequeño
tamaño. El desarrollo de este
aparato suele asociarse con los
trabajos de Anton van
¢eeuwenhoek.
¢os microscopios de este tipo
generalmente producen un
aumento de 1000 veces el
tamaño original. El límite lo
tienen en unas 2000 veces. á


 


 

 













 

 

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º ¢as lentes de un microscopio óptico son el
condensador, el objetivo y el ocular.
º ¢a luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre
la preparación y para esto se utiliza el condensador.
Elevando o bajando el condensador puede alterarse
el plano del foco de luz y elegirse una posición que
consiga el foco preciso.
º El objetivo es la lente situada cerca del objeto que
se observa. El aumento primario del objeto es
producido por la lente objetivo y la imagen se
transmite al ocular.
º En el ocular se realiza el aumento final.

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º Es importante recordar que un microscopio, aparte
de tener la capacidad de dar AV ENTO al tamaño
de la imagen de la muestra, también tiene PODER
RESO¢VTIVO, esto es la capacidad de mostrar
distintos y separados dos puntos muy cercanos.
º Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la
definición de un objeto. ¢os microscopios de gran
poder resolutivo son especialmente buenos para ver
pequeñas estructuras.

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º El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz
muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el
espécimen.
º El objeto iluminado dipersa la luz y se hace así visible contra el
fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación
cerrada.
º ¢as porciones transparentes del espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y partículas se ven brillantes.
º Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos
biológicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con
iluminación normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla.
º También es bastante utilizado en la observación de muestras
metalográficas para la observación de detalles en superficies
con alta reflectancia.

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El microscopio de fluorescencia es una variación del
microscopio óptico, dotado de luz ultravioleta en el que los
objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud
de onda.
¢a imagen observada es el resultado de la radiación
electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido
la excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud
de onda.
Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben
colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima
del objetivo.
Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia
(vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.
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º Es un microscopio óptico modificado que permite contrastar

sustancias de diferente grosor o densidad.
º ediante un condensador y un objetivo especial se controla
la iluminación de tal manera que vaya en diferentes rutas a
través de las distintas partes de una célula.
º El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y
oscuridad.
º Con este método, el material denso aparece brillante,
mientras que las partes de la célula que tienen una densidad
cercana al agua (citoplasma) aparecen oscuras.
º Se utiliza para visualizar estructuras celulares sin necesidad
de usar colorantes o matar microorganismos.
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º El þ

 


es en principio un
microscopio óptico que incluye como fuente de luz
un láser y un sistema electrónico que ayuda a la
captación de imágenes.
º Debido a esto, el microscopio confocal consigue un
aumento en la resolución y obtener imágenes de
secciones ópticas extremadamentes finas,
eliminando así la interferencia que produce la luz
que llega de los diferentes campos ópticos de todo
el grosor de la muestra que se observa,
consiguiendo así que el enfoque se realice sobre un
único plano (confocal).
º ¢as imágenes obtenidas son digitales.
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º En el 

 


 la luz se
sustituye por un haz de electrones que pasan
por un tubo (con vacío para mejorar el paso
de los electrones).
º Permite la observación de las estructuras
interiores de las células.
º Sirve para visualizar virus.
º Tiene una resolución de 10 A (se pueden ver
objetos muy pequeños, incluyendo algunas
moléculas).
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º Vn haz de electrones es lanzado por un cañón en el
que se establece una diferencia de potencial, entre
el cátodo y el ánodo.
º El chorro de electrones pasa a través de la muestra
a observar, que está colocada en una rejilla.
º ¢os electrones chocan con la muestra y se desvían, y
estas desviaciones son recogidas por la pantalla.
º Observamos la imagen a través de una pantalla que
es excitada por los electrones que llegan a ella
(mecanismo similar a la televisión). ¢as imágenes
las recogemos mediante una placa fotográfica que
es impresionada directamente por los electrones.
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º En un microscopio óptico, la potencia amplificadora
está limitada por la longitud de onda de la luz
visible.
º El microscopio electrónico utiliza electrones para
iluminar un objeto; los electrones tienen una
longitud de onda mucho menor que la de la luz, y
pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas.
º ¢a longitud de onda más corta de la luz visible es de
alrededor de 4.000 ángstroms (1 ángstrom es
0,0000000001 metros). ¢a longitud de onda de los
electrones que se utilizan en los microscopios
electrónicos es de alrededor de 0,5 ángstroms.
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º Es importante el vacío
dentro del cañón del
microscopio electrónico,
ya que ¢os electrones
pueden ser desviados
por las moléculas del
aire, de forma que
tiene que hacerse un
vacío casi total en el
interior de un
microscopio de estas
características.
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º Existen dos tipos básicos de

microscopio electrónico:

º 1. icroscopio electrónico de transmisión

(TE )
º 2. icroscopio electronico de barrido
(SE )

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º Principio de funcionamiento:
º El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de
electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar.
º Vna parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el
objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de
la muestra.
º Para utilizar un microscopio electrónico de transmisión debe
cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles
de ángstroms.
º ¢os microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un
objeto hasta un millón de veces.
º El primer microscopio electrónico de transmisión fue desarrollado
entre 1931 y 1933 por Ernst Ruska y sus colaboradores.
º El primer microscopio electrónico de transmisión comercial lo
construyó la compañía Siemens en 1939.

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º El microscopio electrónico de barrido o SE
(Scanning Electron icroscopy), es un microscopio
que tiene una gran profundidad de campo, la cual
permite que se enfoque a la vez una gran parte de
la muestra.
º Produce imágenes de alta resolución, que significa
que características espacialmente cercanas en la
muestra pueden ser examinadas a una alta
magnificación.
º ¢a preparación de las muestras es relativamente
fácil pues la mayoría de SE s sólo requieren que
estas sean conductoras.
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º En el microscopio electrónico de barrido la muestra
es recubierta con una capa de metal delgado, y es
barrida con electrones enviados desde un cañón.
º Vn detector mide la cantidad de electrones
enviados que arroja la intensidad de la zona de
muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres
dimensiones, proyectados en una imagen de TV.
º Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del
microscopio.
º Inventado en 1981 por Ernst Ruska, Gerd Binnig y
Heinrich Rohrer.
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º Vn microscopio electrónico de barrido crea una imagen
ampliada de la superficie de un objeto.
º No es necesario cortar la muestra en capas, sino que puede
colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos.
º El SE explora la superficie de la imagen punto por punto.
º Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz
muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido
de un haz de electrones por la pantalla de una televisión.
º ¢os electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o
provocar la aparición de electrones secundarios. ¢os electrones
perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un
dispositivo electrónico situado a los lados del espécimen.

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º Cada punto leído de la muestra corresponde a un píxel en un

monitor de televisión. Cuanto mayor sea el número de
electrones contados por el dispositivo, mayor será el brillo del
píxel en la pantalla.
º A medida que el haz de electrones barre la muestra, se
presenta toda la imagen de la misma en el monitor.
º ¢os microscopios electrónicos de barrido pueden ampliar los
objetos 100.000 veces o más.
º Este tipo de microscopio es muy útil porque produce imágenes
tridimensionales realistas de la superficie del objeto.

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º Son ampliamente utilizados en la biología celular.

º Aunque permite una menor capacidad de aumento que el microscopio
electrónico de transmisión, permite apreciar con mayor facilidad
texturas y objetos en tres dimensiones que hayan sido pulverizados
metálicamente antes de su observación.
º Por esta razón solamente pueden ser observados organismos muertos,
y no se puede ir más allá de la textura externa que se quiera ver.
º ¢os microscopios electrónicos sólo pueden ofrecer imágenes en blanco
y negro puesto que no utilizan la luz.
º Este instrumento permite la observación y caracterización superficial
de materiales inorgánicos y orgánicos, entregando información
morfológica del material analizado.

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